非标夹具免疫组织化学（IHC）染
1) 石蜡块以 4 μm 厚度切片，在预热的水浴缸平展后粘附于载玻片上，载玻片 垂直放置风干过夜； 全叶青兰2) 脱蜡：75°C 烤箱中烤片 15 分钟，二甲苯三遍，各 5 分钟；
3) 水合：无水乙醇三遍、95%乙醇、80%乙醇各 5 分钟双蒸水两遍，每次 5 分 钟；
4) 抗原修复：载玻片置于隔沸水加热的抗原修复液柠檬酸钠（ER 和 PR 以外 其他抗体）或者 EDTA（ER 和 PR）中加热 15 分钟，置于试验台上冷却 10 分 钟，双蒸水轻柔冲洗；
5) 封闭内源性过氧化物酶：9 份 100%甲醇+1 份 30%双氧水混匀，将切片浸入 其中室温放置 15 分钟； 6) 细胞透膜：0.3% PBST 处理 5 分钟，0.025% PBST 处理 5 分钟；
空调连接管
7) 湿盒中加少许水，水平面低于玻片。用疏水屏障笔在样品周围画一个完整的圈，边缘与样品之间留少许空隙，画好后置于湿盒中；
药盒
8) 二抗来源相同的物种血清用 0.025% PBST 稀释至 10%，混匀后滴加在样品上，室温孵育 30 分钟；
9) 半小时后去除血清，加上用 0.025% PBST/5%血清的稀释液稀释好的一抗4°C 过夜；抗体稀释比例见表 1.1；
10) 去除一抗，0.025% PBST 洗两次，每次 5 分钟；
11) 加入用 0.025% PBST 稀释好的抗一抗来源的生物素标记二抗室温孵育 1 小 时；
12) 去除二抗，0.025% PBST 洗两次，每次 5 分钟；
13) 加入 Sav-HRP，室温孵育 30 分钟；
卤素管14) 去掉 Sav-HRP，0.025% PBST 洗两次，每次 5 分钟；
15) 预先配好 DAB 染液，试剂盒中的 DAB 缓冲液 1 ml 加 1 滴显原混匀， 滴加在样品上，室温避光孵育 10-15 分钟。显微镜或肉眼可见棕后双蒸水冲 洗；
16) 苏木精复染，室温染两分钟，然后用自来水温和的冲洗掉染液，再加 上 PBS 在室温放置 30 秒；
ipanel17) 脱水：双蒸水浸泡两次，每次 5 分钟；80%乙醇浸泡 1 次 5 分钟，95%乙醇
浸泡 1 次 5 分钟，100%乙醇浸泡 3 次，每次 5 分钟，最后在二甲苯中浸泡 3
次，每次 5 分钟；
18) 封片：Poly Mount 封片，晾干，镜下观察。
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