综合分析实验：实验3：果蔬中维生素C测定

果蔬中维生素C含量的测定

维生素C 又名抗坏血酸, 是维持机体正常生理功能的重要维生素之一, 而人体不能自身合成, 只能从食物和药物中摄取, 因此, 食品、药物中维生素C的分析具有重要意义。蔬菜水果中维生素C（抗坏血酸）含量的测定方法有很多，常用的方法有荧光比法、光度比法、电化学法、滴定法、酶法、谱法等。辣椒中的维生素C的含量较高，有些品种理论值可高达198mg/100g，橙子中维生素C的含量也达70 mg/100g，西红柿中维生素C的含量也约20 mg/100g，但品种不同差别较大。本实验利用荧光法和固蓝盐B比法分别测定西红柿和橙子中维生素C的含量。

固蓝盐B比法是利用在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物，可在其最大吸收波长（420nm）处测定吸光度，与标准系列比较定量。

荧光比法是基于维生素C 被氧化剂如活性炭或Cu2+氧化为脱氢抗坏血酸（DHAA），DHAA 进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用, 通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。本实验选取Cu2+做氧化剂，该法样品处理简单、快速, 体系的稳定性好。

2% 乙酸的配制：量取20.0mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。

西红柿样品处理：准确称取80g 左右西红柿，剪碎放入榨汁机中（榨汁机中预先加入50mL 2%乙酸），搅成匀浆，用布氏漏斗抽滤，滤液转移到250mL棕容量瓶，用蒸馏水定容。

橙子样品处理：将橙子去皮和籽后，准确称取50g左右，剪碎放入榨汁机中（榨汁机中预先加入50mL 2%乙酸），搅成匀浆，匀浆液转移到250mL棕容量瓶定容。定容液用漏斗过滤，干滤法（漏斗、滤纸承接烧杯干燥）,注意每次过滤前摇匀容量瓶溶液再过滤，过滤滤液约60mL左右备用。

Vc储备液配制：准确称取0.2g左右维生素C溶解于蒸馏水中，并转移到100mL棕容量瓶里，定容，放在暗处保存。

仪器：分光光度计、荧光光度计、分析天平、榨汁机（或搅拌机）、减压过滤装置、25mL移液管（2支）、50mL棕容量瓶（4个）、100mL棕容量瓶2个）、250mL棕容量瓶（2个）、10mL比管一套（8支）、25mL比管一套（9支）、1 mL吸量管（5支），2mL吸量管（5支）、5mL吸量管（2支）、量杯、漏斗、漏斗架及滤纸、剪刀、

试剂：维生素C、冰醋酸、EDTA、固蓝盐B、CuSO4、NaOH、醋酸钠、十六烷基三甲基溴化铵( CTMAB )、苯甲酸( BA)

方法一：固蓝盐法（分光光度法）

0.5 mol/L乙酸：量取14.5mL冰醋酸，加水稀释至500mL。

0.25 mol/L EDTA：称取46.5gEDTA固体，加水加热溶解，冷却并稀释到500mL。

固蓝盐B：称取0.2g固蓝盐加水于100mL棕容量瓶，定容，放在暗处，常温下可保存三天以上。

Vc标准溶液：准确移取2.50mL Vc储备液，溶于50mL棕容量瓶中，加5.0mL 2% 乙酸，用蒸馏水

定容，摇匀备用。

西红柿待测液配制（与荧光法共用）：准确移取25mL西红柿样品液至50mL棕容量瓶，用蒸馏水定容，摇匀备用。

橙子待测液配制（与荧光法共用）：IL-40准确移取25mL橙子样品液至50mL棕容量瓶，用蒸馏水定容，摇匀备用。

测量方法：

取一套10ml比管,按下表加入溶液后用蒸馏水稀释至10mL,混匀，室温放置20min后，用1cm比皿，以0号为参比，420nm处用分光光度计测定。

管号	0	1	2	3	4	5	6	7
Vc标准液/mL	0.00	0.20	0.40	0.60	0.80	1.00	西红柿待测液1.00mL	橙子待测液1.00mL
V血栓疏通机器是真的吗c含量/ug
0.25mol/l EDTA	0.5mL
0.5mol/l乙酸	0.5mL
固蓝盐B	1.5mL
定容10mL，摇匀，室温放置20min
吸光度

以Vc含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出线性方程，根据样品吸光度、样品稀释倍数及样品质量，计算出原西红柿及橙子样品中维生素C的含量（mg/100g）。

方法二：荧光法

CuSO4溶液：2. 0 × 10- 3 g /mL：称取0.2g CuSO4，加水溶解配成100mL。

十六烷基三甲基溴化铵( CTMAB )溶液（6. 0 × 10- 4g /mL）：称取0.3g CTMAB，加水溶解配成500mL。

苯甲酸( BA )溶液（1. 0 × 10- 4g /mL）：称取50mg苯甲酸，加水溶解配成500mL。

醋酸—醋酸钠缓冲溶液（ pH = 6.0）：称取71g CH3COONa溶于适量蒸馏水，加再入2.9 mL冰醋酸配成500 mL。

0.2 mol/L NaOH溶液：称取8.0 g NaOH溶于适量蒸馏水中配成1000mL。

Vc标准溶液：准确移取2.50mL Vc储备液，于50mL棕容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀备用。

西红柿待测液配制（可与分光光度法共用,）：准确移取25mL西红柿样品液至50mL棕容量瓶，用蒸馏水定容，摇匀备用。

橙子待测液配制（与分光光度法共用）：准确移取25mL橙子样品液至50mL棕容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀备用。

测量方法：

1. 标准系列及样品溶液的配制：

在9支25 mL比管中按下表依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化铵溶液， 2. 0 mL苯甲酸溶液，一定体积的维生素C 标准溶液及样品待测液，一定体积的0.2 mol/L NaOH溶液，摇匀，再加入 5. 0 mL pH = 6.0的醋酸—醋酸钠缓冲溶液，然后用蒸馏水定容至25mL后摇匀，在室温放置30 min后备用。

注意严格按照试剂加入顺序操作！所加试剂顺序依次为CuSO4溶液、十六烷基三甲基溴化铵溶液、苯甲酸溶液、维生素C 标准溶液及样品待测液、NaOH溶液、醋酸—醋酸钠缓冲溶液。

管号	0	1	2	3	4	5	6	7	环视制作者8 煤仓疏松机
CuSO4溶液	0.6mL
十六烷基三甲基溴化铵溶液	2.0mL
苯甲酸溶液	2.0mL
Vc标准液/mL	0.00	0.30	0.60	0.90	1.20	1.50	1.80	西红柿待测液2.00mL		橙子待测液2.00mL
Vc含量/ug
0.2 mol/L NaOH溶液	0.0 mL							0.3mL		0.3mL
醋酸—醋酸钠缓冲溶液	5.0mL
定容25mL,摇匀，室温放置30min
荧光强度F
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