《按摩与康复医学》2021 年第 12 卷第9 期 Chinese Manipulation and Rehabilitation Medicine，2021,Vol.l2N o.09•63 •^^
*药代动力学•
徐文杰，李智勇，陈雪婷
(广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院），
细胞核染广东省中医药研宄开发重点实验室，广东广州，510095)
[摘要]目的：建立測定大鼠血浆中姜黄素的HPLC/MS方法，评价姜黄素和其前体脂质体在大鼠体内的药代动力学特征。方法：SD大鼠随机分为姜黄素原料药组和姜黄素前体脂质体组，灌胃给药，分别于给药后不同时间点取血，采用HPLC/MS測 定姜黄素的血药浓度，绘制药时曲线，运用药动学软件计算单次给药后的姜黄素药动学参数。结果：原料药组与前体脂质体组 液压阀芯的姜黄素均符合二室开放模型，与原料药相比，前体脂质体八1；(：〇_、1……、(：…1…、0^均有显著性差异(/><0.01),1,/2|1、1^、¥均无显著性差异(P>0.05)。给药后lO m in〜480min, 口服姜黄素原料药
和姜黄素前体脂质体的药动学参数A U C k分别为（0.35± 0.037)和（11.51±0.047) 〜分别为（0.32±0.06)和（10.05±0.02) h't w分别为（3.05±0.11)和(4.98±0.08)h'W分别为(0.580±0.001)和（2.43±0.002)h，C…»分别为（0.13±0.049)和（0.58±0.042)tng.L'C L分别为（1020.61±38.51)和（80.78±8.63)L* h'k g'V分别为（439.04±20.22)和（80.20±7.45)L*kg\结论：将姜黄素制备成前体脂质体能提高其生物利用度，达到了实验 预期要求。
[关键词]姜黄素：前体脂质体；药动学：生物利用度
[中图分类号]R2749;R246 [文献标识码]B[文章编号]10〇8-18；79 (2021)09-0063-04
DOI：10.19787/j.issn.1008-1879.2021.09.021
Pharmacokinetics and Bioavailability of Curcumin-Proliposomes in Rats
XU Wen-jie, LI Zhi-yong, Chen Xue-ting (Guangdong Second Traditional Chinese Medicine Hospital(Guangdong Research Institute o f Traditional Chinese Medicine Manufacturing Technology), Guangdong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Research and Development, Guangdong Guangzhou 510095)
Abstract Objective: To establish a high-performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPL
C-MS) method for simultaneously determining the contents of curcumin in rat * s plasma, and study the pharmacokinetics of the curcumin and the curcumin-proliposomes, to investigate the relative bioavailability of Curcumin-Proliposomes. Methods： SD rats were divided randomly into two groups for the respective administration of a single dose of curcumin and curcumin-proliposomes. Blood samples were collected at different times points and the concentrations of curcumin in rat plasma were simulataneously determined by HPLC-MS. The pharmacokinetic parameters were calculated by pharmacokinetic program. Results: The pharmacokintic parameters of curcumin and curcumin-proliposomes were as follows: AUC〇^x(0.35±0.037) and (11.51±0.047) 土0.06) and (10.05±0.02) h't，郊(3.05±0.11) and (4.98±0.08) 土0.001) and (2.43±0.002) 11，〇……(0.13±0.049) and (0.58士0.042) m g.L'C L (1020.61±38.51) and (80.78±8.63) L^h'^kg1, V (439.04±20.22) and (80.20±7.45) L-kg'1, respectively. Conclusions: The bioavailability of curcumin was increased by making them into proliposomes, and the biopharmaceutical property of curcumin was improved.
Keywords curcumin; proliposomes; pharmacokinetics; bioavailability
姜黄素[Curcumin，1，7-双(4-轻基-3-甲氧基苯 基)-1,6-庚二稀-3,5-二酮,(：21112。06]是从姜黄根茎中 提取的多酚类化合物，现代研宄发现其具有抗肿 瘤、抗炎、抗氧化、抗病毒、改善心血管功能、降血 脂、降血糖、增强免疫力和保护肝肾等多种药理作 用及生物活性[1'具有良好的药理活性和应用
前景。但是姜黄素水溶性差、在生理条件下稳定性 差、肠道吸收率低、在肠道中容易转化为葡糖苷醛 酸和磺酸等复合物、体内代谢迅速、半衰期短，这些 问题导致了姜黄素口服吸收率低、血药浓度低、生物利用度低〜2]，限制了其在临床上的应用。因此，为提高姜黄素的溶解度，增加其口服吸收，提高生 物利用度，将姜黄素制备成前体脂质体。本研宄以 姜黄素原料药为参比，以姜黄素为指标性成分，进 一步研宄姜黄素前体脂质体中姜黄素在大鼠体内 的药动学过程，以阐明姜黄素前体脂质体的药代动 力学规律，为临床合理用药提供实验依据。
1仪器与材料
1.1仪器 Thermo TSQ QUANTUM ACCESS MAX 液质联用系统；电喷雾离子源(HESI源）；XS205DU
*基金项目：广东省医学科学技术研宄基金项目，编号:A2017563
作者简介：徐文杰（1983-)，女，博士研究生，副主任中药师，研宄方向：中药新药研发。
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型1/10万电子分析天平（METTLER TOLEDO); KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器 有限公司）；milli-Q advantage超纯水器（密理博中国 有限公司）；5424型小型高速离心机（德国Epp
en-dorf公司）；SIGMA3K30型高速冷冻离心机（SIGMA 公司 ） ；HSC-12A 氮吹仪 （天津Hengao) ; 20-20〇nL移液（BIOHIT);Forma-86C ULT Freezer-86 °C冰箱 （Therma); -20°C冰箱 （青岛海 尔股份 有限公司）；Heidolph旋转蒸发仪（德国海道尔公 司），SHZ-D(III)循环水式多用真空泵(上海力辰邦 西仪器科技有限公司）；DLSB-10/20型低温冷却液 循环泵（广州市星烁仪器有限公司）；XW-80A型旋 涡混合器(上海精科实业有限公司）。
1.2对照品姜黄素对照品（中国食品药品检定研宄 院，批号：110823-201004，纯度 98.8%)。
1.3试药姜黄素原料药（四川金郁金科技开发有限 公司，纯度>98%)，姜黄素前体脂质体为实验室自 制。
1.4试剂大豆卵憐脂（德国Lipoid公司，纯度：> 75%)；胆固醇(北京鼎国昌盛生物技术有限公司，纯 度：>98%)；廿露醇（药用级，安徽山河有限公司），Triton X-100 (Sigma-Aldrich 公司）。乙腈、甲醇、磷 酸（谱纯,Merck公司），水为超纯水，其余试剂均 为分析纯。
1.5动物SPF级SD大鼠，12只，雌雄各半，体重 180〜220 g，实验环境为广东省第二中医院（广东省 中医药工程技术研宂院)SPF级动物实验室，设施许 可证号：SYXK(粤）2015-005L控制室内温度为(22±2 )°C，相对湿度40%~60%，大鼠给予标准饲料 和饮用水，于室内保持12h光照、12h避光循环饲养。2方法与结果
2.1样品的制备采用载体沉积法制备姜黄素前体脂质体：称取处方量的姜黄素、胆固醇、大豆卵磷脂 溶于适量无水乙醇中，超声（250W，40kHz)30min分 散，制成类脂质澄明溶液。称取处方量甘露醇粉末 置于茄型瓶中，于旋转蒸发仪(水浴温度40±5°C)中至流动态，在载体中分次加入上述类脂质溶液适量，于旋转蒸发仪减压回收乙醇至干（条件为：-0.04Mpa~-0.10Mpa，水浴温度 50~60°C)，置真 空干燥器中干燥，取出密闭于西林瓶中，4°C保存备 用。
2.2药动学实验2.2.1分组与给药12只SD大鼠，随机分为2组，每 组6只，雌雄各半，适应性饲养7d后，于实验前12h 禁食，自由饮水。姜黄素、姜黄素前体脂质体加双 蒸水配制成混悬液或溶液,2组大鼠分别灌胃给予 姜黄素（0.300g/kg)和姜黄素前体脂质体（0.100g/ kg)。于给药前 0 h、给药后 10min，0.25h，0.5h，0.7511,1.011,1.511,211,411,611,811颈动脉取血11111^血 样置于肝素抗凝试管中，摇匀，离心（3000r/min) 10min，分离血浆，取上层血清，置-20°C冰箱保存，备 用。
2.2.2血浆样品处理与检测取2.2.1项下上层血清 样品10〇nL置于EP管中，加入甲醇600叫去除蛋 白，润旋振荡2min，超声提取15min，高速离心(13000r/min)1Omin，精密吸取上清100吣，40°C水 浴氮气吹干，残渣加甲醇稀释并定容至lmL，0.45pm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2_2.3统计方法计量资料以均值加减标准差()表示，两组间均值比较采用两独立样本f々检 验，由SPSS 19.0软件进行数据处理。以a=0.05为检 验水准。
2.3 LC/M S法測定血浆中姜黄素含量参考文献™的检测方法，在专属性试验、线性关系考察、精密度 试验、稳定性试验、回收率试验基础上测定血浆样 品中姜黄素浓度(ng/mL)，计算药动学参数。
2.3.1 谱条件 Hypersil GOLD C18保护柱（10mmx 2.1mm,5叫1)，分析谱柱为 Hypersil GOLD(^18柱 (50mmx2.1mm，3|am)；流动相为甲醇(A)-水（B)，柱温为30°C ，流速为0.25mL/min，梯度洗脱（0~ 0.5min,30%A； 0.5~2min, 30—>90%A；2~6min,90% A;6~7min,90—30%A;7~10min，30%A)，进样量 10(iL〇
2.3.2质谱条件离子源为高温电喷雾离子源(HESI 源），喷雾电压2.8kV，正离子选择反应监测（SRM)，喷雾电压3500V，喷雾温度350°C ，毛细管温度300 °C，碰撞电压40psi，辅助气流速：6arb。用于定 量分析的离子对为369.1—285.1 (11Hz)。
2.3.3专属性试验取空白血浆样品、空白血浆加入 姜黄素对照品和含药血浆样品，分别按“2.2.2”项下 方法处理，在上述LC/M S条件下，进样l〇nL，记录 谱图，见图1。结果表明，空白血浆中内源性物 质及样品的代谢产物对姜黄素测定均无干扰。锰氧化物
第7期徐文杰等姜黄素前体脂质体在大鼠体内药动学研究•65 •
A .空白血浆样品;B.空白血浆加姜黄素合对照品;C.给 药后1h血浆样品；
图1大鼠血浆样品谱图
2.3.4标准曲线的绘制取空白血浆适量，精密加入
不同体积的姜黄素对照品溶液，分别得2 0、4 0、8 0、
160、320、640ng•mL1系列浓度标准血浆样品，按 “2.2.2”项下方法处理后，在上述LC/MS条件下，进 样10HL。以姜黄素峰面积(Y)为纵坐标，以姜黄素 浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线并经线性回归求 得回归方程A=41755X+2x1〇6,r值为0.9996。结果 表明，姜黄素在20~640ng/mL范围内线性关系良 好。
2.4生物利用度測定将不同时间点的血液样品按
照“2.2.2”项下方法处理，测定各个时间点的姜黄素
血药浓度，记录谱图，根据回归方程计算血液中药物浓度。同时以时间点(h)为横坐标，以血药浓 度(Hg^mL1)为纵坐标绘制药-时曲线（见图2)，采用 kinetica4.4软件计算药动学参数，对姜黄素原料药 和姜黄素前体脂质体的血药浓度-时间数据进行拟 合，以“1/C2”为权重的二室血管外房室模型拟合最 佳，药动学参数:AUC0—*«〇、,l/2a、 A/2P、fim x、Cm a x、V、CL y K 用房室模型统计矩法进行计算，结果见表1。
垃圾热解气化□姜黄素原料药组：■姜黄素前体脂质体组
图2大鼠灌胃姜黄素原料药、姜黄素前体脂质体后姜黄素
的药-时曲线(n=6)
表1大鼠口服姜黄素原料药及前体脂质体后体内药动学
参数（*±J i,n=6)
药动学参数单位
姜黄素
原料药组前体脂质体组AUCo^c mg*L'*h0.35 士0.03711.51 土0.047**
t\〇a h'10.32 土0.060.05±0.02
t\a^h'1 3.05±0.11 4.98 士0.08
Ux h0.58 土0.001 2.43±0.002**
C ux mg.L.丨0.13±0.0490.58±0.042**
V L.kg 丨439.04土20.2280.20±7.45
CL L.h、kg 丨1020.61±38.5180.78土8.63**
注戶>0.05，林尸<0.01
由表1可知，以姜黄素原料药为参比，姜黄素前 体脂质体组姜黄素的AUCo^d m^C^CL均具有显 著性差异（/><〇.〇〇，姜黄素前体脂质体达峰浓度(0.58 ± 0.042mg •L-1)显著高于原药组（0.13 土0.049mg«L“），说明药物制备成前体脂质体后，药物 的吸收明显改善；同时姜黄素前体脂质体组药物达 峰时间（2.43±0.002h)相比原药组（0.580±0.001)显 著延后，说明姜黄素前体脂质体不仅可以增加药物 的吸收，而且在体内具有缓释作用。姜黄素前体脂 质体消除速率（80.780±8.63 L^h'^kg1)与原药组消 除速率（1020.61±38.51 L.h'kg1)具有显著性差异，药物在体内的停留时间显著增加。复方姜黄素制 备成前体脂质体后，AUC…_显著增加(P<0.01)，其 相对生物利用度相比原料药提高了 10倍以上，达到
了试验预期要求。
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3讨论
近年来，许多新型制剂技术，如纳米粒、脂质
体、胶束、自微乳、固体分散体和磷脂体等，被用于 改善姜黄素的生物利用度％|9]。其中，脂质体作为 新型药物载体，可以包裹脂溶性和水溶性成分，具 有生物相容性，又可改善药物在体内的脂水分配系 数，延缓药物释放，减少用药剂量，提高生物利用 度，具有生物可降解和无毒的优点[2°]，但是脂质体在 贮存过程中易发生粒子聚集沉降、磷脂氧化分解、 水解、药物泄露等问题|211。而前体脂质体是一种干 燥的并具有良好流动性的粉末，临用前加水水合即 分散成脂质体，可有效解决上述问题，大大提高制 剂的长期稳定性―。前体脂质体是一种固态制剂， 遇水可以重建为脂质体，克服了液态脂质体稳定性 差的问题。本研宄以姜黄素原料药为参比，以姜黄 素为指标性成分，进一步研究姜黄素前体脂质体中 姜黄素在大鼠体内的药动学过程，以阐明姜黄素前 体脂质体的药代动力学规律，为临床合理用药提供 实验依据。
大鼠灌胃给予姜黄素和姜黄素前体脂质体后， 不论是姜黄素组还是姜黄素前体脂质体组，姜黄素 的药时曲线呈单峰，均符合二室开放模型(C =Ae _M+
Be ，。本文对姜黄素及其前体脂质体在大鼠体内 药动学和相对生物利用度进行了研究，结果表明， 与姜黄素原料药相比，姜黄素前体脂质体中姜黄素 的相对生物利用度提高10倍以上，提示前体脂质体
生物利用度明显增加；姜黄素前体脂质体中姜黄素 的<：_为原料药的4倍以上，提示将姜黄素制成前 体脂质体后在大鼠体内吸收增加，可提高药效；姜 黄素前体脂质体组Ux 相比原药组显著延后，说明姜 黄素前体脂质体不仅可以增加药物的吸收，而且在 体内具有缓释作用姜黄素前体脂质体中姜黄素的t ,, 2与原料药比较没有显著性差异，提示前体脂质体效 应维持时间基本一致，给药时间间隔不变。
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