程贝，刘友平，石宇华，王继森，梁加贝
成都中医药大学药学院，成都（611137）
E-mail：chengbei0579@126
摘要：目的：建立紫外分光光度法测定宁心益智胶囊中总皂苷含量的方法。方法：采用大孔吸附树脂法除去干扰成分，以黄芪甲苷为对照品，用5 %香草醛冰醋酸溶液和高氯酸为显剂，测定波长为544nm 。结果：在9.050～30.167 ug/ml范围内黄芪甲苷吸收度A与浓度线性关系良好，相关系数 r=0.9998 ；平均回收率为99.48 % , RSD 为2.61%( n = 6) 。结论：本法简便，准确，灵敏度高，重复性好，可用于宁心益智胶囊的质量控制。 关键词：紫外分光光度法，宁心益智胶囊，总皂苷，含量测定，大孔吸附树脂
宁心益智胶囊由人参、黄芪、五味子、龟甲、玉竹、远志、石菖蒲、益智、木香、甘松10味中药组成，具有补气养阴，宁心益智功效，临床用于神经衰弱表现为健忘，多梦，心烦，头晕，身倦乏力者。在处方中，黄芪、人参、远志、玉竹等多味主药的有效成分主要为皂苷类成分，所以建立该制剂总皂苷含量的测定方法，能有效地控制本品的质量[1]。
直线度测量
本文采用D101大孔吸附树脂除去干扰成分，以黄芪中有效成分黄芪甲苷为对照品，用5 %香草醛冰醋酸溶液和高氯酸为显剂[2～3]，对宁心益智胶囊中总皂苷进行了含量测定，结果表明，本法简便，准确，灵敏度高，重复性好，可用于宁心益智胶囊的质量控制。
1. 仪器与材料
UV－1100紫外－可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），BP211D电子天平（十万分之一，德国Sartouris股份有限公司）；宁心益智胶囊（重庆东方药业股份有限公司提供，规格：0.45g/粒，批号：040501、040502、040503）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0781-9503）；其他试剂均分析纯（成都化学试剂厂）。
2.1对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照适量，加甲醇制成每1ml含黄芪甲苷1.8mg的溶液，即得。
2.2洗脱条件的考察
取本品内容物，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超
声提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液10ml，共3份，挥去甲醇，残渣加水10ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长20cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用30%乙醇50ml洗脱，再用90%乙醇50ml洗脱，分别收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
分别取30％、90%乙醇洗脱液及对照品溶液各80 µl于具塞试管中，水浴蒸干，按“3.4”项下自“精密加入0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液”起，操作。测定这4种洗脱液中总皂苷含量（%）分别为0.04%、2.61%。结果表明，用30%乙醇洗脱时总皂苷基本无损失，90%乙醇能洗脱下总皂苷。故确定先用水、30%乙醇洗脱，除去对测定有干扰的成分；90%乙醇洗脱液进行紫外测定。
乐器架
3. 含量测定的考察
3.1 供试品溶液的制备
取本品内容物，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液10ml，挥去甲醇，残渣水10ml使溶解，过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长20cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用30%乙醇50ml洗脱，弃去30%乙醇洗脱液，继用90%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2 阴性供试品溶液的制备
取除黄芪、人参、远志、玉竹、五味子外的龟甲、石菖蒲、益智、木香、甘松等药材，按本品制备工艺制得阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液。
3.3 最大吸收波长的确定
分别精密量取对照品溶液（1.81mg/ml）、供试品溶液、阴性供试品溶液各80 µl于具塞试管中，水浴蒸干，加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，置70℃水浴中分别加热15分钟，取出放冰水浴中冷却2～3分钟，加入冰醋酸5ml，摇匀，以相应试剂作空白，照分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录V A）项下试验，于400nm～700nm范围内进行光谱扫描，光谱扫描图见1。结果对照品溶液及样品溶液的最大吸收波长均为544nm，阴性供试品溶液的吸收度小于0.03，阴性无干扰。
图1 样品、对照及阴性样品的光谱图
3.4 标准曲线的制备
精密量取对照品溶液（1.81mg/ml）30、40、60、80、100µl于5支具塞试管中，水浴蒸干，分别精密加入0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液、0.8ml高氯酸，密塞，摇匀，于70℃水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水浴冷却2～3分钟，加入冰醋酸5ml，摇匀，以相应试剂作空白，照比法，在544nm 的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为: Y=0.0304X-0.1186 R =0.9998。结果表明，在9.050～30.167 ug/ml范围内，吸收度A与黄芪甲苷浓度线性关系良好。
3.5 精密度试验
精密量取对照品溶液80µl，按照拟定的方法，测定重复测定5次，结果，对照品吸收度的相对标准差（RSD）为1.06%，表明仪器精密度良好。
3.6 重复性试验
取同一样品5份，按照拟定的方法，测定总皂苷含量，结果其相对标准差（RSD）为1.57%，具有较好的重复性。
3.7 稳定性试验
喷砂工艺取同一供试品溶液，按照拟定的方法，分别于0、10、20、30分钟时测定吸收度。结果其相对标准差（RSD）为0.95%，样品在显后半小时内稳定。
3.8 加样回收率试验
取已知含量的同一批胶囊内容物1g，共取6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液(26.43mg/ml)1ml，按照拟定的方法测定总皂苷含量，计算回收率，结果见表1。
表1 黄芪甲苷加样回收率试验
试验号称样量(g)
样品含量
(mg)
加入量(mg)
测得量
(mg)
空转锁回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD(
%)
1 1.0240 27.03 26.43 53.402
2 99.77
2 1.0617 28.0
3 26.43 53.440
4 96.15
3 1.0402 27.46 26.43 54.7288 103.17
4 1.1051 29.18 26.43 55.9433 101.28
5 1.0841 28.62 26.43 54.2730 97.06
6 1.0332 27.28 26.43 53.5606 99.45
99.48 2.61
3.9 样品的测定曝气头
分别取3批样品，按照拟定的方法测定总皂苷含量，结果批号为040501、040502、040503样品中总皂苷含量分别为12.73mg/粒、11.86mg/粒、13.04mg/粒。
4. 讨论
4.1 试验表明，制剂中其他成分对测定总皂苷条件下的显干扰较大，D101大孔吸附树脂对本制剂所含皂苷类成分具有较好的吸附和解析性能，能除去其干扰成分，得到满意地测定的结果。
4.2 香草醛-高氯酸是皂苷常用的一类显剂。本实验对总皂苷的显条件进行了考察，结果显温度为70℃，显时间为15分钟时，对照品与样品吸收度均达到最大值，两者最大吸收波长为544nm。
4.3 在处方中，人参、黄芪含四环三萜皂苷，远志含五环三萜皂苷，而玉竹含甾体皂苷，它们所含的皂苷结构有较大的差异。选用黄芪甲苷为对照进行测定，能否完全代表本品的总皂苷含量还需进一步探讨。
5-氯-2-戊酮4.4 笔者根据中药复方有效组分与有效成分相结合的质量控制思路，测定了宁心益智胶囊中总皂苷和五味子甲素的含量[1]，能较全面有效地控制复方制剂的质量。
参考文献
[1] 程贝，王继森，石宇华，等. HPLC法测定宁心益智胶囊中五味子甲素含量[EB/OL]. www.paper.edu/paper.php?serial_number=200707-251，2007-07-13
[2] 过科家，文红梅，樊天宇，等. 固相萃取-比法测定扶正注射剂中黄芪总皂苷的含量[J]. 南京中医药大学学报，2007，23（2）：100～102
[3] 江燕，晁若冰. 黄芪药材中黄芪甲苷和总皂苷含量的比较[J]. 华西药学杂志，2007 , 22 (3) : 322～324
Determination of the content of total saponins in
Ningxinyizhi capsules with UV spectrophotometry
Cheng Bei，Shi Yuhua，Wang Jisen, Liu Youping，Liang Jiabei
Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu（611137）
Abstract
Objective: To establish a method for the determination of the content of total saponins in Ningxinyizhi capsules by UV spectrophotometry. Methods: The determination was performed using macroporous
Ⅳ
resin to remove interference ingredients, astragaloside standard as control substance,and Vanillin-perchloric acid as color-developing reagent, with the wavelength set at 544nm. Result: Ⅳ9.050～30.167ug/ml (r=0.9998)，the average Astragaloside had a good linearity in the range of
recovery rate was 99.48 %（RSD=2.61% ，n=6）.Conclucion: This method is simple，accurate，a
nd reproducible, and can be used toeffectively control the content of total saponins in Ningxin yizhi capsules.
Keywords：UV spectrophotometry，Ningxinyizhi capsules，Total saponins，Content determination，Macroporous resin
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