MALDI-TOF MS操作规程

插卡式摄像头MALDI-TOF MS操作规程
(一)样品测试步骤
1需做样的同学,在早9:00之前,标记好自己的样品(样品标记:以袁江北为例,命名为YJB1,YJB2,以此类推),放入质谱的样品架上;
2操作质谱者在样品登记格中登记样品;
3根据登记格中的位置在靶板上点样;
415 min后,待样品干燥后,在仪器Standby的状态下,单击Exp.Tech中的Open door,约为1 min,样品室门打开;
5戴上PE手套或洗干净手,将靶板正确放入样品室;
6单击Exp.Tech中的Close door按钮关闭靶板门;
7等待真空度下降,一般约为15 min,一般为pum2小于5.0×10-5即可进行样品分析
热冲击
8单击Exp.Tech中的Operate,待飞行时间管出现红线即可;
9开始样品分析,按照操作规程进行分子量校正(每次泄真空后均需进行分子量校正)
分子量校正步骤:
(a) 设置质谱分析的参数设置,主要有:Firing中的power(一般50左右);Blank参数应大于待分析样品的最小质量数(至少大于300Da,一般越大越好谱图越干净);样品采集的质量数设置(pulsed ectraction optimised at),一般为样品中最大分子量的2/3;Exp.Tech中Turning mode:一般为Reflectron(分子量低于6000Da适用);
(b) 打开Camera窗口;
(c) 右键点击靶板的放大镜,输入校正点的位置(如A10,不分大小写),回车键;按照靶板上的位置,开始分析样品(点击Fire,Power由低(50)到高开始分析,一般不要高于110,避免损坏激光源);
(d) 新建文件夹(每次做样均需新建文件夹,文件夹命名为20130320,按日期命名,一个月保存在一个文件夹目录下),保存样品,命名为Cal0001;
(e) 点击Processing中的Calibration      List references校正文件,单击打开;点击Calibration开始校正;校正完毕后,点击save,关闭校正窗口;
10校正完毕,按照样品登记表中登记的样品信息,仔细进行样品分析。样品分析、保存和校正数据一样(以袁江北为例,命名为YJB10001,YJB10002,YJB20001,以此类推);立式烤箱
11做完样,单击Standby,在Standby的状态下,单击Open door,取出靶板,放在培养皿中;单击Close door;
12关闭软件、电脑。
注意事项:
每次使用完质普后,请及时把头盒里的头补满;
使用完点样,将移液的量程调到最大,悬挂在架上;
在MALDI-TOF MS记录本中登记做样的数目和仪器的使用状态。
一.靶板的清洗
1.带上手套,将样品靶放入Lock_Lock盒中,倒入谱纯级乙腈,溶剂浸没靶板,超声5-10分钟。
2.将溶剂换成谱纯甲醇,浸没靶板,超声5-10分钟。
3.将溶剂换成50%甲醇+50%millipore纯水,超声5分钟。体香糖
4.将溶剂换成100%millipore纯水,超声5分钟。
5.将靶板取出,自然晾干即可。
注:如样品靶板特别脏,在第一步前用丙酮超声10分钟
二.基质的选择
      本实验室有以下三种基质选择
智能开关方案 1.CHCA基质:5-10mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 多肽及小分子样品
2.DHB 基质:10-20mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 糖类及小分子样品
3.SA 基质:10-15mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 大于一万的蛋白及大分子样品
4.Dithranol基质:10-15mg/ml (100%THF,0.1%TFA) 聚合物样品
三.点样方式
1.混匀法: 样品及基质1:1的比例在Ep管内混合均匀,取1ul点靶,自然晾干。
2.覆盖法:移液取0.5ul样品,点靶,自然晾干。取0.5ul基质,覆盖到样品上,自然晾干。
3.三明治法:移液取0.5ul基质,点靶,等5-10s将基质吸走,形成基质的薄膜。取0.5ul样品,点靶,自然晾干。再取0.5ul基质点靶覆盖,自然晾干。
一般选用覆盖法点样。
样品分析
100
shots:2
备注:仪器处于standby状态
五、特别注意事项:
1.Acquisition界面第二个选项Exp.Tech.右下角的Vent按钮禁止点击。(该按钮为泄真空功能键,仪器会失去高真空状态,对仪器内的电磁元件会有损害。)
2.仪器使用完毕,关掉Camera窗口,点击Standby使仪器处于待机状态。
3.仪器后面左下方为硅胶干燥瓶,正常时呈蓝。如果变成紫红或红,请及时更换里面的硅胶。
4.仪器后面右下方是仪器的电源按钮,仪器长时间不用(如春节假期),请先关闭操作软件,再关电源。再次开机,需要先开电源,等待一小时以上,再打开操作软件,在Exp.Tech.界面点击左下角的Pump按钮,点击Pump SAC。仪器重新抽真空,请等待24小时后再使用仪器。
5.使用完质普后,请及时把头盒里的头补满。
三.靶板的清洗
1.带上手套,将样品靶放入Lock_Lock盒中,倒入谱纯级乙腈,溶剂浸没靶板,超声5-10分钟。
2.将溶剂换成谱纯甲醇,浸没靶板,超声5-10分钟。
3.将溶剂换成50%甲醇+50%millipore纯水,超声5分钟。
4.将溶剂换成100%millipore纯水,超声5分钟。
5.将靶板取出,自然晾干即可。两辊矫直机
注:如样品靶板特别脏,在第一步前用丙酮超声10分钟
四.基质的选择
      本实验室有以下三种基质选择
1.CHCA基质:5-10mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 多肽及小分子样品
2.DHB 基质:10-20mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 糖类及小分子样品
3.SA 基质:10-15mg/ml (50%ACN,50%H2O,0.1%TFA) 大于一万的蛋白及大分子样品
4.Dithranol基质:10-15mg/ml (100%THF,0.1%TFA) 聚合物样品
三.点样方式
1.混匀法: 样品及基质1:1的比例在Ep管内混合均匀,取1ul点靶,自然晾干。

本文发布于:2024-09-24 19:14:47,感谢您对本站的认可!

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