解脲支原体（UU）核酸定量检测标准操作规程（PCR－荧光探针法） 1.目的：规范解脲支原体（UU）核酸DNA（PCR－荧光探针法）检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围：解脲支原体（UU）荧光定量检测。
3.职责:
3.1 文件编写：实验室技术员。
织物整理剂
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4.参考文献：
4.1 中山大学达安基因股份有限公司解脲脲原体（UU）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司DA7600核酸序列检测系统用户手册。
弯曲弹簧
电缆防盗5. 内容：
伏秒特性的绘制方法和含义
5.1 检测方法：PCR-荧光探针法
5.2 实验原理：用一对解脲脲原体特异性引物和一条解脲脲原体特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而检测解脲脲原体（UU）DNA。主要用于（UU）感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。
5.3 性能参数：
5.3.1 精密度：检测下限为5.0Χ102 copies。
5.3.2 线性范围：5.0×102～5.0×108 copies。
5.4.2 标本采集：
5.4.2.1 泌尿生殖道分泌物：
5.4.2.1.1 男性尿道分泌物：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。
5.4.2.1.2 女性生殖道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5s后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
5.4.2.1.3 女性尿道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌玻璃管中，密封送检。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。 5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染。
5.5 设备和试剂：
5.5.1 设备：DA 7600荧光定量PCR仪、低速离心机、生物安全柜、高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯。
5.5.2 试剂：
5.5.2.1 试剂品牌：中山大学达安基因股份有限公司解脲脲原体（UU）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
5.5.2.2 试剂批准文号：国药准字2008第3401388号。
5.5.2.3 试剂组成：DNA提取液（500μl/管） 2管，PCR反应管（未贴标签）20管，阴性质控品（250μl/管）1管，临界阳性质控品（50μl/管）1管，强阳性质控品（50μl/管）1管。
5.5.2.4 试剂包装规格：单管单人份，20人份/盒。
晶振封装5.5.2.5 试剂保存和有效期：保存于-20ºC；有效期6个月。
5.6 质控程序
5.6.1 质控品
5.6.1.1 质控品品牌：随厂家试剂盒。
5.6.1.2 保存条件：置于-20℃冰箱中保存，也可以保存于-70℃，应避免反复冻融。
5.6.1.3 保存期限：保存于-20℃，保存期为6个月；保存于-70℃，保存期为2年。
5.6.2 质控频率：每次上机均需做质控。
5.6.3 质控操作步骤：与临床标本同步处理。
5.6.4 质控结果分析：
5.6.4.1 阴性质控品：增长的曲线不呈S型曲线或Ct值=30。
5.6.4.2 阳性质控品：增长曲线呈S型曲线。
5.6.4.3 强阳性质控品定量参考值在1.0×106 copies～2.0×107 copies范围，临界阳性质控品定量参考值在2.0×102 copies～2.0×104 copies范围；(参考值为仪器自动分析计算出的数值)。
5.6.4.4 以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
5.6.5 质控结果的记录：分析结果时先记录质控结果，再把结果输入电子版质控图，参见《PCR室室内质控开展规程》判断此批检测是否在控。
5.7 操作过程：
电子岗哨5.7.1 提取DNA：
5.7.1.1 打开恒温水浴箱或干式恒温器，设定温度 100℃。
5.7.1.2 从试剂盒中取出DNA提取液、阴性质控品和阳性质控品，让其在室温下完全融化。
5.7.1.3 泌尿生殖道分泌物棉拭子提取DNA：
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议