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组织电镜的制作

一、组织样品的取材应注意四点：
1）材料要新鲜，组织离体后应立即投入固定液中。
2）组织的大小要合适，部位要准确，预固定组织大小约为：2mm×5mm×10mm。
3）避免人为损伤。
4）较低温度下进行，保存样品的温度为，4℃。

二、细胞收集固定方法：（适用于培养细胞、液体培养细菌等）
1）取培养细胞2~4ml，放于离心管中，用1500~2000转/分离心10-15分钟，弃去上清液；
2）吸管沿管壁缓慢加入约0.5%戊二醛固定液（原液用PBS 1:6稀释），在4°C环境中静置15-30分钟；
3）再用10000-13000转/分离心10-15分钟，弃去上清液；
4）用吸管沿管壁缓慢加入3%戊二醛固定液即可。

注意：1. 收集后如不能及时送样，可保存在4°C环境中。

2. 高速离心离紧后的样品为体积不小于2mm×2mm×2mm（约半颗绿豆大小）的固体样。

三、电镜超薄切片制样过程：
样品经3%戊二醛预固定，1%再固定，丙酮逐级脱水，Epon812包埋，半薄切片光学定位，超薄切片，醋酸铀及枸橼酸铅双重染，日立H-600IV型透射电镜观察。

* 特殊组织样品（如眼组织、脑组织、骨组织等）的取材请详细咨询 *

四、常用固定液的配制

1）磷酸盐缓冲液配制的戊二醛固定液：

0.2mol/L磷酸盐缓冲液（ml）	50	50	50	50	50	50	50
25%戊二醛水溶液(ml)	4	6	8	10	苯丙酮合成12	16	20
双蒸水加至（ml）	100	100	100	100	100	100	100
戊二醛最终浓度（%）	1.0	1.5	2.0	2.5	3.0	4.0	5.0

2）二甲胂酸钠缓冲液配制的戊二醛固定液：

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0.2mol/L二甲胂酸钠缓冲液ml	50	50 视觉引导	50	50	50	50
25%戊二醛水溶液(ml)	4	6	8	10	12	风能汽车 16
双蒸水加至（ml）	100	100	100	100	100	100
戊二醛最终浓度（%）	1.0	1.5	2.0	2.5	3.0	4.0

3复合挤塑聚苯板）2%多聚甲醛—2.5%戊二醛固定液：

漂流河道设计0.2mol/L磷酸盐或二甲胂酸盐缓冲液(ml)	50ml
10%多聚甲醛水溶液(ml)	20ml
25%戊二醛水溶液(ml)	10ml
双蒸水加至(ml)	100ml

本文发布于:2024-09-20 11:51:48，感谢您对本站的认可！

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