目的：建立高效液相谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量的方法。方法：采用Agilent C18（250mm×4.6mm，5μm）谱柱，甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为324nm。结果：绿原酸在77.28μg～772.8μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9998，平均回收率分别为99.10%，RSD为0.39%。结论： 本方法操作准确、简便、快速，可有效用于复方金银花颗粒的质量控制。 标签： RP-HPLC法 复方金银花颗粒 绿原酸 含量测定
复方金银花颗粒是由金银花、连翘和黄芩3味中药制成的复方制剂，具有清热解毒、凉血消肿之功效，主要用于风热感冒、喉痹、乳蛾、目痛、牙痛及痈肿疮疖等症的[1]。本品已收载于5卫生部药品标准6中药成方制剂第十册，其质量标准只有性状、鉴别、常规检查及含量测定，含量测定项分别对黄芩苷和连翘苷进行考察并将其作为评价指标，通过大量文献及相关资料表明金银花中的绿原酸也是有效成分之一，具有广泛的抗菌作用[2-3]。所以本研究将对复方金银花中绿原酸的含量进行测定，以确保本品的内在质量[4]。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器和设备
高效液相谱仪：美国安捷伦（1）1200紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药
绿原酸对照品（批号：110753-200413 规格：约20mg，供含量测定用），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸水。
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1.2 实验方法
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1.2.1 系统适用性试验及谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）為流动相；检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。
称取绿原酸对照品约10mg，精密称定为9.66mg，置100ml棕量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含绿原酸38.64μg）。
1.2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品2g，置50ml棕量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
1.2.4 检测波长的选择 取绿原酸对照品溶液适量，于200～400nm波长下测定光谱图。
2 实验结果
2.1 检测波长的选择
绿原酸对照品在324nm波长处有最大吸收峰，同时参考中国药典2010年版一部双黄连口服
液质量标准中金银花的含量测定检测波长为324nm，故检测波长选定为324nm。
dsp28122.2 线性关系范围
event2精密吸取对照品溶液2、5、10、15、18、20μl，按上述谱条件分别注入液相谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线方程为Y=120.45x-10.62（r=0.9998），表明绿原酸在77.28μg～772.8μg范围内呈良好线性关系。
2.3 专属性试验
取按处方比例缺金银花的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定HPLC谱图，同法测定绿原酸对照品、供试品及溶剂的HPLC谱图。结果阴性对照样品的谱图中，在与绿原酸吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。结果见图1、2、3、4。
2.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，记录峰面积，以供试品溶液中绿原酸的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积RSD为0.34%，表明样品在12小时内稳定性良好。
二次开发平台2.5 中间精密度试验
取本品粉末约2g，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，由不同人员、不同时间、使用不同高效液相谱仪，按含量测定项下方法操作，测定绿原酸的含量。结果绿原酸峰面积RSD为1.08%，表明此方法精密度良好。
2.6 重复性试验
取本品粉末约2g，共6份，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果绿原酸峰面积RSD为0.72%，表明方法有良好的重现性。
2.7 回收率试验
取已知含量样品约1g，精密称定，共6份，分别置于6只50ml棕量瓶中，精密加入绿原酸
对照品溶液（浓度约为0.1005mg/ml）10ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定，计算6次平均回收率为99.10%、RSD为0.39%。表明此方法准确、可行。结果见表1。
3 讨论
3.1 金银花中含绿原酸和异绿原酸，均为金银花中主要的抑菌有效化学成分，其中的绿原酸经常为衡量金银花药材和中成药制剂的内在评价指标。故绿原酸含量越高，说明其品质越好。在方法学考察过程中发现在室温条件下绿原酸12小时内稳定性良好，若继续将时间延长，发现同一样品溶液中的绿原酸含量有所下降，有可能部分绿原酸转化成异绿原酸；而在冷藏条件下绿原酸24小时稳定，所以测定绿原酸含量时要保证样品溶液适宜的保存或者即时测定，以保证含量测定结果可靠准确[5-7]。
3.2 本研究为了更好的控制复方金银花颗粒的质量，对其绿原酸含量测定方法进行考察，并通过方法学验证了其可靠性。本品中绿原酸含量测定方法的建立，进一步完善了复方金银花颗粒的质量标准[8-10]。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：614.茶水分离杯
[2]周凤琴，冉 蓉，李 佳，张永清，顾正位.山东10个不同种质金银花中绿原酸含量及其品质评价[J].山东中医杂志，2007，26 （7）：478-480.
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[3]刘明斌，童巧珍，谢振宇. HPLC法测定金银花中绿原酸的含量[J]. 医学临床研究，2006，23（5）：759-760.
[4]廖艺，韦宁.高效液相谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸和黄芩苷[J]. 中国药师，2008，11（8）：935-937.
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