食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定
1范围
本标准规定了食品中黄曲霉毒素B1二黄曲霉毒素B2二黄曲霉毒素G1二黄曲霉毒素G2(以下简称A F TB1二A F TB2二A F T G1和A F T G2)的测定方法三
本标准第一法为同位素稀释液相谱-串联质谱法,适用于谷物及其制品二豆类及其制品二坚果及籽类二油脂及其制品二调味品二婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中A F TB1二A F TB2二A F TG1和A F TG2的测定三 本标准第二法为高效液相谱-柱前衍生法,适用于谷物及其制品二豆类及其制品二坚果及籽类二油脂及其制品二调味品二婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中A F T B1二A F T B2二A F T G1和A F T G2的测定三
本标准第三法为高效液相谱-柱后衍生法,适用于谷物及其制品二豆类及其制品二坚果及籽类二油脂及其制品二调味品二婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中A F T B1二A F T B2二A F T G1和A F T G2的测定三
本标准第四法为酶联免疫吸附筛查法,适用于谷物及其制品二豆类及其制品二坚果及籽类二油脂及其制品二调味品二婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中A F TB1的测定三
本标准第五法为薄层谱法,适用于谷物及其制品二豆类及其制品二坚果及籽类二油脂及其制品二调味品中A F TB1的测定三
第一法同位素稀释液相谱-串联质谱法
2原理
试样中的黄曲霉毒素B1二黄曲霉毒素B2二黄曲霉毒素G1二黄曲霉毒素G2,用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液提取,提取液用含1%T r i t o nX-100(或吐温-20)的磷酸盐缓冲溶液稀释后(必要时经黄曲霉毒素固相净化柱初步净化),通过免疫亲和柱净化和富集,净化液浓缩二定容和过滤后经液相谱分离,串联质谱检测,同位素内标法定量三
3试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水三
3.1试剂
防喷器试压
3.1.1乙腈(C H3C N):谱纯三
3.1.2甲醇(C H3O H):谱纯三
3.1.3乙酸铵(C H3C O O N H4):谱纯三
3.1.4氯化钠(N a C l)三
3.1.5磷酸氢二钠(N a2H P O4)三
3.1.6磷酸二氢钾(K H2P O4)三
3.1.7氯化钾(K C l)三
3.1.8盐酸(H C l)三
3.1.9 T r i t o nX-100[C14H22O(C2H4O)n](或吐温-20,C58H114O26)三
3.2试剂配制
3.2.1乙酸铵溶液(5mm o l/L):称取0.39g乙酸铵,用水溶解后稀释至1000m L,混匀三
3.2.2乙腈-水溶液(84+16):取840m L乙腈加入160m L水,混匀三
3.2.3甲醇-水溶液(70+30):取700m L甲醇加入300m L水,混匀三
3.2.4乙腈-水溶液(50+50):取50m L乙腈加入50m L水,混匀三
3.2.5乙腈-甲醇溶液(50+50):取50m L乙腈加入50m L甲醇,混匀三
3.2.610%盐酸溶液:取1m L盐酸,用纯水稀释至10m L,混匀三
3.2.7磷酸盐缓冲溶液(以下简称P B S):称取8.00g氯化钠二1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢二钠)二0.20g磷酸二氢钾二0.20g氯化钾,用900m L水溶解,用盐酸调节p H至7.4?0.1,加水稀释至1000m L三
3.2.81%T r i t o nX-100(或吐温-20)的P B S:取10m LT r i t o nX-100(或吐温-20),用P B S稀释至1000m L三3.3标准品
3.3.1 A F TB1标准品(C17H12O6,C A S:1162-65-8):纯度?98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质三
3.3.2 A F TB2标准品(C17H14O6,C A S:7220-81-7):纯度?98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质三
3.3.3 A F T G1标准品(C17H12O7,C A S:1165-39-5):纯度?98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质三
3.3.4 A F T G2标准品(C17H14O7,C A S:7241-98-7):纯度?98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质三
3.3.5同位素内标13C17-A F TB1(C17H12O6,C A S:157449-45-0):纯度?98%,浓度为0.5μg/m L三3.3.6同位素内标13C17-A F TB2(C17H14O6,C A S:157470-98-8):纯度?98%,浓度为0.5μg/m L三3.3.7同位素内标13C17-A F T G1(C17H12O7,C A S:157444-07-9):纯
度?98%,浓度为0.5μg/m L三3.3.8同位素内标13C17-A F T G2(C17H14O7,C A S:157462-49-7):纯度?98%,浓度为0.5μg/m L三
注:标准物质可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液三
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备溶液(10μg/m L):分别称取A F TB1二A F TB2二A F TG1和A F TG21m g(精确至0.01m g),用乙腈溶解并定容至100m L三此溶液浓度约为10μg/m L三溶液转移至试剂瓶中后,在-20?下避光保存,备用三临用前进行浓度校准(校准方法参见附录A)三
矫眼镜
3.4.2混合标准工作液(100n g/m L):准确移取混合标准储备溶液(1.0μg/m L)1.00m L至100m L容量瓶中,乙腈定容三此溶液密封后避光-20?下保存,三个月有效三
3.4.3混合同位素内标工作液(100n g/m L):准确移取0.5μg/m L13C17-A F TB1二13C17-A F TB2二13C17-
自控温伴热电缆
A F T G1和13C17-A F T G2各2.00m L,用乙腈定容至10m L三在-20?下避光保存,备用三
3.4.4标准系列工作溶液:准确移取混合标准工作液(100n g/m L)10μL二50μL二100μL二200μL二500μL二800μL二1000μL至10m L容量瓶中,加入200μL100n g/m L的同位素内标工作液,用初始流动相定容至刻度,配制浓度点为0.1n g/m L二0.5n g/m L二1.0n g/m L二2.0n g/m L二5.0n g/m L二8.0n g/m L二
10.0n g/m L的系列标准溶液三
4仪器和设备
视频显示器4.1匀浆机三
4.2高速粉碎机三
4.3组织捣碎机三
4.4超声波/涡旋振荡器或摇床三
4.5天平:感量0.01g和0.00001g三
4.6涡旋混合器三
4.7高速均质器:转速6500r/m i n~24000r/m i n三
4.8离心机:转速?6000r/m i n三
4.9玻璃纤维滤纸:快速二高载量二液体中颗粒保留1.6μm三
4.10固相萃取装置(带真空泵)三
4.11氮吹仪三
4.12液相谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源三
4.13液相谱柱三
4.14免疫亲和柱:A F TB1柱容量?200n g,A F TB1柱回收率?80%,A F TG2的交叉反应率?80%(验证方法参见附录B)三
注:对于不同批次的亲和柱在使用前需进行质量验证三
4.15黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱或功能相当的固相萃取柱(以下简称净化柱):对复杂
x射线探测器基质样品测定时使用三
4.16微孔滤头:带0.22μm微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可使用)三4.17筛网:1mm~2mm试验筛孔径三
4.18p H计三
5分析步骤
使用不同厂商的免疫亲和柱,在样品上样二淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同,应该按照供应商所提供的操作说明书要求进行操作三
警示:整个分析操作过程应在指定区域内进行三该区域应避光(直射阳光)二具备相对独立的操作台和废弃物存放装置三在整个实验过程中,操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施三
卷钉
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