这三种染我全做过，现将操作方法和大家交流～
碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶之一。
1 Gomori钙钴法
【染原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸
与高浓度的钙盐结合形成无的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑的硫化钴沉
淀在酶活性处。
【孵育液配制】3%β-甘油磷酸钠 5ml
2%钠 5ml
蒸馏水 10ml
2% CaCl2 10ml
2% MgSO4 1ml
【步骤】
(1)将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。
(2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。 (3)入孵育液中，37?孵育4-6h。自来水冲洗数次。 (4)2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。
(5)1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑颗粒或块状沉淀。 rtre2 偶氮偶联法:
【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐 20mg
中药抑菌DMSO 0.5ml
0.2mol/L醋酸缓冲液(PH 9.2) 50ml
六偶氮副品红 0.5ml
1mol/L NaOH调PH 9-10，混合后过滤使用。 硒化卡拉胶
(六偶氮副品红:副品红400mg，浓盐酸2ml，双蒸水8ml混合过滤;临用前与等体积4%亚硝酸钠混合)
【步骤】
(1)细胞爬片成功后，PBS冲洗后，置入4? 10%甲醛固定10min。 (2)蒸馏水冲洗。
(3)将过滤孵液直接滴加于玻片上，室温下作用45min。 (4)流水冲洗，晾干。 (5)甘油明胶封固。
CC数据
【结果】成骨细胞胞质中可见红ALP阳性颗粒。
3 碱性磷酸酶染试剂盒法:
【作用原理】 细胞内碱性磷酸酶在Ph9.4-9.6条件下水解磷酸萘酚AS-MX产生萘酚，后者被重氮盐捕获，
生成不溶性有沉淀。
【作用液配制】取2号储备液10ml，加3号液200ul，再加4号粉剂10mg，振摇速溶，立即过滤到细胞
绷带装
爬片上。
【步骤】
(1)细胞爬片滴加数滴1号液，室温固定一分钟(不可以延长)，流水漂洗2分，晾干。
(2)滴加作用液数滴，置湿盒内于37?孵育2小时，流水冲洗2分钟。 (3)滴加5号液数滴，复染5分钟，流水冲洗2分钟，晾干。 【结果】阳性结果是胞浆内出现蓝沉淀。
1 茜素红法
【步骤】
(1)培养皿用PBS冲洗2次，95%乙醇固定10min，双蒸水冲洗3次。 (2)0.1%茜素红-Tris-Hcl(PH 8.3)37?，30min。 卡环弯制
(3)蒸馏水冲洗，干燥，封片。
【结果】染料品种的不同，矿化结节呈现不同的红。
2 von Kossa法
【步骤】
(1)培养皿用PBS冲洗2次，4,多聚甲醛固定5分钟，双蒸水冲洗3次。 (2)培养皿中加入5,硝酸银溶液1ml，将培养板开盖在紫外灯下照射1小时。 (3)倒出残留的硝酸银溶液，蒸馏水冲洗3遍。
(4)培养皿中加入5,硫代硫酸钠溶液1ml，中和残留的硝酸银溶液，吸出残液。 (5)室温下晾干，封固。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议