配方

LB液体培养基的制备: 酵母粉    5g
                      蛋白胨    10 g
                      NaCl      10 g
                      ddH20    定容至1L      4保存
LB平板:              酵母粉    5g              Amp+抗性按1000:1的比例加Amp                      蛋白胨    10 g            Kana+抗性按2000:1的比例加Kana
                      NaCl      10 g
                      琼脂      15g
                      ddH20    定容至1L        4度保存)
Amp+(50硬币分拣机mg/mL):        Amp+粉末    50mg(抽滤,-20度保存,约1 mL
每管分装保存,保质期1年)
                      ddH20        1 mL
Kana+(50mg/mL):       Kana+粉末    50mg(同上)
                      ddH20        1 mL
CaCl2(110.99,配0.1M):      CaCl2粉末    11.1g   
                        dH20        定容至1L
IPTG(200ug/mL)          IPTG        2g-20度,1 mL每管分装保存,保质期半年)
                        dH20        定容至10mL  (IPTG必须用0.22nm过滤膜过滤)
10Х)TBS:          NaCl      80.0g(常温保存)
                      Tris粉末    24.2
                  ddH20        定容至1L
TBST(洗膜用):    TBS1Х)  500Ml
                    吐温        500uL
PBS缓冲液的配制:
NaCl      8g家用智能控制系统
                    KCl      0.2g
                    Na2HPO4    1.44g(十二水合3.6g
KH2PO4        0.24g
800 mLddH2O,根据开始的pHNaOH HCLpH7.4,调好pH再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存(最好是在4度)
PBST的配制:
        1L PBS+1 mL Tween20
loading buffer(5×)(样品:loading buffer=41)
电泳缓冲液(10×):    甘氨酸      144g      (常温保存)
(running buffer)             Tris粉末    30.3g
                          SDS          10g
                      ddH20        定容至1L
转移缓冲液10×):    甘氨酸      144g
(transfer buffer      Tris粉末    30.3g       
(常温保存)            ddH2精轧管0      定容至1L
使用时:                甲醇                200mL
                    转移缓冲液(10×)      100 mL
                          ddH20              700 mL
胶的制备:(溶质的质量分数=(溶质质量/溶液质量)×100%
8.8Buffer:  Tris      18.17g      4度保存)
          10%SDS  4mL(10gSDS定容到100 mL,因为难溶,可以37度水浴一小时)
          ddH20    定容至100mL
6.8 Buffer:  Tris      6.06g        4度保存)
            10%SDS  4 mL
            ddH20    定容至100mL压花牛皮
10%APS:    10gAPS定容到100 mL (最好是1g定容到mL,用锡纸包好4度避光,尽快用完)
5%浓缩胶(4 mL):d H20          2.3 mL
                  6.8 Buffer      1 mL
                  30%Arc-Bis    660uL                 
                  10%APS        40uL    (10gAPS定容到100 mL)
                  TEMED        4 uL4度保存)
分离胶配方(8 mL)
垂直风道机箱
8%
10%
12%道生液
15%
d H20
3.792 mL
3.28 mL
2.72 mL
1.92 mL
8.8 Buffer
2 mL
2 mL
2 mL
2 mL
30%Arc-Bis
2.128 mL
2.64 mL
3.2 mL
4 mL
10%APS 
80 uL
80 uL
80 uL
80 uL
TEMED 
6.4 uL
6.4 uL
6.4 uL
6.4 uL
注:APS要现配现用,配好要在一个星期内用完
染液:  甲醇    500mL                        100
(室温)  乙酸    100 mL                        20
          R250    0.5g( R250考马斯亮蓝)        0.1
          H20      400 mL                        80
脱液:  甲醇    165mL        99 mL
(室温)  乙酸    50 mL          30 mL
          H20      785 mL        471 mL
封闭液:  奶粉        5g
现配      叠氮钠      0.02g(防腐) 只用于封闭和一抗,二抗不用叠氮钠
          PBS        定容到100mL

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