项目基金：洛阳市科技重大专项--绿高效新兽药关键技术的研究与产业化（1901024A）
通脉汤
作者简介：桑卡娜（1990—），女，河南驻马店人，兽医师，硕士，主要从事新兽药研发，药理毒理等研究，E-mail：1027187483@qq
桑卡娜*，李召斌，卞愧，晏磊
（国家兽用药品工程技术研究中心/洛阳惠中兽药有限公司河南洛阳471003
）
文阐述比较研究了为实验室提供手工制备大小鼠饲料的材料及方法。采用手动压面机和一次性注射器结合，制备简单实用的饲料加工装置。将购入的大小鼠饲料粉碎后加入适量药物和水混合均匀后，装入手动压面机的滤筒内，摇动压面机手柄挤压后通过注射器筒内将饲料挤压推出。将自制装置制备的饲料与手工捏制饲料及文献报道自制的饲料进行泽、形态、含水量等方面比较。结果：与文献报道自制的饲料比，采用本装置加工饲料硬度、泽、形态、含水量等基本一致，与手工捏制饲料比本装 置加工饲料速度明显提升，同时泽、形态较均一。结论：采用本装置制备饲料操作简单方便，较文献报道自制饲料的效率明显提升，更加简便快捷，为实验室小规格制备含药饲料提供操作方法
。
药饲料；自制；大
鼠
随着我国实验动物科学的迅速发展，特别是实验动物的重要
性愈来愈被人们所认识，实验动物和动物实验质量也在不断的提
升[1]。动物实验中大鼠是最常用的实验动物之一，根据目的通常需
要对大鼠进行药物干预，采用灌胃方式是对动物给药的常用途径，
但大鼠性情凶猛，如果实验者抓取方法和手段不当就会造成受伤，
引起不必要的伤害。在实验周期长的实验中，最简单可行的方式是氧浓度传感器
将药物或某种物质添加到大鼠的饲料中。但由于饲料加工中心制
备机器规模较大，加工每一个样最少需要25kg[2]。在实验室试验过
程中，往往每种含药饲料需要量较少，但需要同时加工几种不同的
饲料。采用饲料加工中心机器制备显然会造成大量的浪费，增加研
发成本。本文提供一种自制且简单使用的饲料制备装置和方法，为实验室研发工作提供便利。
1材料和方法
1.1材料
晋腾小型面条机手摇压面机，大鼠饲料，一次性注射器，手术刀片、粉碎机等。
1.2方法
1.2.1自制装置的设计参考杨芳等[2]关于自制饲料的方法，采用10mL的一次性注射器制备饲料方法，制备装置如下图1所示。本文将购置的小型手摇压面机对应的磨具孔径打磨变大，5mL的一次性注射器前端用手术刀片切除，并去掉注射器活塞，将注射器滤筒插入打磨后的压面机磨具内即可（见图2和图3）。
1.2.2饲料加工方法参考杨芳等[2]关于自制饲料的方法，将10mL的一次性注射器前端用手术刀片切除，然后将注射器活塞插入套管。具体操作如下图4。
本文在杨芳等[2]的基础上，采用手动压面机，提高饲料加工效率。加工方法为将大鼠饲料粉碎后，添加所需成分和适宜的纯化水，按一定比例混合均匀后，揉捏成团状。将混匀的饲料加入压面机的滤筒中，安装手柄后旋转手柄即可从注射器筒内挤压出圆柱状饲料，用刀片切至5cm左右长度。采用高温烘干或者冷冻干燥即可。见图5所示。
1.2.3相关性状的检测分析根据中华人民共和国国家标准GB/T6435—2006，测定手工捏制和自制装置制作饲料经过冷冻或高温干燥后其中的水分。
2结果与分析
2.1自制装置制作饲料与其他饲料的比较
对几种加工方法制备饲料的的基本性状进行比较分析，分析结果见表1。
本研究采用的压面机装置进行饲料的制备，与文献报道的注射器装置制备饲料基本一致，泽形态适口性均较好[2]。与手动捏制的饲料比较，形态和泽均有明显改善
。
图1注射器装置
科
研
动
态
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2020.10.045 om. All Rights Reserved.
2.2制备饲料时间比较
制备方法所用时间如下表2所示。
在制备相同饲料相同人力的情况下，与注射器制备手工捏制慢，与本研究自制装置注射器装置制备慢。本研究饲料的制备与文献报道的注射器装置制备饲料的速度相比明显提升，且制备过程更简单省力[2]
。
2.3干燥方式
由于饲料加工中心制备饲料需经过高温压制。对于高温下不稳定的成分，制备添加饲料时，容易造成有效成分的损失，采用自制装置加工饲料，可以选择干燥方式、冷冻干燥和高温干燥，特别适用于高温下不稳定的成分。
2.4加工成本
由于饲料加工中心制备含自行提供特定成分的饲料价格在30元/kg 左右，而普通的大鼠维持饲料价格约7元/kg 左右。且饲料加工中心制备机器规模较大，加工每一个样最少需要25kg [2]。在实验室试验过程中，往往每种含药饲料需要量较少，但需要同时加工几种不同的饲料。采用饲料加工中心机器制备显然会造成大量的浪费，增加研发成本。因此对于需求量较小、但需要种类较多的实验室工作中，采用自制装置制备饲料可节省饲料费用，且可随时加工制备，对于不稳定的添加成分更为有利。
3讨论
由于大鼠是安全性评价中应用最广泛的动物，在进行动物实验操作中，经口灌胃给药法是较常见的方法。但大鼠性情凶猛，如果实验者抓取方法和手段不当就会造成受伤，引起不必要的伤害。经常灌胃给药，容易对动物造成一定程度的机械和心理的影响，从
而影响实验结果[3,4]。将所需成分添加到大鼠饲料中方法简便，可操作性强。采用饲料加工中心机器制备量较大，容易造成浪费。对经高温不稳定的成分，采用自制装置制备饲料可进行冷冻干燥，保证药物的稳定性。且自制装置制备饲料可每日随时制备，有效减少不稳定成分在饲料中放置时间过长，造成有效成分降解。
凌娟等[5]研究发现饲料本身的硬度对小鼠的生长性能没有显著影响，但是能够显著改善饲料的耗损量。对于啮齿类动物必须以足够硬度的饲料帮助啮齿类磨牙。在给予自制饲料同时可配合给予购买的维持饲料，且实验发现大鼠对自制饲料
偏
图3饲料自制装
置
图2手摇压面机和磨
具图4采用注射器制备饲料图5本文制备饲料步
骤
注射器装置本文自制装置本文自制装置制作-烘干泽泽不均一泽均一形态成型差成型较好成型较好成型较好适口性较差较好较好较好含水量/%
＜10
lrcp
＜10
＜10
＜15
饲料性状手工捏制-烘干表1 饲料相关性状的比较制备饲料手工捏制注射加工饲料重量1kg 1kg 人数1人
1人所需时间
3h
1h
表2 饲料制备时间的比较om. All Rights Reserved.
的序列与GenBank比对出来同源性最高序列进行比较，确定序列是否是芽囊原虫的基因组，分析序列差异确定亚型。
3结果
3.1粪便中芽囊原虫SSU rRNA基因的PCR扩增结果非隔离电源模块
9份水鹿（Rusa unicolor）粪便和4份毛冠鹿（Elaphodus cephalophus）粪便样品中，扩增出4份约为600bp的阳性样品，经公司测序结果显示，成功扩增出的4份样品均是芽囊原虫阳性样品，阳性样品分别来源于3份水鹿、1份毛冠鹿，表明这些水鹿、毛冠鹿都感染了芽囊原虫。
3.2芽囊原虫SSU rRNA的序列分析及亚型分布
测序成功的序列在Blast上进行相似性比对，结果显示有4个芽囊原虫阳性样品，被分别归为3类不同的序列，上传至NCBI数据库，获得登录号为MT889739、MT889740、MT764942、MT889741。其中毛冠鹿源芽囊原虫属于ST13亚型（MT889741）；另3份水鹿芽囊原虫样品中，1份属于ST5亚型（MT889740），2份为ST14（MT889739、MT764942）。
4讨论
芽囊原虫是人类和各种动物中最常见的寄生虫之一[7]。一些研究发现，无论是在发展中国家还是发达国家，芽囊原虫感染都与胃肠道和营养紊乱有关[7]。除人类外，该寄生虫还经常在动物宿主中发现，包括非人灵长类，以及其他哺乳动物，如偶蹄目、犬齿目、啮齿类动物、有袋类动物以及鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类、环节动物和昆虫[8,9]。但在偶蹄目鹿科动物中目前已有梅花鹿、马鹿和驯鹿感染芽囊原虫的报道[2,4,5]，没有水鹿、毛冠鹿感染芽囊原虫的相关报道。本文是关于芽囊原虫感染水鹿、毛冠鹿的首次报道。
芽囊原虫目前可分为17种亚型（ST1～ST17），其中ST1～ST9、ST12亚型属于人兽共患亚型，ST10～ST17亚型仅感染动物[3]。从偶蹄目中分离出的芽囊原虫有11个亚型，包括7个已知亚型（ST1、ST3、ST4、ST5、ST10、ST13、ST14）和4个新亚型（Novel1、Novel2、Novel3、Novel4）。其中ST5亚型最为普遍[9]。本文中所鉴定的亚型有ST14（n=2）、ST13（n=1）、ST5（
n=1），其中ST14、ST13为动物特有的亚型仅感染动物。ST5为人畜共患亚型，该亚型在江西省的农村地区小孩和猪身上被发现，该地区很多家庭饲养小猪，猪和孩子有时会共用室外区域[10]。这些报告表明ST5具有人畜共患的潜力，水鹿可能是芽囊原虫的潜在传染源。
研究结果显示，水鹿、毛冠鹿也是芽囊原虫的宿主之一，且发现了水鹿源的人畜共患亚型，表明水鹿是芽囊原虫人畜共患病的潜在传染源。本文对水鹿、毛冠鹿感染芽囊原虫的首次报道使我们对芽囊原虫宿主有了更加全面的认识。█
参考文献：
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[3]张富强，王沛，冯霞，等.全球人人芽囊原虫感染情况及基因亚型研究进展[J/OL].中国血吸虫病防治杂志,2020(9):1-11.
[4]Wang J,Gong B,Liu X,et al.Distribution and genetic diversity of Blastocystis subtypes in various mammal and bird species in north-eastern China[J].Parasit Vectors,2018,11(1):522.
[5]Li XD,Zou Y,Pan J,et al.Prevalence and subtypes of Blastocystis sp.infection in zoo animals in three cities in China[J].Parasitol Res, 2020,119(2):465-471.
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[8]Deng L,Yao JX,Liu HF,et al.First report of Blastocystis in giant pandas,red pandas,and various bird species in Sichuan province, southwestern China[J].Int J Parasitol Parasites Wildl,2019,9:298-304.
[9]Deng L,Chai Y,Zhou Z,et al.Epidemiology of Blastocystis sp. infection in China:a systematic review. Épidémiologie de
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[10]Yan Y,Su S,Ye J,et al.Blastocystis sp.subtype5:a possibly zoonotic genotype[J].Parasitol Res,2007,
101(6):1527-1532.
嗜性好。本文介绍的自制饲料装置操作简单方便，
为小规格制备添加饲料提供操作方法。
4小结
本研究设计了自制饲料加工装置，为实验室制备饲料提供简
单方便的操作方法，同时有利于高温不稳定成分添加至饲料中，具数据线接头
有一定的推广和应用意义。█
参考文献：
[1]师福山，庞万勇，杨秀进，等.动物实验中的兽医作用[J].中国比较医学杂志,
2011,21(Z1):104-106+103.
[2]杨芳，李进.大鼠饲料自制装置的设计及制作方法[J].东南大学学报(医学
版),2011,30(5):725-727.
[3]冯雪建，卢占军，高登慧.大鼠灌胃给药方法的研究[J].实验动物科学与管
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[4]De Meijer VE,Le HD,Meisel JA,et al.Repetitive orogastric gav-
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[5]凌娟，钟浩，姚方，等.不同饲料硬度对小鼠饲料耗损量及血液生化指标的
影响[J].饲料研究,2013(2):7-9.
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