裴林1 ，李勇1 ，王德广1 ，张光毅1 ，崔肇春2 ，朱正美2
(1. 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心，江苏徐州221002 ;2. 大连医科大学生物化学教研室，辽宁大连116027)
摘要：目的制备抗磷酸酪氨酸多克隆抗体，利用此抗体研究缺血再灌注对海马磷酸酪氨酸蛋白(p - tyr - pr) 免疫反应性的影响。方法以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白(BS A) 作为免疫原免疫兔获得抗血清。将磷酸酪氨酸偶联到溴化氰活化的sep harose 4B 上。抗血清经磷酸酪氨酸- sep harose 4B 亲和柱纯化，所得抗体专一性强，并经d ot b lot 鉴定。结果抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白、溶菌酶、卵清蛋白起抗原抗体反应，而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶、卵清蛋白；不识别作为免疫原的骨架成分BS A ，也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白; 缺血/ 再灌注6 h 海马各区p - ty - pr 免疫反应性明显增强，或硝苯吡啶对此有拮抗作用。结论亲和纯化后的抗体是高度特异性的。缺血/ 再灌注后p - tyr - pr 免疫反应性增强与N - 甲基- D - 天冬氨酸(NMDA) 受体以及电压门控的钙离子通道有关。 关键词：磷酸酪氨酸蛋白；抗体；亲和层析；免疫化学
中图分类号:Q511 ; R392. 11 ; R364. 1 + 2 文献标识码:A 文章编号:1000 - 2065 (2000) 02 - 0087 - 05 P re p aration , puri f ication and a ppl i cation of O2phosph otyrosine protein sp eci f ic antibody
PEI Lin ,L I Y ong ,WANG De - gu ang ,et al
多媒体集中控制器( R esearch Center of Biochemistry and M olecu lar Biolog y , Xu zhou Medical C olleg e , Xu zhou , Jiangsu 221002 ,C hina)
Abstract :O bjectiv e T o prepare the O - phos p h otyrosine protein specific an tib od y and b y using it to stud y the effects of ischemia/ reperfusion on the immunoreactivity o f phosph oty rosine protein(p - tyr - pr) in g erb il hippocam p us. M ethods R ab2
b its w ere immunized w ith b ovine ser u m albu min (BS A) w hich w as cou pled to p hos phorylated tyrosine to pr odu ce the antiseru m.
The an tib od ies w ere first salted from the seru m an d the antib od ies w ere p urified further b y affinity chromatog rap hy using a self - prepared O - phosphotyrosine - sep harose 4B colu mn. The specificity of the p urified polyclonal antib od ies w as assessed b y d ot
b lot and found to b e very hig h. R esults Th ey specifically reacted only w ith ty rosine - phosphor
ylated proteins , includ ing m o d i2
fied BS A , lysozyme and ovalbu min , they d id not react w ith n orm al forms of lysozyme , ov albu min having no phosphorylated tyro2 sine residu es , nor d id they recog nize BS A(the major skeleton of orig inal antig en) . They d id not react w ith m od ified ovalbu min w ith serine or threonine residu es p hos p h orylated either. At 6 h o f reperfusion , a marked increase in p - tyr - pr immunoreactivity was seen in the hippocam p us compared w ith the contr ol . The increase in p - tyr - pr immunoreactivity indu ced b y brain ischem2i a/ reperfusion w as partially antag onized b y ketamine and nifed ipine ad ministered prior to cerebral ischemia . Concl usio ns Th e affinity - p urified polyclonal rabb it anti - p - tyr - pr an tib od y is hig hly specific for p - tyr - pr. The p - ty r - pr immunoreactiv2 ity increase in the hippocamp us indu ced b y brain ischemia/ reperfusion is related to N - m ethyl - D - aspartate receptor channel and L - type v oltag e g ated calciu m channel .
K ey w ords :O - p hos photyrosine pr otein ;antib od y ;affinity chr omatog rap hy ;immunochemistry
蛋白质可逆磷酸化是调节细胞生理功能的主要机制之一，诸如代谢、肌肉收缩、膜的运输、分泌、基因的转录和翻译、细胞分裂、受精乃至记忆等生理过程，都受这种翻译后的修饰调节1 。因此, 自从60 年代早期发现蛋白激酶A ( PK A) 以来, 细胞蛋白质磷酸化和脱磷酸化一直是一个引人瞩目的研究课
题。80 年代以来，由于蛋白质中酪氨酸残基的磷酸化在调控细胞生长、分化和癌变中的重要作用，使之成为人们一直研究的焦点问题之一。中枢神经系统含有大量的酪氨酸蛋白激酶和蛋白磷酸酶2 ,3 , 而要研究组织细胞中生理状况下的酪氨酸磷酸化情况，无论是采用免疫印渍和免疫沉淀方法，还是采用酶联免疫吸附法( E L IS A) ，都需要大量高度特异性的抗磷酸酪氨酸抗体，为此，获得高度专一性的抗磷酸
Ξ基金项目：国家自然科学基金资助课题(39770177)作者简介：裴林(1965 - ) ，男，江苏徐州人，副教授,。
酪氨酸抗体就显得尤为重要。
1 材料和方法Na2C O3 ,p H 9. 6) 中，每孔100μl ,4 ℃过夜，倾去抗原包被液，加满封闭缓冲液(
2 %O A 、0. 4 %明胶、10 m m ol/ L P BST ,p H 7. 4) ,37 ℃保温2 h 。倾去封闭液，用P BST 洗
3 次，每次2 m in , 随后加入以封闭缓冲液稀释的抗血清，每孔100μl ,37 ℃保温1. 5 h 。倾去抗血清，同上洗
1 . 1 动物和主要试剂成年健康蒙古沙土鼠，体重60～80 g , 由徐州医学院实验动物中心提供。卵清
蛋白(OA) 、牛血清白蛋白(BS A) 、磷酸酪氨酸(p - tyr) 均为Sigm a 公司产品。溴化氰活化sepharose 4B ( Pharm acia ) 、Triton X - 100 为R ohm - Maas 公司产品，其余试剂均为国产分析纯。
1 .
2 抗原磷蛋白的合成4 、分析鉴定溶解20 m g BS A 或OA 于0 . 5 ml 磷酸缓冲液(p H7 . 4) 中。溶解5 m g 磷酸酪氨酸于1 . 5 m l 水中, 用NaOH 调节p H 至中性，将此溶液加到BS A 溶液中去，持续搅拌，在20 min 内逐滴加入20 mm ol/ L 戊二醛1 ml ，室温搅拌30 min 后, 加入1/ 10 体积的1 m ol/ L 甘氨酸( 0.
3 m l) ，再搅拌30 min 后，对磷酸盐缓冲液( PBS) 透析,
4 ℃，每12 h 换液1 次，共4 次后，分装冻存于- 30℃待用。透析后的交联反应产物测定蛋白含量，以BS A 为标准品，计算交联率p - tyr - BS A (OA) / p - tyr 总量×100 % 。产物再经常规醋酸纤维薄膜蛋白电泳，分析产物纯度。
旋转倒立摆1 . 3 家兔免疫新西兰大白兔
2 只，同时按下述程序进行免疫。以0 . 5 m g/ kg p - tyr - BS A ，与等体积的完全福氏佐剂( F reund com plete adjuvant ,FC A) 充分混匀后，行背部多点、四肢足垫皮下注射。第28 天，第1 次加强免疫，
抗原量不变。间歇2 周后，第2 次加强免疫，免疫原用量减半，约200 μg p - tyr - BS A 与不完全福氏佐剂( F reund incom plete adjuvant , FI A , Sigm a) 混匀后注射，间歇
3 周。
1 . 4 抗血清制备免疫之前以及每次加强免疫后7～10 d ，从兔耳缘静脉或心脏取少量血( 4～6 ml )，置玻璃试管中(灭菌) ，离心，收集血清，检测抗血清效价，决定是否继续免疫。免疫结束后，经颈动脉采血。收集好的血液室温放置1～
2 h 后，于4 ℃冰箱过夜，血清可充分析出。析出的血清可直接用滴管吸取，也可离心分离( 1 500 r/ min ,10 min) 。血清分装前，需加叠氮钠防腐( 含2/ 10 000 叠氮钠) 。4 ℃保存的血清，其效价在半年内基本不改变。取血容器必须干燥，取血过程切忌摇动容器，否则会产生溶血，影响血清质量。
1. 5 抗血清效价测定采用E LIS A法测定抗血清效价。以不同浓度的p - tyr - O A 抗原溶液包被96 孔酶标板，浓度梯度为0. 03 、0. 06 、0. 125 、0. 25 、0. 5 、1. 0 、
2. 0 、4. 0 μg/ m l , 稀释于包被缓冲液(50 m m ol/ L NaHC O3/涤，加入以封闭缓冲液稀释的羊抗兔I gG - HR P (1∶1 000) , 每孔100μl , 37 ℃保温1 h 。倾去以封闭缓冲液稀释的羊抗兔I gG - HR P (1∶1 000) ，加入显反应液:0. 4 g/ L 邻苯二胺,0. 015 %H2O2 ，柠檬酸缓冲液(0. 1 m ol/ L Na2 HPO4 ,0.
017 m ol/ L 柠檬酸,p H 5. 0) 每孔100 μl ，于暗处反应15 m in ，加入2 m ol/ L H2S O4 50μl 终止反应，于490 nm 处检测A 值。
1 . 6 抗体的分离、纯化和鉴定参考文献4 进行。
1 . 6 . 1 亲和柱制备称1 g 溴化氰活化的sepharose 4B 以约200 ml 1 mm ol/ L HCl 洗胶使之膨胀，用偶联缓冲液( 0.1 m ol/ L NaHC O3 、500 mm ol/ L NaCl , p H 8 . 3) 将胶略加清洗; 将20 m g 磷酸酪氨酸溶于5 m l 偶联缓冲液中，调节p H值至813 后，与胶混合,4 ℃轻摇过夜，用偶联缓冲液洗去多余的磷酸酪氨酸，转移胶至封闭缓冲液(1 m ol/ L 乙醇胺,p H8 . 0) 中,4 ℃轻摇过夜。先用0 . 1 m ol/ L 乙酸缓冲液(p H 4 . 0 ) ，再用0 . 1 m ol/ L Tris - HCl 缓冲液(p H8 . 0) , 反复3次循环洗涤后,P BS 平衡，待用。
1 . 6 .
2 抗体纯化抗血清按40 % 饱和度(NH4) 2 SO4盐析沉淀226 g (NH4) S O4/ L 血清,0 ℃，以下操作均在4 ℃进行。离心,12 000 ×g 20 min ，沉淀用最小体积的P BS 溶解后，对PBS (1 000 ml) 透析过夜，将透析后的抗体与平衡好的p - tyr - sepharose 4 B 胶混合装入一密封离心塑料管中，轻摇过夜，装柱,P BS 洗脱非特异性抗体，直到A280 低于0 . 05 。柱上亲和吸附抗p - tyr 抗体用洗脱液A (40 mm ol/ L 苯基磷酸钠P BS , p H 7 . 4) 洗脱, 收集纯化抗体并对PBS 透析，浓缩( 50 %甘油PBS ,p H 7 .
4) ，测定抗体含量，分装，冻存于- 30 ℃冰箱。
1 . 6 . 3 抗体特异性鉴定参考文献5 进行。采用dot bl ot 法鉴定抗体特异性。取待鉴定的所有抗原, 用P BS 稀释成10 m g/ L 。取
2 张NC 膜( 10 cm ×10 cm) ，按1 cm ×0 . 85 cm 划格, P BS 浸过，每格点样1 μl ,0 . 25 m ol/ L 戊二醛固定37 ℃,45 min , P BST 洗膜
3 次×5 min ，加入1 %明胶封闭37 ℃,1 . 5 h ，同上洗膜。一张膜加入纯化的多抗( PBST 稀释, 1∶500) , 对照膜加入正常兔血清(1∶500 , PBST) ,37 ℃,1 . 5 h 。洗膜同上。2 张膜皆加入羊抗兔IgG - HRP (1∶500) , 37 ℃,1 h ，洗膜同上。显(20 ml PBS + 10 m g DAB
+ 20μl H2O2) ，流水终止反应。分析，拍照。
1 . 7 沙土鼠脑缺血与再灌注模型动物随机分为
正常组(假手术组) ，缺血/ 再灌注组及给药组。缺血
/ 再灌注组腹腔注射水合氯醛( 300 ～350 m g/ kg) 麻
醉后，其余操作按我室的方法6 。正常组麻醉及手
术操作同上, 但不造成缺血; 实验组缺血前20 m i n
腹腔注射80～100μl 药物，正常组及缺血组给予相
同体积的溶剂。缺血前控制动物体温在37 ～37 . 5
℃，缺血15 min 后，按实验要求再灌注6 h 。
1 . 8 免疫组织化学磷酸酪氨酸免疫组织化学反
应步骤参照V ector 药盒说明书进行。
1 . 9 蛋白质浓度测定按L owry 法，以牛血清白蛋
白为标准品。
2 结果
2 . 2 抗体效价为排除非特异性结合的干扰，效价
测定所使用的抗原为p - tyr - OA ，以OA 代替BS A ,
除去抗血清中可能存在的载体蛋白BS A 的抗体，每
次加强免疫后均取少量血测效价, 当效价达到1 ∶
2 000以上时，即可以结束免疫。实际免疫结束时兔
的抗血清效价达到1∶4 000 (图2) 。
2 . 1 抗原磷蛋白的合成p - tyr 与BS A 交联反应
betal混合物透析后总体积为3 . 3 m l , 测定蛋白含量为
6 . 76 g/ L ，计算交联率:
p - tyr - BS A/ p - tyr ×100 % = ( 6 . 76 m g/ ml ×
3 . 3 ml - 20 mg) / 5 m g ×100 % = 46 . 2 %
p - tyr 与OA 交联反应混合物透析后总体积为
3 . 9 ml ，测定蛋白含量为5 . 68 m g/ m l 。交联率:
图2 兔抗血清E L I S A 效价曲线
A. 免疫前血清(1∶1 000)
B. 兔抗血清(1∶2 000)
C. 兔抗血清(1∶4 000)
2 .
3 抗体的纯化、分离用经硫酸铵盐析沉淀并透
析后的溶液上p - tyr - sepharose 4B 亲和柱, 用P BS
(p H 7 . 4) 洗柱及苯基磷酸钠洗脱p - tyr 抗体的情况
见图3 。由图3 可见，经亲和层析后，可除去硫酸铵
沉淀中的大部分杂蛋白，加入苯基磷酸钠后，可见一
流出峰，这一部分经电泳证实含有p - tyr 抗体。结
果说明，抗血清经硫酸铵盐析和亲和层析后，除去了
少许杂蛋白和所有非特异性抗体。
p - tyr - OA/ p - tyr ×100 % = ( 5 . 68 m g/ m l
3 . 9 ml - 19 . 98 m g) / 5 . 06 m g ×100 % = 43 . 5 %
对上述2 种磷蛋白p - tyr - BS A 和p - tyr - O A
进行了电泳鉴定。图1A 表示p - tyr - BS A 和BS A ,
水性附着力促进剂
图1B 表示p - tyr - OA 和OA 在p H 8 . 5 缓冲
液中进行醋酸纤维素薄膜电泳的结果。由于p - tyr
- BS A 较BS A 、p - tyr - OA较OA 增加了磷酸基，在
p H 8 . 5 缓冲液中所带负电荷较BS A 与OA 分别略有
增加，故其电泳迁移率分别略有增加。
×
图3 磷酸酪氨酸抗体的亲和层析(p - tyr - sep harose 4B)
洗脱曲线
洗脱速度1 ml/ min ,2. 5 ml/ 管
2 . 4 抗体特异性图4A 和图4B 显示，抗体仅对包
括酪氨酸磷酸化的牛血清白蛋白、溶菌酶和卵清蛋
白起抗原抗体反应，而不识别无酪氨酸磷酸化的溶
菌酶、卵清蛋白。未经酪氨酸磷酸化的BS A ，虽然是图1 牛血清白蛋白、磷酸酪氨酸血清白蛋白(图1A) 和卵清
蛋白、磷酸酪氨酸卵清蛋白(图1B) 的醋酸纤维膜电泳
a .牛血清白蛋白
c .卵清蛋白
b. 磷酸酪氨酸血清白蛋白
d. 磷酸酪氨酸卵清蛋白
免疫原的骨架成分 ，也不被亲和纯化的特异性抗体 所识别 (图 4A ) ，但却可以同未经亲和层析纯化的抗 体起抗原抗体反应 ，这表明经亲和层析纯化的抗体 是一种专一性识别蛋白质磷酸酪氨酸的抗体 。经亲 和层析纯化的抗体也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋 白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白 (图 4C ) 。
2 . 5 抗磷酸酪氨酸的组织化学反应 如图 5 所示 ,
假手术对照组的 p - tyr 海马各区染较浅 ，缺血/ 再 灌注 6 h 后 , 染 明 显 加 深 ; 预 先 腹 腔 注 射 氯 胺 酮 (25 m g/ kg ) 或硝苯吡啶 (15 m g/ kg ) 后 ，再灌注 6 h 后
的染相对于缺血/ 再灌注组有明显的降低 ，但还深
于假手术对照组 ，结果表明 ，缺血/ 再灌注 p - tyr - pr 免疫组化染加深 ，或硝苯吡啶对此有拮抗 作用 。
3 讨 论
目前 ，研究组织细胞中生理状况下的磷酸化情况 最常用的是放射性同位素掺入放射自显影法 ，即先将 完整细胞或组织用32 P 标记 ，然后利用磷酸丝氨酸和 磷酸苏氨酸对碱不稳定 、易于分解而磷酸酪氨酸不易 被碱水解这一特性 ，将凝胶用 1 m ol/ L K OH 55 ℃处理
2 h ，放射自显影来检测 。整个方法复杂而冗长 ，并存
在许多问题 : ①需要大量的放射性同位素32 P ; ②磷酸 化 、去磷酸化的速率易受多种因素包括孵育时间等的 影响 ; ③在分析过程中32 P 标记的磷酸氨基酸由于强
酸强碱作用而部分水解使磷酸氨基酸测定值偏低或
图 4 d ot b lot 法测定抗体的特异性
A. 亲和层 析 纯 化 的 抗 体 与 磷 酸 酪 氨 酸 牛 血 清 白 蛋 白 (栏 1 ，上) ，牛血清白蛋白 (栏 1 ，下) ，磷酸酪氨酸卵清儿童跷跷板
蛋白 (栏 2 ，上) ，卵清蛋白 (栏 2 ，下) ，磷酸酪氨酸溶菌 酶 (栏 3 ，上) ，溶菌酶 (栏 3 ，下)
B. 纯化的抗体 (未经亲和层析) 与磷酸酪氨酸牛血清白 蛋白 (栏 1 ，上) ，牛血清白蛋白 (栏 1 ，下) ，磷酸酪氨酸 卵清蛋白 (栏 2 ，上) ，卵清蛋白 (栏 2 ，下) ，磷酸酪氨酸 溶菌酶 (栏 3 ，上) ，溶菌酶 (栏 3 ，下)
C. 亲和层析纯化的抗体与磷酸酪氨酸卵清蛋白 ( 栏 1 ,
上) ，磷酸丝氨酸卵清蛋白 ( 栏 1 ，下) , 磷酸苏氨酸卵 清蛋白 (栏 2 ，上) ，卵清蛋白 (栏 2 ，下)
32 易变 ; ④ P 半衰期短 (约 14 d ) ，不能对样品作多次分
析 。针对上述缺点 ，现在已多采用免疫印渍和免疫沉 淀结合的方法分析细胞中的蛋白质磷酸化水平 ，但这 需要大量的特异性较强的抗体 。
图 5 A. 假手术对照组 B. 缺血/ 再灌注 6 h 组
沙土鼠海马磷酸酪氨酸的免疫反应性
C. 缺血/ 再灌注 6 h 组 + 25 mg / kg (i . p . )
D. 缺血/ 再灌注 6 h 组 + 15 mg / kg (i . p . ) 硝苯吡啶
为此, 参考J e an 等4 的方法, 制备纯化了的抗磷酸酪氨酸抗体，相应建立了免疫组织化学的方法，用于缺血/ 再灌注条件下磷酸酪氨酸组织化学染的变化。亲和柱所接基团为O - phosphotyrosine ，这使通过O - phosphotyrosine - sepharose 4B 亲和层析柱后的抗体对含有O - phosphotyrosine 的蛋白质有专一识别的能力。另外一类磷蛋白是Thr 和Ser 残基磷酸化的磷蛋白，其T hr 或Ser 残基与T yr 残基在结构上差异很大，没有苯环结构，因而不被此抗体识别。BS A 作为免疫原p - tyr - BS A 的骨架结构, 能同从抗血清中初步分离的( 硫酸铵盐析后) IgG 起抗原抗体反应，此IgG 不作进一步纯化而用于分析组织中磷酸酪氨酸蛋白含量是不够准确的，因为BS A 或其结构类似物均有可能被误认为磷酸酪氨酸蛋白。有些文献在报道磷酸酪氨酸磷蛋白含量时所用抗体未经类似的亲和层析7 ，结果不可靠，因此，将抗体进一步亲和纯化，经dot bl ot 证实，这一抗体是高度特异的。据报道, 脑缺血时最易受损的部位是海马、纹状立相应的E L I S A 法以及免疫沉淀和免疫印渍方法深入探讨的问题。
参考文献:
通用积分1 Shenolikar S. Pr otein serine/ thre onine phosphatase —N e w avenues f or
cell regulationJ . A nn Rev Cell Biol , 1994 ,10 (5) : 55 .
Wang Y T , Y u X M ,Salter MW. Regulation of NMD A rece ptors by pr o2 2
tein -
233 .
Wang
tyr osine kinases and phosphatasesJ . N ature , 1994 , 369 (5) :
Y T , Y u X M , Salter M W. Ca2 + 2inde pendent reduction of 3
N MD A rece ptor - mediated currents by pr otein tyr osine phosphoryla2
tionJ . Pr oc Natl A cad Sci U SA ,1996 , 93 (2) : 1721 .
Jean Y , Wang J . G eneration and use of anti - phosphotyr osine antibodies raised against bacterially expressed abl pr otein J . Methods
in Enz ym ology ,1991 , 201 :53 .
范培昌. 生物大分子印渍技术和应用M. 上海：上海科学技术文献出版社,1989 . 1911 .
Liu J ,Zhang GY. Studies on the dif ference in sensitivity to cerebral is2 chemia and re perf usion betw een cytosolic and particulate Ca2 + / Ca M PK ⅡactivitiesJ . Chin J A ppl Physiol , 1995 ,11 (4) :322 .
K a plan DR , Whitman M , Schaf fhausen B , et al . C omm on e lements in gr owth f actor stimulation and onc ogenic transf ormation : 85kD phospho2 pr otein and phosphatidylinositol kinase activityJ . Cell ,1987 ,50 (7) :
1021 .
Pulsinelli WA. Selective neur onal vulnerability m or phological and m olecular characteristicsJ . Pr og Brain Res , 1985 ,63 (2) :29 .
收稿日期:1999 - 07 - 30 修回日期:1999 - 09 - 25
本文编辑：程春开4
5
6
7
体8。本组结果显示, 缺血再灌注引起p - tyr - pr
免疫反应性增强不仅与N - 甲基- D - 天冬氨酸
(NMDA) 受体通道有关, 而且与电压门控的钙离子
通道有关。但究竟是哪一些p - tyr - pr 发生了变
化，这些变化对神经元细胞损伤又有什么影响，都是
我们将要进一步采用自制的抗磷酸酪氨酸抗体，建
8
银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性Ξ
古涛1 ，王绪1 ，刘永2 ，王秀英3 ，薛涛4 ，张蓓1 ，王伟2
(1. 徐州医学院肿瘤防治研究所，江苏徐州221002 ;2. 徐州医学院生物化学与分子生物学中心;
3. 徐州医学院附属医院中心实验室;
4. 徐州医学院附属医院胸心外科)
摘要：目的评价端粒酶能否作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物。方法采用改良的银染端粒重复序列扩增法( T R AP) 检测34 例人肺癌手术标本(包括癌组织、相应癌旁组织与正常组织标本各34 份,28 个相应淋巴结) 的端粒酶活性。另有肺囊肿、肺炎性假瘤各3 例作为对照。结果88. 3 % (30/ 34) 的肺癌癌组织端粒酶阳性，正常组织全部阴性。结论端粒酶可以作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物，改良的银染TR AP 法成本低、污染少，有可能在临床上应用。
关键词：肺癌；端粒酶；肿瘤标记物
中图分类号:Q756 ; R734. 2 文献标识码:A 文章编号:1000 - 2065 (2000) 02 - 0091 - 04
Detection of telom era se activity in hum an lung cancer by silver sta ining telom eric
re peat a mplif icat ion prot ocol
G U Tao , WANG Xu , L I U Y ong , et al
Ξ基金项目：江苏省教委重点资助课题(J W970045)
:(1974 - ) ,,,
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