实验一 速测卡快速测定果蔬中农药残留
【目的要求】
通过实训，理解速测卡法的基本原理，掌握速测卡法检测的基本技能。 【检测原理】
胆碱酯酶可粗话靛酚乙酸酯（红）水解为乙酸和靛酚（蓝），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。 【主要仪器】
农药残留速测卡，超声波提取仪，便携式农药残留速测仪机读答题卡，电子天平。
【材料与试剂】
果蔬样品3~4种。
pH7.5的磷酸缓冲液：分贝称取15.0g磷酸氢二钠与1.59g磷酸二氢钾，用500mL蒸馏水溶解。
【操作步骤】
样品前处理
A 整体测定法 将果蔬样品剪成1cm左右见方碎片，取5g放入烧杯中，加入10mL缓冲溶液，摇匀，静置10min以上或用超声波提取仪提取2min左右，得到的浸泡溶液为样品提取液。
B 表面测定法 擦去果蔬表面灰尘，滴3~5滴缓冲溶液在果蔬表面，用另一片果蔬在滴液处轻轻摩擦，得到的滴液为样品提取液
分析检测
取一片农药残留速测卡，用白药片沾取样品提取液（3~4滴），在便携式农药残留速测仪（37℃）防止10min以上进行预反应，预反应后的药片表面必须保持湿润；将农药残留
速测卡对折，用手捏3min或用便携式农药残留速测仪恒温3min，使红药片与白药片叠合发生反应；每批测定应设一个缓冲液空白对照检测卡。
【结果判定】
与空白对照检测卡对比，白药片不变或为浅蓝均为阳性结果，白药片变成天蓝或与空白对照检测卡相同为阴性结果。
【适用范围】
此方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中盐酸克仑特罗含量的检测
【检测原理】
水银滑环
本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向谱和胶体金技术进行尿液中克仑特罗分子的快速定性检测。
用BSA偶联的克仑特罗分子和胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克仑特罗抗体和BSA抗体分别包被在检测区（T）和质控区（C）。当尿液样本加到加样孔后，样本中的克仑特罗分子和克仑特罗-BSA-胶体金偶联物一起谱泳动到检测区竞争与克仑特罗抗体结合，剩余的克仑特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区域抗体结合。因此，当样本中的克仑特罗浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能和克仑特罗抗体结合，此时检测区不出现紫红线条；当样本中克仑特罗浓度低于一定值或样本中没有克仑特罗时，胶体金偶联物就与克仑特罗抗体结合，从而在检测区显示出意料紫红线条；而无论样品中是否含有克仑特罗，质控区都会出现紫红线条，以示检测有效。
【主要仪器】
食品加工机，低速离心机，电子秤（精度g），250μL单道微量移液器（移液）。
【材料与试剂】
盐酸克仑特罗检测卡、检测试剂A（3%三溶液）、检测试剂B（0.10mmol/L氢氧化钠溶液）、pH试纸（1~14）、剪刀、10mL试管（或离心管）、一次性塑料吸管、一次性手套等。
【操作步骤】
从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1h内应尽快地使用。
将肉或内脏样本用剪刀简称随调后放入食品加工机中用一字刀粉碎，称取5g粉碎样本置于试管中，加入5mL检测试剂A。盖上盖，摇匀，浸泡约10min。
用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2min（3000r/min），用移液移取250μL上清液转移入2mL检测管中，加入约1滴检测试剂B，调整pH值至7左右。
将盐酸克仑特罗检测卡置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加样孔内。
玻璃加工工艺
等待紫红条带的出现，测试结果应在5min时读取。
【结果判定】
阳性（+）：仅质控区（C）出现一条紫红条带，在测试区（T）内无紫红条带出现。
阴性（-）：两条紫红条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。
防伪印章无效：质控区（C）未出现紫红条带，表明不正确的操作过程或检测卡已变质损坏，应重新测试1次，如仍为此现象，应更换检测卡或联系供应厂家。
阳性结果表明盐酸克仑特罗含量在阈值以上，阴性结果表明盐酸克仑特罗含量在阈值以下。
【智能召唤灵敏度】
灵敏度（阈值）：根据每种检测卡控制浓度而定，盐酸克仑特罗有3ng/mL（kg）、5ng/mL（kg）、6ng/mL（kg）等控制规格，判断前请向供应厂家咨询控制阈值。
【注意事项电动钢丝刷】
针对猪组织和尿液采用不同类型的检测卡，使用时应区别使用。
使用盐酸克仑特罗（尿液）检测卡对猪尿液进行检验时，直接将猪尿液代替样品处理液用
于检测即可。
肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果，取样时请剔除肉眼可见的脂肪。
盐酸克仑特罗检测卡应在常温下使用，不用对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉进行直接检测。
自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照，可用与阈值接近的几个浓度阶梯来校验检测卡的灵敏度。
（本项目参考标准：NY/9T933-2003《尿液中盐酸克仑特罗的测定 胶体金免疫谱法》）
【目的要求】
理解氯霉素ELISA试剂盒在蜂蜜、牛乳及组织中氯霉素检测的现实意义。
【检测原理】
本方法是应用抗原抗体反应原理，采用竞争一直法构建的，用于定量测定蜂蜜、肉了你及
牛乳中氯霉素残留的一种ELISA试剂。
在预包被有抗氯霉素抗体的微孔板的反应孔内，依次加入氯霉素酶标记物、氯霉素标准或样品溶液，然后孵育一定时间，则游离氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体结合位点（竞争性酶免疫分析）。没有结合的氯霉素酶标记物在洗涤步骤中被除去，将酶基质（过氧化脲）和发剂（TMB）加入到微孔中并且孵育一定时间，结合的氯霉素酶标记物将无的TMB转化为蓝的产物。未显孔为阳性，显孔为阴性。检测过程设置阴性对照，阳性对照或空白对照，可通过目测对比颜变化进行定性判读，也可加入终止液使颜由蓝转变为黄，读取450nm处OD值（选择参与波长≥600nm）；或直接在630nm处读取OD值。OD值与样品中的链霉素浓度呈反比。可进行定性、定量检测。
【器材】
恒温箱（孵箱），单道微量移液器，塑料吸管，洗瓶；酶标仪，洗板机；动物性制品，乳制品等。
【操作步骤】
熟悉试剂盒说明书。
将试剂盒内的预包被孔条（通常是由12条可拆卸板条组成，每条8孔），按需要取出8孔条使平衡到室温，操作过程所需的试剂一同取出平衡到室温。
将准备好的供试样品溶液、标准品、阳性对照、阴性对照等分别定量取到反应微孔内并进行孵育，然后用配套洗液清洗反应微孔。
上述微孔去除多余水分后，逐孔定量加入酶标记物，按要求孵育一定时间，然后用配套洗液清洗反应微孔。
上述微孔去除多余水分后，逐孔定量加入TMB，按要求避光孵育一定时间，然后直接判读定性结果，或在酶标仪上读取OD值。
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