・基础研究・
刘晓伟张红梅曲宏达
解亚宁
董秋安
许丽许文学
邓虹珠
傅江南
李晓明
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30271567)；广东省中医药管理局基金资助项目(02102074)
作者单位:510515广州，南方医科大学中医药学院临床基础教研室
【摘要】目的制作中医怒、恐伤气的动物模型，建立行为学评估方法。方法分别采用Megan 和
Takashi 方法造模，记录并分析大鼠行为变化，评价模型质量。结果①愤怒模型组大鼠行为得分为(65.88±6.20)分，各行为指标与总分呈中2高度正相关(r =0.363～0.915);②恐惧模型组大鼠行为得分为(1015.50±191.27)分;③旷场实验中的水平得分、垂直得分及总分，愤怒模型组高于正常对照组和孤独对照组(P <0.01)，恐惧模型组明显低于孤独对照组和正常对照组(P <0.01)。结论模型制作方法符合中医的病因病机，模型评估方法可行性较好。 【关键词】愤怒；恐惧；气；动物模型;
行为
Est ablish m en t and behav i oura l eva lua ti on of an i m a l m odel w ith Q i i n jured by anger and fear i n TC M
L I U X iao 2w ei,ZHAN G Hong 2m ei,QU Hong 2da,et al 1D epart m ent of Traditional ChineseM edicine,M edical
U niversity of South 2China,Guangzhou,510515
【Abstract 】O bjecti ve To establish the ani m almodelwith Q i injured by anger and fear in T C M ,and t o set up the syste m of behavi oural evaluati on .M ethods Ani m al models were established according t o M egan and Takashi ’s methods res pectively .The behavi our were recorded and analysed s o as t o evaluate the model .Results ①The average score of anger model gr oup was 65.88±6.20,s o me ite m s were moderately and highly correlated t o t otal score (r =0.363～0.915).②The average score of fear model gr oup was 1015.50±191.27.③Cr ossing ,
rearing ,t otal score of open field test in anger model gr oup increased significantly compared with nor mal contr ol
gr oup and is olati on gr oup (P <0.01),item s in fear model gr oup declined significantly compared with nor mal con 2tr ol gr oup and is olati on gr oup (P <0.01).Conclusi on The established models were ideal ani m al models with Q i
injured by anger and fear which accord f or pathogeny and pathogenesis in TC M.The methods of evaluati on had
better feasibility .
【Key words 】Anger;Fear;Q i;Ani m al model;Behavi our
七情内伤是中医病因学中的重要内容，其中愤怒、
恐惧情绪是较为常见的致病因素，其动物模型制作方面已开展大量工作；但由于情绪的随意性和复杂性，其造模方法和客观化指标仍存在很多不足。本实验参照
Megan 和Takashi 方法[1,2]
制作中医怒、恐伤气动物模型，并通过观察大鼠的行为评价模型质量。现报告如下。
材料与方法
一、实验动物和分组
旋转阀门雄性W istar 大鼠30只,180～220g，购自本校实验动物中心(动物合格证号：粤检证字2002A041号)。实验分为4组(正常对照组、愤怒模型组、恐惧模型组、孤独对照组)，每组6只。另设入侵组6只大鼠，激惹愤怒模型组大鼠。
二、模型制作方法
1.愤怒模型组：大鼠均单独饲养于不锈钢笼中(50c m ×30c m ×20c m )，自由饮食饮水。制造昼夜颠倒环境，每晚24:00开灯，中午12:00关灯，共10d 。第11天13:30开始实验，该时间段内大鼠处于夜间兴
奋状态。在每只模型组大鼠笼内放进1只入侵鼠，开始计时、摄像。前5m in 为双方适应期，记录第6～20m in 内大鼠行为变化。实验结束立即放入旷场实验箱内，进行应激后行为学检测。
2.恐惧模型组：大鼠于同样环境下孤独饲养10d，第11天13:30将大鼠单独放入光电刺激仪(30c m ×40c m ×40c m ，四周为玻璃，底部铺设铜栅，通以1mA 交流电，顶部置10W 日光灯)；前5m in 为适应期，后同时给予电击和闪光，每次1s，间隔1m in，共30次。第12,13天重复实验。第14天实验只予光照，不予电击，摄像记录第6～30m in 内大鼠行为变化，实验结束立即放入旷场实验箱内，进行应激后行为学检测。
3.孤独对照组：大鼠于同样环境下孤独饲养10d，第11天15:30放入旷场实验箱内，进行应激后行为学检测。
4.同样环境下，正常对照组大鼠予以居饲养，自由饮食饮水；入侵组大鼠予以居饲养，实验前2d 禁食，不禁水。本实验中动物抓取要求动作特别轻柔，避免不必要的刺激干扰实验结果。
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三、行为学指标检测方法
1.愤怒模型组大鼠愤怒行为学检测[3]
：愤怒模型组大鼠行为变化包括,①搏斗次数(A ttack /fights )：大鼠嘶咬、拳击、后顶、脚蹬入侵者等动作;②威吓次数(Threats )：大鼠做出佯攻、前扑、威吓、尖叫等姿势，但
未接触到入侵者身体;③攀压次数(Mounting)：大鼠将入侵者打倒并压身下，使其不能激烈反抗;④胜利次数(Dom inance posture)：大鼠压在入侵者上面，入侵者长时间仰躺、呆滞。⑤失败次数(Sub m issive posture)：大鼠被入侵者打倒、压制。愤怒模型组大鼠行为得分=①+②+③+④-⑤。行为评定采用盲法，由3名观察者观看录像后评分，取其平均值。3者评定一致性很高(大于0.95)。
2.恐惧模型组大鼠愤怒行为学检测[2]：恐惧模型组大鼠在闪光照射后出现冻结姿势(freezing posture)：静止、呆滞、蜷缩、蹲伏等，期间仅有呼吸和轻微摇摆运动。其总时间称为冻结时间(freezing ti m e)，即恐惧模型组大鼠行为得分。行为评定采用盲法，由3名观察者观看录像后评分，取其平均值。3者评定一致性很高(大于0.95)。伦琴射线管
3.应激后旷场行为学检测(open2field test)[4]：将动物置于100c m×100cm×50c m、周壁为黑、底面分成面积相等的25方格的旷场里。摄像记录动物3m in的行为，以穿越底面的格子数为水平活动得分，以直立的次数为垂直活动得分，旷场实验得分为两者之和。行为评定采用盲法，由3名观察者观看录像后评分，取其平均值。3者评定一致性很高(大于0.95)。
四、统计学处理
实验结果用SPSS10.0统计软件分析，均用x±s 表示。利用Spear man相关分析方法分析大鼠两个行为变量之间的关系，采用单因素方差分析方法进行多样本均数比较。
结果
一、愤怒模型组大鼠行为学得分
实验开始5m in为双方适应期，愤怒模型组大鼠多次靠近入侵鼠，鼻嗅、试探对手。约第4～6m in后模型组大鼠发起攻击行为，间断进行，持续约15m in。模型组大鼠出现嘶咬、拳击、后顶、脚蹬入侵者等搏斗动作，或佯攻、前扑、威吓、尖叫等威吓姿势，多次打倒并攀压入侵者。入侵者呈现直立防御姿态和蛰伏、仰卧、呆滞等臣服姿势。
大鼠的行为得分为：总分(65.88±6.20)分，搏斗(33.13±2.80)分，威吓(22.38±2.07)分，攀压(7.13±2.17)分，胜利(3.25±1.04)分，失败(0)分。将各指标与总分做Spear man相关分析，搏斗次数(r= 0.915,P<0.01)、威吓次数(r=0.717,P<0.05)、攀压次数(r=0.726,P<0.05)与总分呈显著正相关关系，胜利得分与总分的相关性(r=0.363)未达统计学意义。
二、恐惧模型组大鼠行为学得分
实验开始5m in为适应期，恐惧模型组大鼠移动缓慢、贴壁，后蜷缩于角落处。接受闪光照射后表现为静止、呆滞、蜷缩、蹲伏等冻结姿势，期间仅有呼吸和轻微摇摆运动；伴有立毛、肌肉轻微振颤、大小便失禁。大鼠的行为得分为(1015.50±191.27)分。
三、各组大鼠旷场实验行为学得分
1.各组大鼠旷场实验得分比较结果：各组大鼠旷场实验水平得分、垂直得分、总分差异均有统计学意义(P<0.01)。愤怒模型组明显高于孤独对照组和正常对照组，恐惧模型组明显低于孤独对照组和正常对照组(P<0.01)。结果见表1。
表1各组大鼠旷场实验行为学得分比较(分,x±s)
组别鼠数水平得分垂直得分旷场实验得分
正常对照组630.00±3.07△#7.13±1.36△#37.13±2.42△#
愤怒模型组675.50±4.633#20.88±2.423#96.38±3.893#
恐惧模型组69.67±3.673△1.33±0.823△11.00±3.523△
孤独对照组650.25±5.183△#11.50±2.273△#61.75±4.503△#注：与正常对照组相比:3P<0.01；与愤怒模型组相比,△P<0.01，与恐惧模型组相比,#P<0.01
讨论
愤怒心理应激动物模型的制作及量化评定。本研究采用的愤怒动物模型参考了[1,5]等方法，即大鼠长期孤独饲养而具有攻击性，能够本能地对侵入者发起攻击，产生愤怒心理和行为。此模型躯体刺激已减少到极小，更接近人类愤怒情绪。鉴于大鼠种属之间的差异较大，其中W istar大鼠种系的垂体2肾上腺系统功能发达，对应激反应灵敏；且雄性鼠攻击性强，孤独饲养后易激惹，故我们选择成年雄性W istar大鼠进行实验，制造模型的成功率高(100%)。
如何评定动物情绪，目前尚未统一意见。动物模型的特殊性要求通过观察其行为模式，并做客观和数量化的记录，制定判断动物情绪水平的标准。本实验筛选确定5个研究因素，即搏斗次数、威吓次数、攀压次数、胜利次数、失败次数。各因素与总分呈中2高度正相关，提示各指标能很好地解释总分，有较好的内部一致性。搏斗次数和威吓次数占总分比重较大，能够客观反映动物愤怒情绪水平[6,7]。说明本实验的愤怒情绪评定方法具有良好的稳定性和信度，基本符合心理测量学的要求。
恐惧心理应激动物模型的制作及量化评定。实验中的恐惧模型根据Takashi[2]方法并改良，通过间断、低频、低压交流电电击大鼠足底，使动物反复受到刺激，结合同步闪光照射,3d后形成条件反射。第4
天仅给予闪光照射，大鼠即产生恐惧心理和行为，表现为长时间的静止或蜷卧等。冻结姿势能够客观、有效地反映动物的恐惧情绪水平，其总时间测定与文献报道基本一致[8]。此模型为国内外常用的恐惧情绪动物模型，有效排除躯体刺激干扰，且量化评定方法直观、可靠。
怒伤气与恐伤气行为学比较。中医七情理论系统阐述了情绪致病的机理：主要通过(下转53页)
人员的心理问题较为严重，应及时给予必要的心理疏导工作或建议及早就医。本次研究将与公路施工监理人员有关的19项心理社会因素作为不良情绪诱导因子进行科学分析，结果发现监理人员的情绪障碍与人际关系、工地距家距离、回家间隔、业余爱好、居住环境、饮食适口、气候适应、文体活动、休息时间、福利待遇等10项因素显著相关。
多元逐步回归分析发现，影响公路施工监理人员焦虑情绪的更直接因素为：居住环境、业余爱好、工地距家距离、人际关系、工作年限、休息时间6项因素。S AS标准分与居住环境、业余爱好、人际关系、休息时间4项因素呈显著负相关，与工地距家距离、工作年限2项因素呈显著正相关。说明对居住环境满意、有业余爱好、人际关系良好、休息时间充足的人员不易出现焦虑情绪，而随着工地距家距离及工作年限的增加，焦虑症状会加重。分析原因为由于工地工作环境相对较差，随着工作年限及年龄的增加，家庭负担逐渐加重，不适于继续从事此工作，以及对自己身体健康的担心，焦虑情绪或症状会随着工作年限的增加而加重。
传动装置
多元逐步回归分析发现，影响抑郁情绪的更直接因素为饮食适口、工地距家距离、人际关系、休息时间、家庭负担5项因素。S DS标准分与饮食适口、人际关系、休息时间3项因素呈显著负相关，与工地距家距离、家庭负担2项因素呈显著正相关。说明饮食适口、人际关系良好、休息时间充足的人员不易出现抑郁情绪，而距家较远、有家庭负担者容易出现抑郁情绪。
综合以上分析可以发现，人际关系和谐、能能动地适应环境、有业余爱好、休息时间充足的人员情绪状态较好，结合相关分析，结果提示：除了通过心理健康教育提高监理人员的人际交往能力，进而提高个体的心理健康水平、减少不必要的负性情绪外，通过改变外部心理社会环境，如单位多开展文体娱乐活动、合理增加休息时间、增加饮食适口性、在可能的范围内改善居住环境及适当提高福利待遇等，均可有效改善监理人员的心境和增加正性情感体验。
参考文献
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(收稿日期:2005-05-31)
筛板塔
(本文编辑：林立)
(上接11页)
扰乱人体的气机升降，导致五脏的气机失调而发病。《内经》中言:“百病先于气也，怒则气上，恐则气下”、“忧恐忿怒伤气，气伤脏，乃病证”等，即愤怒、恐惧等情绪，先伤人体的气机，由气机的紊乱进而使五脏受病。“有诸内者，必形诸外”，行为是脏腑气血的外在反映。愤怒、惊恐等情绪在内扰乱气机而致病，在外则表现为行为异常。愤怒主要表现为兴奋激动、情绪爆发、攻击行为(包括语言攻击、肢体攻击)；恐惧表现为退缩逃避、惊慌失措、交感神经兴奋(呼吸心跳加快、瞳孔扩大、颤抖)，甚至肢体软瘫、大小便失禁或精神抑制等[8]。
旷场实验能够有效评价动物对新异环境的兴奋性、适应性、探究、紧张、记忆等多种行为。水平得分即动物跨格数，反映动物的兴奋性；垂直得分即动物站立次数，主要反映动物对周围环境的不确定性和探究趋势。愤怒模型组大鼠的水平得分和垂直得分均高于孤独对照组和正常对照组，表明排除孤独饲养因素，愤怒应激后大鼠兴奋性、敏感性增强，探究活动增多。恐惧模型组明显低于孤独对照组和
正常对照组，说明排除孤独饲养因素，恐惧应激能够使大鼠的兴奋性、敏感性明显减弱。旷场实验水平得分与垂直得分呈显著正相关，说明反映动物相同功能的两指标对应良好，实验的可靠性强。
本实验设计的“怒、恐伤气”动物模型尽可能排除躯体刺激的干扰，为相对“纯粹”的情绪模型；同时对动物的行为进行量化评分，更为客观准确。经旷场实验分析，愤怒使大鼠兴奋性、敏感性增强，恐惧则减弱大鼠兴奋性及适应能力，这种表现与人的情绪反应有一定程度的相似性，说明此模型能够有效模拟人类愤怒及恐惧情绪，是较为理想的中医情志内伤模型。
参考文献
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(收稿日期:2005-05-08)
(本文编辑：冯学泉)
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