高考生物二轮复习学案
自主梳理·再夯基础
1. (2022·江苏高考仿真模拟调研)科研工作者在盐碱地中到了一种生长良好且耐盐碱的植物(以下简称植物a)。研究人员发现，植物a微机消谐器
的液泡膜上特有一种Na＋/K＋逆向转运蛋白，这种蛋白是植物a耐盐碱的原因，并在植物a中到控制该蛋白合成的Na＋/K＋逆向转运蛋白基因 (TaNHX2基因)。该基因就是研究人员要的耐盐碱的目的基因。研究人员进一步获得了如下图所示的物质结构。拟利用这些材料，用基因工程技术培育转基因棉花。 含有目的基因的DNA片段
农杆菌Ti质粒结构示意图
注：Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，Sau3AⅠ、BamHⅠ切割形成的黏性末端相同。
用基因工程技术培育转基因棉花的操作程序包括四个步骤：
(1) 目的基因的获取：将植物a不同基因的DNA片段导入受体菌的体中储存，再根据目的基因的特定序列从受体菌中提取该基因，这种获取目的基因的方法称为 。
(2) 构建基因表达载体：计划用EcoRⅠ分别切割上图中DNA片段和上图所示质粒，以构建基因表达载体。 ①构建表达载体除限制酶外还需要的工具酶是________；
②本方案的缺陷是：可能导致______________________以及目的基因与质粒的反向连接。
③为避免上述缺陷，最佳方案是用______________切割上图的DNA片段，用____________切割上图质粒。
(3) 将________导入受体细胞。成功导入受体细胞后，还需要利用________技术才能得到转基因棉花幼苗，这一技术的原理是 。
(4) 目的基因的检测与鉴定：要在个体生物学水平上检测耐盐新品种的培育效果，检测方法是 。
2. (2022·南京、盐城一模)研究发现人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科学家培育出转人溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提取)，过程如下图所示。其中编号①～⑨表示过程；质粒S中的基因Leu通过控制相关酶的合成而影响亮氨酸的合成(亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必需氨基酸)，基因GFP控制合成绿荧光蛋白。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。请回答下列问题。
限制酶 | BamHⅠ | BglⅡ | HindⅢ | XbaⅠ |
识别序列和切割位点 | G↓GATCC | A↓GATCT | A↓AGCTT | T↓CTAGA |
| | | | |
(1) 物质A控制溶菌酶的合成包括转录和翻译两个阶段，涉及的场所主要有______________。
(2) 过程金刚石磨头①通过PCR技术扩增物质一次性浴缸套A，需要的酶是________；过程②需要的限制酶是____________；过程③需要的酶是限制酶和______________。
(3) 为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞，质粒S中用作标记基因的是________和________。为达到筛选目的，培养基的营养成分中应不含有________。将成纤维细胞培养一段时间后观察，筛选出________(选填新型秸秆气化炉“显示”或“不显示”)绿荧光的细胞用于过程⑤。
(4) 过程④常用________法，过程⑨为________，图中早期胚胎的________(结构)将发育成转基因羊。
考向引领·核心突破
核心考点1 考查基因工程的基本理论
高考对该热点的考查形式为选择题或非选择题，主要命题方向：
1. 结合基因工程基本概念的理解及基本操作工具的作用，考查科学思维能力。
2. 联系转基因技术的安全性实例，考查社会责任。
(煤矿井下防爆电机2014·江苏卷·23)(多选)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是( )
A. 切割质粒的限制酶均特异性地识别6个核苷酸序列
B. PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
C. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因
D. 抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染体上也未必能正常表达
笔记：
1. 基因工程的三大操作工具
| 限制性内切核酸酶 | DNA连接酶 | 载体 |
作用 | 切割目的基因和载体 | 拼接DNA片段，形成重组DNA分子 | 携带目的基因进入受体细胞 |
作用 特点 | 识别特定的核苷酸序列； 在特定位点上切割DNA分子 | 能连接黏性末端和平末端 | 能在宿主细胞内稳定存在并大量复制； 有一个至多个限制酶切割位点； 具有特殊的标记基因 |
| | | |
2. 认识PCR技术
(1) 原理：体外DNA复制。
(2) 需要条件：模板DNA、2种引物、4种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。
(3) 过程：DNA受热(90～95 ℃)变性解旋为单链，冷却(55～60 ℃)后引物与单链相应互补序列结合(复性)，然后在DNA聚合酶作用下延伸(70～75 ℃)合成互补子链。
3. 理解基因表达载体
1. (2022·南通四模)递减 PCR 是常规 PCR 技术的发展，下图表示递减 PCR 各阶段温度及时间控制。相关叙述错误的是( )
A. PCR 反应体系中应加入 Taq 酶、模板 DNA 、dNTP、引物、缓冲液等物质
B. 第1阶段的目的是使模板 DNA 充分解旋，减少 DNA 复杂结构对扩增的影响
煤矿井下定位设备
C. 第2阶段中退火温度较高可减少引物与模板链的非特异性结合，为第 3 阶段提供更多正确的模板
D. 第4阶段 72 ℃下维持 10 min，主要目的是使子链与互补模板链结合形成双螺旋
2. (2022·南京师大附中开学考试)(多选)载体是基因工程中携带外源 DNA 片段(目的基因)进入受体细胞的重要运载工具，常见的载体类型主要有基因克隆载体和基因表达载体。下图是利用细菌生产人胰岛素的基本流程示意图。下列相关叙述正确的是( )
A. 重组载体A、重组载体B分别是基因克隆载体和基因表达载体
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