涂料过滤器〔一〕名词解释
1.操纵子；2.启动子；3.增强子；4.衰减子；5.反式作用因子；6.落解物基因活化蛋白；7.克隆技术；8.限制性核酸内切酶；9.基因组DNA文库；10.cDNA文库。
〔二〕填充题
1．正调控和负调控是基因表达的两种最全然的调节形式，其中原核细胞常用模式，而真核细胞常用模式。
2．在原核细胞中，由同一调控区操纵的一功能相关的结构基因组成一个基因表达调控单位，称为，其调控区包括基因和基因。
3.有些基因的表达较少受环境的碍事，在一个生物体的几乎所有细胞中持续表达，因此被称为；另有一些基因表达极易受环境的碍事，在特定环境信号刺激下，相应的基因被激活，基因表达产物增加，这种基因是可的基因，相反，要是基因对环境信号应答时被抑制，这种基因是可的基因。 4.在基因重组技术中，切割DNA用，连接DNA用。
5.除噬菌体外，和也是分子克隆的常用载体。
和。用于植物基因工程的常用载体是。
，将噬菌体DNA转进细菌称。
8.Southern印迹法、Northern印迹法和Western印迹法是分不用于研究、和转移和鉴定的几种常规技术。
〔三〕选择题〔在备选答案中选出1个或多个正确答案〕
1．一个操纵子通常含有
E两个启动序列和数个编码基因
2．有关操纵子学讲的论述，正确的选项是
C.操纵子调控系统由调节基因、操纵基因、启动子和结构基因组成
3．转录因子是
4．阻遏蛋白〔阻抑蛋白〕识不操纵子中的
摩托车化油器结构图
A.启动基因B.结构基因C.操纵基因D.内含子E.调节基因
5.在以下哪种情况下，乳糖操纵子的转录活性最高
A.高乳糖，低葡萄糖B.高乳糖，高葡萄糖C.低乳糖，低葡萄糖
ˊˊˊ和3ˊ侧翼序列
ˊ和3ˊ
A.具有激活功能的调节蛋白B.具有抑制功能的调节蛋白
C.对自身基因具有激活功能的调节蛋白D.对另一基因具有激活功能的调节蛋白
A.它能识不DNA特定的碱基顺序，并在特定的位点切断DNA
B.切割点四面的碱基顺序一般呈回文结构
D.是重组DNA的重要工具酶
9.基因工程中，不常用到的酶是
10以下哪项不能作为表达载体导进真核细胞的方法？
A.在体内合成的与病毒DNA或RNA互补的DNA
13．建cDNA文库时，首先需不离细胞的
〔四〕判定题
1.高等真核生物的大局部DNA是不为蛋白质编码的。
2.大多数总管基因编码低丰度的mRNA.
3.乳糖能够诱导乳糖操纵子的表达，因此乳糖对乳糖操纵子的调控属于正调控系统。
4.某些蛋白质既能够作为阻遏蛋白又能够作为激活蛋白参与基因表达的调控。
5.预备用原核生物表达真核基因时，最好通过cDNA猎取目的基因。
6.用原核生物表达真核生物的糖蛋白，其表达产物可不能有正常的生物学功能。
7.Ti质粒能够随土壤农杆菌进进植物细胞。
λ噬菌体作克隆载体时，外源DNA片断越小，克隆的成功率越高。
9.基因克隆选择的宿主细胞必须无限制性核酸内切酶。
10.采纳蓝白斑选择法时，蓝菌落或噬菌斑是含有重组载体的克隆。金属抛光轮
〔五〕分析与计算题
1.简述操纵子的全然结构。
侧安全气囊2.举例讲明基因表达的诱导与阻遏，正调控与负调控。
3.概述原核生物基因表达调控的特点。
4.概述真核生物基因组的特点。
5.概述真核生物基因表达调控的特点。
6.简答真核生物基因表达的调控方式。
7.常用的限制性核酸内切酶有哪些特点？
8.在基因克隆中，目的基因有哪些要紧来源？
9.什么是cDNA文库？cDNA文库与基因组文库有何差异？
10.用于DNA重组的载体应具备什么条件？常用的载体有哪一些？各有何特点？
11.简述连接目的基因与载体的要紧方法？
12.概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。
空气中取水参考答案
〔一〕名词解释
1.原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分不翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。
顺式调控元件：指可碍事自身基因表达活性的真核DNA序列。依据顺式作用元件在基因中的位置、转录激活作用的性质及发扬作用的方式，分为启动子、增强子及沉默子等。
2.是RNA聚合酶结合位点四面的一组转录操纵组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构紧密联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。
3.是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由假设干组件构成，全然核心组件常为8～12bp，能够单拷贝或多拷贝串连形式存在。
4.在原核生物的Trp操纵子结构中，第一个结构基因与启动子P之间有一个区域含Trp密码子，
称衰减子。当环境中Trp浓度特别高时，它可通过编码并翻译，使正在转录的mRNA形成终止信号，从而终止Trp操纵子的表达。这种转录衰减实质上是转录与一个前导肽翻译过程的偶联，它是原核生物特有的一种基因调控机制。
5.大多数真核转录调节因子由某一基因表达后，通过与特异的顺式作用元件相互作用〔DNA-蛋白质相互作用〕，或通过与基它调节因子的相互作用〔蛋白质-蛋白质相互作用〕，反式激活另一基因的转录，故称反式作用蛋白或反式作用因子。
6.也确实是根基cAMP受体蛋白〔cAMPreceptorprotein,CRP〕，它与cAMP的复合物能够促进某些原核操纵子〔如乳糖操纵子〕的转录。
7.“克隆〞作为名词指相同的分子或细胞构成的体，或一个共同的祖先通过无性生殖所得到的体，作为动词指猎取“克隆〞的过程。克隆技术特指猎取“克隆〞的过程，包括分子克隆，细胞克隆等技术。
8.确实是根基识不DNA的特异序列，并在识不位点或其四面切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制、修
饰体系，限制外源DNA，保卫自身DNA，对维持细菌遗传物质的稳定具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类，其中的Ⅱ类酶能特异性在一定的核苷酸序列处切割双链DNA，因而在基因工程中得到广泛的应用。
9.利用限制性核酸内切酶将染体DNA切割成一定大小的片段，将这些片段分子与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转进受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌中的重组DNA分子可能包含不同的染体DNA片段，如此，只要得到的转化细菌所携带的重组DNA分子种类足够多，那么全部转化细菌所携带的各种染体片段就代表了染体的整个基因组。存在于转化细菌内，由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组的全部基因信息。
10.以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体〔常用噬菌体或质粒载体〕连接后转化受体菌，那么每个细菌含有一段cDNA，并能生殖扩增，如此包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一局部表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同，因此cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显
然比基因组DNA文库小得多，能够比立轻易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。另外，对真核细胞来讲，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是差不多过剪接，往除了内含子的cDNA。一般来讲，从cDNA文库获得的基因，因不含内含子而片段较小，更适合于用作基因工程的目的基因。由于原核生物不存在将hnRNA加工成mRNA的酶系统，假设用原核生物表达真核基因，那么目的基因一定要通过cDNA猎取。
〔二〕填充题
1．负调控，正调控；2.启动子，启动，操纵；3.总管基因，诱导，阻遏；4.限制性核酸内切，DNA连接；5.质粒，病毒；6.腺病毒载体，反转录病载体，Ti质粒。7.转化，转导；8.DNA，RNA，蛋白质；
〔三〕选择题〔在备选答案中选出1个或多个正确答案〕
1.〔B〕操纵子均含有数个编码基因，但启动序列只有1个。
2.〔B，C，D〕操纵子调控系统由调节基因，操纵基因，启动子和多个结构基因组成，是
原核生物基因表达调控的要紧方式，诱导物与组遏蛋白结合启动转录。诱导物不能直截了当与启动子结合。真核生物不存在操纵子调控系统。
3.〔C〕转录因子是调节转录起始的蛋白质，对转录延伸的速度，转录产物分解的速度和转录产物的加工均无碍事。
4.〔C〕操纵基因位于启动基因与结构基因之间，阻遏蛋白与操纵基因结合后，与启动基因结合的RNA聚合酶不能转录结构基因。
5.〔A〕参与乳糖代谢的三种酶的表达同时受控于正负调控两种机制，只有在正调控发扬作用，负调控不起作用的时候，这三种酶才能有效的表达。当培养基中参加乳糖的时候，参与负调控的阻遏蛋白将失往活性，但要是培养基中含有葡萄糖，那么细菌优先利用葡萄糖，这时参与乳糖代谢的酶仍然不能有效的表达，这是因为葡萄糖落低了细胞内的cAMP水平，而cAMP浓度的落低，导致落解物激活蛋白丧失活性，正调控的机制失往作用，这时三种酶不可能正常的表达。
6.〔E〕顺式作用元件是对某基因自身有调节功能的DNA序列，其中的启动子多在基因的5ˊ
侧翼，但增强子既能够在5ˊ侧翼，又能够在3ˊ侧翼，一般距基因较远。有些顺式作用元件甚至能够在基因内部。
汽水分离
7.〔E〕反式作用因子是指对另一基因的表达有激活或抑制作用的蛋白质因子。
8.〔C〕限制性核酸内切酶要紧存在于细菌，它能够水解外源DNA，而自身DNA因在特定位点被甲基化而能够免遭水解。限制性核酸内切酶由于可识不特定的碱基序列并在特定的位点切割双链DNA，因而在基因工程中得到广泛的使用。
9.〔C〕DNA聚合酶可用来猎取目的基因，测序和PCR等项工作，限制性核酸内切酶用于DNA酶切片段长度的多态性分析，载体和目的基因的特异性切割等工作，DNA连接酶可用于基因重组的连接反响。DNA解链酶在基因工程中几乎用不到。
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