这是本人精心总结出来的
NaCl 9g
Na2HPO4.12H2O 6g
NaH2PO4 .2H2O 0.4g
PH：7.2
生物三节律
分子克隆上的PBS配方：
NaCl: 8.00g
学生证制作KCl: 0.20g
Na2HPO4*H2O: 1.56g
KH2PO4: 0.20g
1. 0.01mPBS (PH7.4)
Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠） 3.473g
NaH2PO4•12H2O（磷酸二氢钠） 0.226g
Nacl 0.9g
三蒸水 1000ml
2. 加氯化钠的称PBS，加氯化钾、氯化钠的称KPBS。不加氯化钠、氯化钾的称PB。
关于缓冲溶液PB的配制，好多参考书如生物技术实验的后面均附有缓冲溶液的配制配方，可以根据需要配制PH5.7～8.0的PB缓冲溶液。S就是指氯化钠的含量，一般为0.85％，即是100ml里面加0.85克，这个时候的PBS的浓度是0.1M的。一般在免疫组化洗涤中采用0.01M的PBS，pH7.0～7.4。我们在实验中直接将0.1M的稀释十倍，即可。最好能现配现用。母液4℃可以保持1～2周，影响不大。
0.01M PBS （PH 7.2）（g/ L）
NaCl 8.0
KCl 0.2
KH2PO4 0.2
Na2HPO4.12H2O 2.9
用1N的NaOH调节PH 值至7.2
ddH2O定容至1000ml，高压灭菌
0.01PBS液：
NaH2PO4.2H2O 0.5g
Na2HPO4.12H2O 5.9g
NaCl 9g
加双蒸水至1000ml差不多刚好pH7.4
PBS的配制
称取NaCl 8.00g KCl 0.20g KH2PO4 0.20g Na2HPO4•H2O 1.56g，加入蒸馏水至总体积为1000ml，溶解后过滤除菌待用。
老人发明智能车0.01mol/L，pH7.4的PBS
0.2mol/L Na2HPO4 81ml
0.2mol/L NaH2PO4 19ml
氯化钠 17g
蒸馏水加到 2000ml
其实道理是一样。
0.1M的PB（不加氯化钠）配方：
1.储备A液，磷酸氢二钠35.6克，加重蒸水溶解至1000ml。
储备B液，磷酸二氢钠13.8克，加重蒸水溶解至500ml。
2.工作液（0.1M），PH A液（ml） B液（ml） 重蒸水（ml）
7.0 30.5 19.5 50
7.4 40.5 9.5 50
8.0 47.35 2.65 50
0.1M的PBS配方：
钢筋剥肋滚丝机储备A液： 1M的氯化钠溶液（氯化钠5.844克，加重蒸水至100ml ）
储备B液：0.2M磷酸氢二钠（Na2HPO4 5.678克加重蒸水至200ml 或Na2HPO4•12H2O14.32克加重蒸水至200ml ；
储备C液：0.2M 的磷酸二氢纳（NaH2PO4）2.76克加水至100ml或（NaH2PO4•12H2O）
3.12克加重蒸水至100ml；
工作液：A液 12.5ml 62.5ml 12.5ml
B液 8.1ml 40.5ml 81ml
C液 1.9ml 9.5ml 19ml
加重蒸水至 100ml 500ml 1000ml
（在工作液中 磷酸缓冲液浓度为0.1M,L氯化钠浓度为0.125M,PH为7.3—7.4，于4度冰箱中克保存三月）
我纯化蛋白用的PBS：1.37 mM 的 NaCl 8g，2.7 mM的 KCl 0.2g，10 mM 的 Na2HPO4·12H2O 3.58g，2 mM的KH2PO4 0.27g，然后加NaOH 用PH计调PH值8.0。
从美国来的配方，我们实验室一直用的这个，很好使的！我们科在临床上做了很多免疫组化，结果很漂亮。
是工作浓度，根据自己的要求配浓缩液
Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠） 13.42g
NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠） 1.95g
Nacl 42.5g
三蒸水 5000ml
关键是pH，一定要调在7.4左右，其实配方都差不多，关键是pH。
可以用NaOH和盐酸调。
(1)0.2M Na2HPO4: Na2HPO4·12H2O 71.64g加蒸馏水至1000ml;
(2)0.2M NaH2PO4: NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml。
按81.0ml(1)+19.0ml(2)比例，再加17gNaCl和1900ml蒸馏水，即为0.01MPBS
加入蒸馏水时不要全部加完，最后剩余100ml不要加，用NaOH或Hcl调节pH之后，再将蒸馏水补足。
“0.01M到底是指的什么？”
指的是H2PO4或HPO4的浓度。0.2M的H2PO4或HPO4取100ml，稀释20倍成2000ml。此时的浓度为0.2/20=0.01M。
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）
NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl
用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
我们实验室的配方：
A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。
B液：0.11mol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。
pH －－ A液 （ml） －－ B液（ml）
5.60 －－ 9.50 －－ 0.25
5.91 －－ 9.00 －－ 1.00
6.24 －－ 8.00 －－ 2.00
6.47 －－ 7.00 －－ 3.00
6.64 －－ 6.00 －－ 4.00
6.81 －－ 5.00 －－ 5.00
6.98 －－ 4.00 －－ 6.00
7.17 －－ 3.00 －－ 7.00
7.38 －－ 2.00 －－ 8.00
7.73 －－ 1.00 －－ 9.00
8.04 －－ 0.50 －－ 9.50
免疫组化操作流程（PAP法、ABC法）
1. 脱蜡至水：二甲苯（1）、（2）脱蜡各15min感应门制作→无水乙醇（1）、（2）各5min→90%乙醇5min→水洗→PBS5min
2. 抗原修复：1）微波修复：微波中高档5min 3次→自然冷却至室温→PBS过一遍 3次 2）酶消化：0.1%胰蛋白酶37℃孵育30min→ PBS5min
3. 阻断内源性过氧化物酶：置3% 3次 双氧水浸泡15min →PBS5min
4. 封闭：10%正常二抗血清室温10min
5. 一抗孵育：甩去血清后加一抗，置湿盒内4℃过夜→PBS5min 3次
6. 二抗孵育：擦片后加二抗，置湿盒内37℃孵育30min→PBS5min 3次
7. PAP或SABC孵育：擦片后加PAP或SABC，置湿盒内37℃30min→PBS5min 3次
8. 显：DAB-H2O2显10min左右，镜下控制→水洗终止显
9. 复染：苏木素复染1min→水洗至变蓝→1%盐酸乙醇分化→水洗至变蓝
10. 封片：无水乙醇脱水5min 2次→二甲苯透明5min 2次→中性树胶封片
注意事项：
1) DAB为致癌物，操作时带手套，用专用染缸染，染后将染用具清洗干净，滤纸和小木棍用后丢弃。
2) 微波修复时外缸内不能有水，否则容易将染缸煮破。
3) 所有操作步骤中，均应注意防止干片，以免产生非特异性显。
4) PBS配方： Na2HPO4 37.3g
KH2PO4 4.3g 加蒸馏水至10000ml(PBS瓶划蓝线处)
NaCl 68g
1. 是否每个抗体都要经过抗原修复？我所知道有些抗体不需要经过抗原修复，甚至某些单抗。
2. 二抗，置湿盒内37℃孵育30min,温度太高了，容易产生非特异性显。只要20℃孵育30min就行了。
3. DAB-H2O2显也只要3到5分钟足够了。
几个问题？节能烤箱
1。“10%正常二抗血清“是什么？
含2抗的血清？ 还是单纯血清？用5%脱脂奶粉也可以把
2“. PAP或SABC孵育：擦片后加PAP或SABC，置湿盒内37℃30min→PBS5min 3次"
这一步是干什么的？pap?sabc是什么？我看我的师兄做得没有这一步啊？
3。“DAB-H2O2“ 是什么？怎么配？我师兄好像是用蒸馏水来陪dab的
4。“脱水“和最后“封片“ ，我们这里用的事梯度酒精70%-100%。作用是不是和搂主单纯用无水酒精一样啊？
谢谢
1.10%正常二抗血清是指的抗血清,比如你的一抗是兔抗鼠的,那你的二抗就应
该是抗兔血清,如羊抗兔血清,不是指的单纯血清 用5%脱脂奶粉就不可以了
2.是指加二抗,三抗或SABC复合物, 之间要用PBS洗三次 ,每次5分钟
3.DAB-H2O2是指DAB液中要有H2O2,就是稳定,你师兄用蒸馏水来配DAB，那
应该是工作液，ABC各一滴，其中的C液就是双氧水
4 梯度酒精70%-100%脱水应该比单纯的无水酒精效果要好
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议