2351黄曲霉毒素真菌毒素测定法

2351
本法适用于药材、饮片及中药制剂中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏马毒素B1、B2及T-2毒素的测定。除另有规定外,按下列方法测定。
度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度2500 4000转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取续滤液20.0ml离心10分钟(离心速度4000转/分钟),精密量取上清液20ml,通过免疫亲合柱,流速每分钟3ml,用水20ml洗脱(必要时可以先
用淋洗缓冲液10ml洗脱,再用水10ml洗脱),弃去洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.22μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,注入液相谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准
以三重四极杆串联质谱仪检测;电喷雾离子源(ESI),采集模式为正离子模式;各化合物监测离子对和碰撞电压(CE)见下表。
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2对照品的监测离子对、碰撞电压(CE)参考值
编号中文名英文名母离子子离子
CE
跳线帽(V)
ic自动烧录机
检出限CH3(CH2)6COOH
(μg/kg)
定量限
(μg/kg)
1 黄曲霉毒素G2Aflatoxin G2331.1 313.1 33
金属手铐脚镣0.10.3 331.1 245.1 40
2 黄曲霉毒素G1Aflatoxin G1329.1 243.1 35
0.10.3 329.1 311.1 30
315.1 259.1 35
钠8.0g、氯化钾0.2g,加水溶解并稀释至1000ml。
(4)酶标抗原稀释液在(1)中加入8mg牛血清白蛋白,即得。
(5)洗涤工作液在(1)中加入0.5ml吐温-20,即得。
(6)底物缓冲液称取柠檬酸21.0g,加水溶解并稀释至1000ml,作为甲液;称取十二水合磷酸氢二钠28.4g,加水溶解并稀释至1000ml,作为乙液;量取甲液24.3ml,乙液25.7ml,加水稀释至100ml。
(7)底物显液称取四甲基联苯胺10mg溶于1ml二甲基甲酰胺,量取5μL,加入底物缓冲液10ml、30%过氧化氢10μL,混匀即得。
(8)终止液量取108.7ml浓硫酸,缓慢加入水中,冷却至室温后,加水稀释至1000ml。
标准品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素B1标准品溶液,用磷酸盐缓冲液稀释成每1L含0μg、0.05μg、0.15μg、0.45μg、1.35μg(测定黄曲霉毒素B1)或0μg、0.025μg、0.075μg、0.225μg、0.675μg(测定黄曲霉毒素总量)的系列标准品溶液,即得。
供试品溶液的制备称取供试品粉末约2.0g至50ml离心管中,加入20ml 甲醇,振荡5分钟,室温(20~25℃)下以每分钟3000转离心5分钟,取2ml上清液至10ml干净离心管中,于50~60℃水浴氮气
流下吹干,加入2ml去离子水涡动30秒,再加入6ml振荡2分钟,室温下以每分钟3000转离心5分钟,取下层液3ml至10ml离心管中,置氮吹仪上于50~60℃水浴浓缩至干,加入1ml正己烷涡旋30秒,再加入2ml磷酸盐缓冲液涡旋1分钟,室温下以每分钟3000转离心5分钟,取下层液,即得。
测定法黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素总量的测定:分别采用合适浓度的抗体包被微孔板孔,经封闭、干燥等处理后加入系列标准品溶液,再加入经酶标抗原稀释液稀释至合适工作浓度的酶标抗原,混匀,于25℃反应45分钟,用洗涤工作液洗涤,每孔加入底物显液100μL,于25℃反应15分钟,每孔加入终止液50μL,采用酶标仪于450nm处,参比波长630nm,测定每孔吸光度值,按下式计算百分吸光率:
自制自慰器激发波长λex=333nm,发射波长λex=477nm。理论板数以赭曲霉毒素A计应不低于4000。
手指灯对照品溶液的制备精密称取赭曲霉毒素A对照品适量,用甲醇制成浓度为每1ml含2.5ng的溶液,即得。

本文发布于:2024-09-22 11:25:00,感谢您对本站的认可!

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