结核杆菌RNA-SAT测定在过程中的疗效判定与评估
【摘要】目的：分析结核杆菌RNA实时荧光恒温扩增技术（SAT）测定在过程中的疗效判定与评估作用。方法：此次实验对象为行标准化抗结核至6个月末的涂阳初治患者，入选时间均在2020.06月至2022.06月，入选患者共100例，利用随机数字表法进行分组，分为对照组（痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查，n=50）与观察组（结核杆菌RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查，n=50）。观察并对比两组的检测结果。结果：在准确率、敏感度及特异度上，观察组均高于对照组（P＜0.05）。结论：结核杆菌RNA-SAT用于患者期间疗效判定及评估的效果显著，具有较高的敏感度与特异度，有利于提高疗效判定与评估的准确性，为后续方案的调整提供依据，临床可进一步推广应用。 【关键词】结核杆菌；RNA实时荧光恒温扩增技术；；疗效监测
涂阳初治是临床常见的慢性传染疾病，主要是由于结核杆菌感染所致，给患者的日常生活造成极大的不良影响[1]。标准化抗结核是的主要手段，有利于改善临床症状，控制病情恶化，促使患者早日康复。目前，我国的疗效判定依据于痰浓
缩集菌检测及痰结核菌培养进行的疗效监测，但监测结果不理想。临床研究发现，RNA实时荧光恒温扩增技术（SAT）用于疗效监测的效果良好，具有较高的敏感度与特异度[2]。鉴于此，本文就结核杆菌RNA-SAT在过程中的疗效判定与评估效果进行分析，详细报告如下：
1 对象和方法
1.1 对象
此次研究开展时间在2020.06~2022.06，实验对象为行标准化抗结核至6个月末的涂阳初治患者，利用随机数字表法分为2组，每组例数为50例。观察组中男30例、女20例；年龄区间范围在18岁至65岁，平均（41.53±8.24）岁；病程时间3个月~18个月，平均（12.50±1.20）个月；体质量指数17.85kg/m2~28.63kg/m2，平均（22.59±1.47）kg/m2。对照组中男28例、女22例；年龄范围在20岁-65岁，平均（41.67±8.54）岁；病程时间1个月~17个月，平均（12.30±1.10）个月；体质量指数17.26kg/m2~28.75kg/m2，平均（22.64±1.58）kg/m2。对比两组性别例数、年龄范围、病程时间及体质量指数的分布情况，P＞0.05。此次研究得到伦理委员会的批准。
纳入标准：（1）经胸部X线、螺旋CT、MRI及病理学检查诊断为，并且符合中华医学会编撰基层诊疗指南(实践版·2018)[3]的诊断标准；（2）年龄范围在18岁~65岁；（3）均接受标准化抗结核者，且时间为6个月末；（4）依从性良好，能配合完成随访者；（5）了解此次研究流程，同意加入研究者。
排除标准：（1）肝脏、肾脏等脏器功能不全者；（2）存在严重病毒感染史者；（3）出院后失联，无法顺利开展随访者；（4）精神异常或存在沟通障碍者。
1.2 方法
1.2.1 观察组
观察组接受结核杆菌RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查，操作方法为：
（1）标本采集：在第2个月末、第3个月末、第5个月末、第6个月末，早晨起床，立即采用清水漱口后咳出5ml痰液作为标本，医院负责留取就诊时与随访时的痰液标本。根据《结核病诊断细菌学检验规程》进行处理，将每次收集的痰标本分为3份，进行结核杆菌RNA-SAT检测、痰浓缩集菌检测及痰结核菌培养检查。
（1）RNA-SAT检测：采用结核分枝杆菌核酸检测试剂盒（试剂盒厂家：上海仁度生物科技股份有限公司）、核酸提纯仪（厂家：上海仁度生物科技有限公司；型号：FZP-1型）进行检测，严格按照说明书进行操作。详细将待检结核杆菌标本进行离心分离，离心时间为5min，离心速度设为13000r/min，去掉上清液后加入50μL裂解缓冲液（采用焦炭酸二乙酯处理过的无菌水配制为10mmol/L柠檬酸钠，pH=8.0），重悬后放入超声清洗器（上海易净超声波仪器有限公司）中进行超声处理，超声功率设为300W。超声处理结束后，将2μL处理物加入预先混合好的30μl扩增检测液的洁净微量反应管或反应板中，将反应管或反应板放置在恒温实时荧光定量PCR仪（厂家：美国Stratagene；型号：Agilent MX3005p）上进行检测。
自动涂装线（2）痰结核菌培养检查：按照《结核病诊断实验室检验教程》进行操作，取1mL~2mL痰标本，做好常规消化和离心处理后取0.5mL沉淀物，将其置入MGIT培养管内，放入培养箱内进行培养，培养箱温度设为37o明框玻璃幕墙C，仔细观察菌生长情况，使用手工MGIT荧光读数仪进行判读，阴性培养管继续进行培养和读管，时间持续6周。
（3）痰浓缩集菌检测：将痰与消化液按大约1:2的比例加入痰消化液，轻轻摇晃试管确保
液体混合均匀，促使痰液消化后置入水浴锅中煮沸30min，混匀后取10ml于试管内并进行离心处理，离心时间为30min，离心速度为3000r/min，去除上清液并预留大约0.25ml沉淀，混合均匀后进行涂片、干燥，采用萋-尼氏染，干燥后进行镜检。
1.2.2 对照组
对照组接受痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查，二者操作方法参照观察组。
1.3 观察指标
将痰结核菌培养作为金标准，分析两组的准确率、敏感度及特异度。准确率=（真阳+真阴）/总例数，敏感度=真阳/（真阳+假阳），特异度=真阴/（真阴+假阴）。
1.4统计学分析
统计患者相关指标数据，使用SPSS23.0软件分析，计数资料采用百分比（%）表示，进行卡方（x2）检验法，当所计算出的P＜0.05时则提示进行对比的对象之间存在显著差异。
2 结果
2.1 分析RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查的结果
50例涂阳初治患者经标准化抗结核后，结核杆菌培养阳性44例，结核杆菌培养阴性6例。从表1的结果可以看出，经RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查后，结核杆菌阳性39例，结核杆菌阴性11例。
表1 分析RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查
RNA-SAT检测+痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查 | 痰结核菌培养 | 合计 |
阳性 | 阴性 |
阳性 | 38 | 1 | 39 |
阴性 | 6 | 5 | 数字电视接收器11 |
合计 | 44 | 吸脂器6 | 50 |
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抗震支架重量
2.2分析痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查的结果
50例涂阳初治患者经标准化抗结核后，结核杆菌培养阳性43例，结核杆菌培养阴性7例。从表2的结果能够发现，经痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查后，结核杆菌阳性28例，结核杆菌阴性22例（P＜0.05）。
表2 分析痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查
痰浓缩集菌检测+痰结核菌培养检查 | 痰结核菌培养 | 合计 |
阳性 | 阴性 |
阳性 | 25 | 3 | 28 |
阴性 | 18 | 4 | 22 |
合计 | 43 | 7 | 50 |
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2.3对比分析两组的准确率、敏感度及特异度
从表3的结果可知，在准确率、敏感度及特异度上，观察组均高于对照组（P＜0.05）。
表3对比分析两组的准确率、敏感度及特异度[n(%)]
组别 | 准确率（%） | 敏感度（%） | 特异度（%） |
观察组 | 天线制作86.00（43/50） | 86.36（38/44） | 83.33（5/6） |
对照组 | 58.00（29/50） | 58.14（25/43） | 57.14（4/7） |
x2 | 19.444 | 19.860 | 16.405 |
P | 0.000 | 0.000 | 0.000 |
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3 讨论
是临床常见的结核病，具有较高的发病率与死亡率，已成为我国人口死亡的重要原因。世界卫生组织统计发现，2015年全球新发结核病患者为140万，发病率大约为142/10万；我国结核病患者大约为91.8万，占比约为8.8%[4]。患者发生后，易出现咳嗽、咳痰、气短、胸闷等症状，若未及时可危及生命安全。目前，临床对患者多采取标准化抗结核药物，但抗结核药物后效果的判定与评估难度较大，导致其不能及时减少或增加抗结核药物剂量，无法达到预期效果[5]。如何为患者选择合适的疗效评估判定监测方法是目前临床亟需解决的问题，也是此领域研究的热门课题。
痰结核菌培养检查是患者疗效评估判定的重要监测手段，具有较高的检出率，但检查耗时较长，且不能区分死菌与活菌，不能及时观察用药效果，无法在临床推广应用[6]。痰浓缩集菌检测是临床检测结核杆菌的常用方法，但其阳性检出率较低，灵敏度较差，进而影响疗效判定与评估，导致其临床应用范围受限。RNA-SAT检测是近些年来新兴的检测技术，虽不能直接做出药物敏感试验，但具有特异性高、敏感度良好、阳性检出率高等特点，能够快速、准确判定患者的效果，提高疗效评定与判断监测的准确性[7]。
此次研究发现，观察组经RNA-SAT检测+痰结核菌培养检查+痰浓缩集菌检测后，其准确率、敏感度及特异度均高于对照组（P＜0.05），这与耿书军等[8]的研究报道相似，提示在痰结核菌培养检查+痰浓缩集菌检测的基础上，联合RNA-SAT检测用于患者疗效监测的效果更佳。分析其原因是：RNA-SAT检测是一种核酸检测技术，其将结核分枝杆菌特异性的16srRNA作为检测靶标，利用恒温RNA扩增技术扩增靶标片段，将荧光标记的探针与靶标片段的扩增产物进行杂交后能释放出荧光信号，通过对荧光信号进行实时检测，从而快速且准确判断待检标本中是否存在结核分枝杆菌，区分死菌与活菌，提高检测准确率[9]。同时，RNA-SAT检测的RNA作为起始靶标，其仅寄生在活的病原体中，能直接判断所用药物的疗效，根据检测结果及时对疗效的判定与评估，指导临床精准用药，及时调整药物使用情况，故RNA-SAT检测可作为疾病疗效监测的辅助检测手段[10]。
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