集团标准化办公室:[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]
免疫荧光步骤
免疫荧光步骤
1.脱蜡和水化?
脱蜡前,应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10min,更换二甲苯后再浸泡10min;2)无水乙醇中浸泡5min;3)95%乙醇中浸泡5min;4)70%乙醇中浸泡5min;(动作要快,减少暴露在空气中中的时间) 红薯粉生产设备
2.PBS洗两次各5min。(整个过程中注意切片不能干可乐杯)人工熊胆
3.抗原修复,用于多聚甲醛固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加热?0.01M柠檬酸钠缓冲溶液(pH6.0)至95℃左右,放入组织芯片加热10min,必须等缓冲液冷却后,方能将切片取出。
4.PBS洗3次每次5min。
5.滴加5%正常山羊血清,室温封闭30min,甩去多余液体。
6.滴加一抗(根据说明书的比例稀释,一般为1:100),室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(4℃过夜后在37℃复温45min)。
7.PBS洗3次每次5min。
8.滴加荧光标记的二抗,室温避光孵育1h。(注意抗体针对的种属,使用浓度,用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。)
9.PBS洗3次每次5min。
虹膜识别设备10.DAPI染:把DAPI滴在片上,将切片覆盖,50ul/片,染10min。
排屑装置
11.PBS洗3次每次2min。
自锁器12.封片:抗荧光淬灭封片剂封片,再拍照。