一、名词解释（每题3分，共15分）
1、植物组织培养：是指在无菌条件下，将植物的离体器官、组织、细胞以及原生质体，应用人工培养基，创造适宜的培养条件，使其长成完整小植株的过程。 2、驯化：试管苗移植前可将培养瓶移到自然光照下锻炼3～10d，让试管苗接受自然光的照射，感受自然温度的昼夜温差现象，使其壮实，然后再开瓶移植，经过较低温、湿度的处理，以适应自然温、湿度条件。
3、接种：在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。
4、细胞悬浮培养： 是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 5、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
二、填空题（每空1分，共20分）
1、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段 、 奠基阶段 和 快速发展和应用阶段 。
2、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的 凝固剂和支持物 ，一般用量为 6-10g／L 之间。
3、常用的化学灭菌剂有 酒精 、 自动融雪设备、 次氯酸钠 等。
4、愈伤组织的形态发生方式主要有 不定芽方式 、和 胚状体 方式。
手提式割草机5、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养 和 普通茎尖培养 两种类型。前者主要是对 茎尖长度不超过0.1mm，最小只有几十微米的 茎尖进行培养，目的是 获得无病毒植株；后者是对 几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的 培养，目的是加快繁殖速度 。
6、分子生物学鉴定脱毒苗的主要方法：①双链RNA法(dsRNA)和 ②互补DNA(cDNA)检测法。
7、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。
8、原生质体的纯化方法有：离心沉淀法、漂浮法和界面法。
三、选择题（每题1分，共10分）
1、植物组织培养实验室不包括（ D ）。
A、准备室 B、无菌操作室 C、培养室 D、显微实验室
2、离体叶培养中，消毒后的叶片应整理切割成（ C ）大小。
A、3×3mm B、4×4mm C、5×5mm D、6×6mm
3、（ D ）是植物离体培养常用的主要糖类。
A、 葡萄糖 B、果糖 C、麦芽糖 D对照物、蔗糖
4、在组培过程中，受到细菌侵染后，在培养基的表面出现（ D ）。
A、粉状、毛状菌斑 B、粉状、脓状菌斑 C、油状、毛状菌斑 D、油状、脓状菌斑
5 led灯控制器、超低温种质保存的温度为（ C ）；
A、0～15℃； B、-80～0℃； C、-196℃； D、-280℃
6 、无菌操作接种时，在操作前和操作期间要经常用（ A ）擦拭双手和台面。
A 、 70% 酒精 B 、 85% 酒精 C 、 95% 酒精 D 、 0.1%
7 、无机盐的浓度高，尤其硝酸盐的用量大，还含有一定数量铵盐的培养基是（ C ）。
A 、 White 培养基 B 、 N 6 培养基 C 、 MS 培养基 D 、 B 5 培养基
8、培养室温度一般要求常年保持在（ A ）左右。
A 、 25 ℃ B 、 22 ℃ C 、 28 ℃ D 、 24 ℃
9、用气雾熏蒸剂对空间和物体表面进行消毒灭菌时，用量一般为每立方米（ C ）
A、1～2g B、 1～2mg C、3～4g D、 3～4mg
A、自来水 B、蒸馏水 C、无菌水 D、矿泉水
四．判断题（对的画"√"错题画"×"，每题1分，共10分）
1、茎尖培养与脱毒中，能否培养成功关键在于培养基。（ × ）
2、平板培养是花粉培养的一种方式。（ √ ）
3、原生质体培养的适宜温度为25-30℃。（ √ ）
4、环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80％-90％的相对湿度。（ × ）
5、无病毒植株实际应用中最大的问题并非重复感染。（ × ）
6、机械法分离原生质体的主要缺点是原生质体的产量很低、方法繁琐费力。（ √ ）
7、植物组织培养形成的愈伤组织进行培养， 又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为脱分化。 （ × ）
8、植物组织培养的培养基PH值都在5.8－6.0之间。（ × ）
9、花粉培养是将花粉从花药中游离出来，成为分散或游离态进行培养。（ √ ）
10、单细胞培养中选择优良细胞株常用平板培养法。（ √ ）
五、简答（操作）题（45分）
1、如何对外植体进行表面消毒？ （8分）
(1) 将需要的材料用水洗干净。
(2) 表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。
(3) 灭菌剂处理：0.1%10分钟、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15水下助推器分钟。
(4) 用无菌水冲洗3-5次左右
2、 简述试管苗的驯化移植过程。 (12分)
（1） 基质的混配：按配方将基质进行混合。
（2） 混配基质和容器的消毒：用0.1～0.2%高锰酸钾对基质和容器进行喷洒清洗消毒
（3） 装钵或穴盘：将基质装入容器中，压实，浇透水。
（4） 试管苗的清洗：将试管苗根部的培养基质清洗干净，以防污染并少伤根。
（5） 试管苗的移栽 ：在容器内用竹签扎一小孔穴，将洗净的小苗栽入其中，周围压实并轻浇薄水。
（6）做好保湿和遮荫，一般20-30d试管苗长出新根、发出新叶，高度5-10㎝就可以定植。
3、 以制作配方为MS0的培养基1L为例，叙述组培培养基的配制步骤。(大量元素母液为10×，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为100×，激素母液浓度为1mg/ml)(12分)
(1)按配方移取各母液：大量元素母液为100ml，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为10ml。
(2)定容：用蒸馏水定容至1L。
(3)称量蔗糖和琼脂：蔗糖25－30g，琼脂7－8g。
(4)培养基熬制：加入蔗糖和琼脂后进行培养液熬制，直至琼脂全部融化。
(5) 调PH值：先用PH计或PH试纸测量后再用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8－6.0。
(6)二次定容：当培养基熬制后总体积少于1L时要定容至1L。
(7)分装并扎瓶口：趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml, 35瓶/L。
(8)高压灭菌：及时灭菌，121-123℃条件下保持20－30分钟。
(9)冷却：待接种。
4杂物门、试述毛白杨组培快繁的操作程序。 （13分）
（1）外植体的选择：从毛白杨成年树基部萌生条上取当年形成的直径为5m左右的枝条，用解剖刀切成长度为1.5～2.0cm的节段，每个节带一个休眠芽。
（2）外植体灭菌及培养：将切段先用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%酒精消毒约30s，倒出酒精后，立即用无菌水冲洗一遍，然后放入盛有0.1%溶液的无菌杯内，
幼嫩茎尖灭菌1～3min，茎段灭菌2~7min，最后用无菌水冲洗3～4次，接种到MS+BA0.2～0.5mg/L+IBA0.lmg/L+2%食用砂糖的培养基上。放置在23～27℃温度条件下培养，每天日光灯光照l0h。2～3个月后，部分茎尖可分化出幼芽。
（3）增殖培养：将茎尖分化出的幼芽从基部切下，接种到MS+BA0.5～1.0+NAA+食用砂糖2%的增殖培养基上。经10d左右培养，待腋芽萌发并伸长至带有6～7片叶时，可进行茎切段繁殖或叶切块繁殖，顶端切段带2～3片叶，其余各段带一片叶，重新接种到增殖培养基上，至其长到6～7片叶时，又可再次切段繁殖。
（4）生根培养：将继代培养中分化的嫩枝，从基部切下，或顶端带2～3片叶，以下各段只带一片叶，转接到生根培养基1/2MS +IBA0.25mg/ L+食用砂糖1.5%，pH6.0上诱导生根。
（5）试管苗的移栽：当根的长度达1～1.5cm左右时，打开瓶口炼苗，逐渐降低湿度，并逐渐增强光照，进行驯化，经过10d炼苗后，从培养容器中取出生根苗，洗净残留在植株上的琼脂，移栽至温室内装有蛭石的苗床上或装有细沙的花盆内，开始时都要罩以塑料薄膜，以保持湿度，每天应定时掀开部分塑料膜以利通气，10d后可去掉塑料薄膜。待植株
又长出1～2片新叶后，再移至草木炭和沙土按3:1比例混合的土壤中，后移入大田栽培。
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