实验室常用试剂配制

实验室常用溶液的配制
1mol/L亚精胺(Spermidine: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20
1mol/L精胺(Spermine:溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT:在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml
1mol/L氯化钾(KCl:溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml
3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH5.2,再加水定容到100ml
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml
5mol/L氯化钠(NaCl:溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml
10N氢氧化钠(NaOH:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L
10mg/mlRnase(无DNaseDNasefree RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/LTrisHClpH7.5,于-20贮存。(配制过程中要戴手套)。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml
100%三(TCA:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)。
2.5 Xgal5--4--3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mgXgal1ml的二甲基甲酰胺(DMF,用铝箔包裹装液管,贮存于-20
25mg/ml IPGT:溶解250mgIPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20
100×Denhardt试剂Denhardt's regent)(100ml):2%聚蔗糖(Ficoll400型)2g 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40), 2%BSA(组分V),溶于水中,加水至总体积为100ml,过滤除菌及杂质,分装成小份于-20贮存。
10×标准扁蓿豆DNA连接酶缓冲液standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)(10ml):0.5mol/L Tris-HCl 5ml100mmol/L MgCl2 1ml100mmol/L DTT 1ml2mmol/L ATP 200ul 5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)50ul0.5mg/ml BSA(组分V)(可选)0.5ml,水2.25ml,将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTANaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1gNa2EDTA·2H2O20gNaOH,并溶于水中,定容至1L
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOHpH6.8-8.2),然后用水定容至100ml
10mg/ml牛血清蛋白(BSA:加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20
100mmol/L PMSF:溶解174mgPMSF(苯)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20
20mg/ml蛋白酶Kproteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20
10SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力
搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L
10mmol/L dNTP混合液(20ul10mmol/L dATP 2ul10mmol/L dCTP 2ul10mmol/L dGTP 2ul10mmol/L dTTP 2ul,水12ul
20PEG 8000/2.5M NaCl10ml 质量浓度为20%聚乙二醇20g2.5mol/L 氯化钠水 50ml5mol/L 氯化钠 14.6g 固体氯化钠补足100ml,加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC1L300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)88.2g3mol/L 氯化钠水175.3g,于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH7.0,用水补足体积至1L
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水:加100ul DEPC 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8 人造板热压机混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除
去树脂后分成小份,充氮气于-80贮存(防止氧化)。
.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液:
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液(1L)2mol/L Tris 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水,242g Tris57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L),200ml0.5 mol/L EDTApH 8.0),水补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液(1L),445 mmol/L Tris 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水, 54g Tris27.5g 硼酸,20 ml0.5 mol/L EDTApH 8.0),水补足1L
1%溴酚蓝(bromophenol blue):1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FFxylene cyanole FF):1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide:小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4贮存。
.常用培养基
LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 10g, 酵母提取物 5g, 氯化钠 10g,如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L
SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 20g,酵母提取物 5g,氯化钠 0.5g 1mol/L 氯化钾 2.5ml,用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨 12g,酵母提取物 24g,甘油 4ml,各组分溶解后高压灭菌。冷却到60,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4纳米润滑油的溶液(2.31gKH2PO412.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 16g,酵母提取物pstl 10g,氯化钠 4ml,如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L
YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨 20g,酵母提取物 10g,葡萄糖 20g,用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g氨酸,因为YPD培养基是氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(机器人定位carbenicillin50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(爬墙式methicillin100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

本文发布于:2024-09-20 19:53:07,感谢您对本站的认可!

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