单元2 消毒灭菌技术

江苏省徐州医药高等职业学校

教案

镜面银油墨

教师姓名		授课班级	授课地点	实训室
授课日期			授课时数	4
学习项目	学习项目1 灭菌消毒方法及设备认识
教学目标	知识目标　1．掌握消毒、灭菌、无菌操作和防腐的概念。 2．熟悉常用物理和化学消毒灭菌法的原理、方法和指标。 3．了解影响消毒灭菌效果的有关因素。技能目标：1.掌握消毒、灭菌、防腐及无菌操作过程的方法和步骤。 2. 掌握消毒与灭菌中所用仪器设备的操作技术。
重点和难点	重点：1.消毒、灭菌、无菌操作和防腐常用方法。 2. 消毒、灭菌、防腐操作所用设备结构及操作方法。难点：1.湿热与干热灭菌效果的比较。 2.消毒、灭菌设备的结构及灭菌原理
教学方法	提问启发式、多媒体课件、演示法、分组讨论
教学仪器、设备	多媒体、手提式高压蒸汽灭菌锅、鼓风干燥箱等设备
参考资料	【1】周德庆著：微生物学教程，高等教育出版社，1999。【2】李榆梅主编：微生物学，中国医药科技出版社，1999。【3】李榆梅主编：药学微生物实用技术，中国医药科技出版社，2008。
作业	目标测试题
课后体会	学生对灭菌设备很感兴趣，积极操作但对于灭菌方法的判断还需学习。

授课主要内容或板书设计

学习项目1 消毒灭菌方法及设备的认识

【引入】

本章需要掌握的基本技能是掌握控制微生物生长的消毒、防腐与灭菌方法及所用设备。首先解决以下几个问题：消毒、灭菌、防腐、化疗、无菌、无菌技术等基本概念的含义是什么？物理消毒灭菌的常用方法及设备有那些？化学消毒、灭菌、防腐的常用方法有那些？要想达到好的控制微生物生长繁殖的效果应考虑那些影响因素？

一、消毒、灭菌、防腐、无菌、无菌技术等基本概念的含义是什么？

消毒：指杀死病原微生物，但不包括芽胞。

灭菌：是指杀灭物体上所有微生物，包括繁殖体和芽胞。

防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖。

消毒剂：高浓度

防腐剂：低浓度

套链无菌：物品中没有活的微生物存在。

无菌技术：是指在进行外科手术或分离、转种及培养时防止其他微生物污染实验材料的操作方法。无菌操作所用的器具和材料，都必须先经灭菌处理。

二、物理消毒灭菌的常用方法有那些？

热力灭菌法：高温、低温、干燥

辐射杀菌法：电离、非电离

物理方法滤过除菌法

超声波杀菌法

等离子体

渗透压

（一）、热力灭菌法

分类：干热灭菌法

湿热灭菌法

1.干热灭菌法

A 焚烧与烧灼：灭菌

焚烧其作用范围为污染纸张、垃圾等废弃物及动物尸体等；灼烧一般用于可直接加热的仪器、器皿的灭菌，例如接种环、手术刀、镊子等金属器械及试管、三角瓶、小烧杯等。

注意事项如下。

（1）灼烧时要用酒精等外焰加热。

半导体制冷空调（2）灼烧接种环时，要不停捻动接种环的棒部，以便受热均匀，先烧环部，烧红、烧透，再烧柄部。

（3）灼烧试管、三角瓶、小烧杯等玻璃器皿时，要用灼烧过的镊子夹住仪器口壁，然后使器皿口朝上倾45º，用酒精灯外焰从底部依次向上均匀加热（注意仪器内不能有水存留），最后烧灼管口、瓶口。

（4）纸片等易燃物品用灼烧法灭菌时，用无菌镊子夹住纸片，迅速在酒精灯外焰移动，以杀死微生物（注意纸的两侧应均匀灼烤），切忌烤糊。

B、干烤：灭菌 160°～180℃，2h；利用热辐射及干热空气进行灭菌，常用仪器是恒温干燥箱和干热灭菌箱。

使用恒温干燥箱的注意事项

（1）对玻璃器皿、瓷器、金属等耐热物品灭菌时，首先要洗干净、控干水，不能沾有油脂等有机物。按要求包扎好后，放人恒温干燥箱内，排列不可过密、不可紧靠干燥箱壁，且忌用油纸包扎，以防着火。然后调节温度到镀镍铜带160～170℃持续2h以上，温度不要超过170℃。

（2）一般情况下对注射器、安瓿等灭菌时，180℃45min即可。用l80℃2h或250℃45min可除去热原质。

（3）对纸张、棉花等物品及凡士林、部分粉剂等药品灭菌可用140℃，持续3h。

（4）灭菌时，干燥箱内物品不能堆放过多、过密，以防空气不易流通。用纸包扎的待灭菌物，不可紧靠干燥箱壁，以防着火。

（5）灭菌开始前要调节好温度、时间，关好箱门，待温度慢慢升高。灭菌结束时，关闭电源，温度慢慢降至60℃左右再开启箱门，以免高温度的玻璃因骤冷而破碎。

（6）干燥箱内有焦糊味应立即关闭电源，报告教师。

（7）取出灭菌物品时，小心不要碰破电热干燥箱顶部放置的温度计。水银温度计打破后，立即报告老师，一定及时处理，防止水银蒸发中毒。可先用硫磺铺撒在污染的地面和仪器上，然后用吸管清除水银。

C、红外线灭菌：

2.湿热灭菌法

A 巴氏消毒法： 61.1-62.8℃，30 min； 71.7℃，15-30sec

B 煮沸消毒法：100℃，5min -10min

C 流通蒸气消毒法：100℃，15-30min

D 间歇蒸汽灭菌法： 100℃，15-30min，37℃过夜（3次）

E 高压蒸气灭菌法: 高压蒸汽灭菌法是彻底而迅速的灭菌法。

适用范围：①耐高温和潮湿的物品，如培养基、衣物、敷料、玻璃器材、传染性污染物等；②接种及培养后的培养基，经高压蒸汽灭菌后，再弃去，然后洗涤相应容器。

高压蒸汽灭菌法需要的设备为：高压蒸汽灭菌器。

高压蒸汽灭菌器的工作原理：常压下，水的沸点是l00℃，随着容器里的压力升高，水的沸点也将升高，因此可以提高蒸汽的温度，人为使容器内的压力持续一定的时间，可达到彻底灭菌的目的。

使用高压蒸汽灭菌器要按要求操作，特别注意安全事项。

1. 使用高压蒸汽灭菌器注意事项

（1）加水使用高压蒸汽灭菌器应注意仪器内水量充足，加水达到标识线。

（2）加料把灭菌物品疏松排列在高压蒸汽灭菌器内，保证空气畅通。被灭菌的容器表面必须洁净且不污染有机物质，并用一定方法包扎，防止脱落。盛装液体制剂的容器要耐高温、高压，并且保证器皿盖上有通气孔，使容器内外相通，如：灭菌生理盐水时，在瓶盖上插一注射器针头可达容器内外气体相通的目的，保证容器不会因高压而损坏。

（3）加盖盖好灭菌器盖，拧紧加压装置，检查放气阀和安全阀，全自动仪器要设置好压力、温度、时间。

（4）排放冷空气加压之前先排除仪器内的冷空气，待灭菌器内有白蒸汽持续冒出时，关上放气阀（全自动装置可忽略此环节）。

（5）灭菌实验室中常用的方法是：I21.3℃，持续20min，可达到较好的灭菌效果。不能耐受l21℃的含糖培养基或注射液可用116℃，持续40min或更长的时间达灭菌目的。也可用126.5℃，15min达灭菌目的。

（6）开盖取物高压蒸汽灭菌结束时不要急于打开锅的压力阀，要等仪器内外压力平衡后（压力表将为零时）再打开压力阀，以免锅内液体喷溅伤人及灭菌器皿破裂。

（7）严密监控灭菌时不能离开工作现场，控制好灭菌压力，以防压力过高破坏培养基成分，防止高压锅超过耐压范围时爆炸伤人。

思考：湿热比干热灭菌好的原因：

（1）细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性

（2）湿热穿透力强

（3 ）湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固成水释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度

（二）、光线与射线的消毒作用

1．日光与紫外线

　机理：损坏DNA构型->细菌死亡或变异

特点：穿透力弱

2．电离辐射：包括X射线和γ射线

机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜；产生过氧化氢等

特点：穿透力强，不升高温度

（三）、滤过除菌法

用滤菌器除去液体及空气中的细菌

用于不耐热的血清、毒素、抗生素

（四）、超声波的消毒作用

可裂解细菌，尤其对G+更敏感

主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等

（五）等离子体法

对微生物有良好的杀灭作用。

但不适用于纺织品和液体。

三、化学消毒灭菌的常用方法有那些？

消毒剂

防腐剂

化学方法化学剂

（一）化学消毒灭菌的机制

① 使菌体蛋白质变性或凝固

② 破坏或改变蛋白质与核酸功能基团

③ 改变细胞壁的通透性

（二）常用消毒剂的主要种类、浓度及用途

1．酚类：作用：菌体蛋白凝固；损伤细胞膜；

灭活酶类浓度：石炭酸为3%- 5%、来苏儿为2%

用途：地面、器具表面和皮肤的消毒

2．醇类：作用机制：使菌体蛋白变性与凝固；干扰细菌代谢

浓度：乙醇70%-75% 用途：用于皮肤的消毒和体温计等的浸泡

3．重金属盐类：使细菌发生变性和沉淀；酶活性丧失

（1）2%红汞：皮肤、粘膜和小创伤

（清烟器2）0.05-0.01%：非金属器皿

4．氧化剂：氧化作用；使蛋白质变性

（1）0.1%高锰酸钾：皮肤、尿道、水果

（2）3%过氧化氢：创伤、皮肤粘膜

（3）2%-2.5%碘酒：皮肤消毒

led闪光灯（4）0.2ppm-0.5ppm氯：饮水和游泳池

（5）10%-20%漂白粉：地面、厕所等

5．表面活性剂：损伤细胞膜；灭活氧化酶等酶的活性；蛋白质沉淀

（1）0.05%-0.1%新洁尔灭：皮肤粘膜、手术器械

（2） 0.05%-0.1%杜灭芬：伤口冲洗，金属器械、塑料、橡皮类

6．烷化剂：使菌体蛋白和核酸的烷基化

（1）10%甲醛：物品表面、空气

（2）2%戊二醛：精密仪器、内窥镜等缺点：有一定的毒性

（三）日常消毒剂的应用

1．病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石炭酸或2%来苏儿、搅拌均匀，作用2小时

2．皮肤：2.5%碘酒、70%酒精、2%红汞

3．粘膜：1%硝酸银、3%过氧化氢、0.1%高锰酸钾等

4．饮水: 、漂白粉

5．厕所：生石灰

6．空气：甲醛熏蒸

7．手：2%来苏儿、2%碘酊、70%酒精

（四）常用防腐剂

1.概念：可抑制霉腐微生物的生长繁殖，防止食品等发生霉变的措施，此时，微生物并没有被杀灭，而只是受到抑制。而添加防腐剂也是一种常用的防腐措施。

2.常见防腐剂：乳酸链球菌肽，又称乳酸链球菌素，苯甲酸和苯甲酸钠；硝酸盐和亚硝酸盐等。

四、影响消毒灭菌的因素

a.消毒剂的性质、浓度与作用时间

b.微生物的种类与数量

c.温度

d.酸碱度

e.有机物

五、分组讨论

判断下列物品采用何种消毒灭菌方法较为合适？这些消毒灭菌方法分别需要什么设备或试剂？如何操作?

接种环、牛奶、酶制剂、实验服、无菌室、培养皿、饮水、皮肤、一般培养基

江苏省徐州医药高等职业学校

教案

教师姓名		授课班级	授课地点	微生物实训室
授课日期			授课时数	2
学习项目	学习项目2 微生物实验器具的基本清洗包扎技术
教学目标	技能目标1．能安全配制出符合要求的洗涤剂并正确使用 2．能熟练、迅速地包扎好各种玻璃器皿
重点和难点	重点：具体的操作及注意事项难点：包扎的正确操作
教学方法	演示法、分组讨论和分组实训法
教学仪器、设备	移液管、培养皿等仪器
参考资料	微生物实训手册
作业	实训报告
课后体会	对于玻璃仪器的包扎需要反复练习，个别同学接受能力欠缺，需要加强联系。

授课主要内容或板书设计

学习项目2 微生物实验器具的基本清洗包扎技术

【复习引入】上一个学习项目为消毒灭菌，那么在消毒灭菌之前我们要对各种器皿进行清洗包扎，那么如何进行清洗包扎就是本次学习的主要任务。

一、常用洗涤液及其配制方法

（一）配制洗涤剂的常用试剂

重铬酸钾(工业用)、浓硫酸、氢氧化钠溶液(0.1mol/L)、碳酸钠水溶液（苏打水)、氨水、酒精（95％）、苯酚溶液(0.5％，5％)、浓硝酸、漂白粉液、蒸馏水、肥皂、氢氧化钾溶液(0.1mol/L)、盐酸溶液(10％，0.1mol/L)。

1．铬酸洗涤液的配制与使用

（1）配方

浓配方：重铬酸钾(工业用) 40g 稀配方：重铬酸钾(工业用) 50g

浓硫酸(粗) 500mL 浓硫酸(粗) lOOmL

自来水 160mL 自来水 850mL

（2）配制与使用方法

将重铬酸钾溶解在自来水中，慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，配好后，贮存于广口的玻璃瓶内，盖紧塞子备用。应用此液时，器皿必须干燥，同时切忌把大量还原物质带入，这样就可应用多次，直到溶液呈青褐为止。在使用时，为增加去污作用，稀的铬酸洗涤液可以煮沸使用。

2．酸和碱的配制及使用

若器皿上沾有焦油和树脂等物质，可用浓硫酸或40％的氢氧化钠溶液使它们溶解后洗去，一般只需5～10min，有时需数小时。

3．肥皂和其他洗涤剂的使用

肥皂水是很好的去污剂，加热后去污力更强。油脂太多的器皿，先用吸水纸将油擦去后，再用肥皂水洗。此外还有其他洗涤剂如l0％的磷酸钠溶液去污、去油脂能力更强。比用肥皂洗更加洁净。

二、玻璃器皿的准备与清洗

1．新购置的器皿

对于新购置的玻璃器皿最好的清洗办法是用l0％的盐酸溶液浸泡一夜再用清水洗净；也可浸在肥皂水中lh，再用清水洗净。

2．一般器皿

（1）一般器皿如试管、烧杯、培养皿等，若沾有有害微生物，先用高压灭菌锅灭菌或用漂白粉溶液消毒后，再用水洗。

（2）用肥皂水洗时，可以加热煮沸，洗过之后用清水冲洗几次，最后用少量蒸馏水洗一次，器皿干燥后就会更加洁净、光亮。

（3）若需更洁净的器皿，可用浓铬酸洗液处理。试管、烧杯、培养皿等在铬酸洗液中浸10min，滴定管、吸管和移液管则要1～2h。洗液处理后的玻璃器皿，要用水充分冲洗，将洗液完全洗去，最后用少量蒸馏水再洗一次。

3．载玻片与盖玻片

已用过的带有活菌的载玻片与盖玻片，可先浸在5％的苯酚溶液中消毒，然后用水冲洗干净，水洗后在铬酸洗涤液中浸数小时后再用水洗几次。

若载玻片和盖玻片上沾有油脂等物质，可先用肥皂水煮过后再洗。

洗净的载玻片与盖玻片，可贮在95％的酒精(滴入少量浓盐酸)中，用时可用柔软洁净的布擦干或将酒精烧去。

4．滴定管、吸管和移液管

带菌的滴定管、吸管和移液管等，应立即投入5％苯酚溶液中过夜，先进行灭菌。然后用自来水冲洗，再用蒸馏水冲净。不带菌的可直接清洗。

5．特殊清洁法

精密的实验，只将玻璃表面附着物洗去还不够，玻璃中的可溶性杂质也影响实验验结果。这些玻璃器皿，可先在0.1mol/L的氢氧化钾溶液或0.lmol/L的氢氧化钠溶液中煮1h，洗过后再在0.1mol/L的硫酸或0.1mol/L的盐酸溶液中煮1h。然后再用蒸馏水洗几次，再在蒸馏水中浸几小时后干燥。

三、玻璃器皿的干燥

洗净后的玻璃器皿，一般是放在木架上或其他合适的地方，在室温下干燥。若需要高温干燥，温度一般在80～100℃为宜。压缩空气吹干比较快，但压缩空气不太洁净，需要很干净的器皿时不宜用。若需快速干燥，可将洗净的玻璃器皿先用少许无水酒精润湿，倒去后再加少许乙醚，任其干燥。

四、玻璃器皿的包扎

洗净的玻璃器皿，有些还需在电烤箱中进行干燥，灭菌前需要包扎。

1. 培养皿

培养皿可单独用纸包装，也可几套培养皿一起用纸包装。

2. 试管、烧杯、锥形瓶

试管、锥形瓶先加棉塞，烧杯口加盖6～8层纱布，最后用纸包扎后在电烤箱中进行干热灭菌。 3. 移液管

为防止细菌进入口中，并避免将口中细菌吹入移液管内，移液管应在距管口1～2mm处用铁丝塞入棉花少许（约4～5cm长）。棉花要塞得松紧适宜，吹时能通气但棉花不滑下去。将塞好棉花的移液管尖端，放在4～5cm宽的纸条一端约成45º角，折叠纸条包住尖端，用左手捏住移液管，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，每只移液管分别以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条折叠打结，放在电烤箱中准备灭菌(图1-5)。

四、教学组织：实训2-3人一组，教师认真讲解操作规程，边讲解边示范，学生理解、操作，在学生基本清楚的下，教师进行分别指导教学。

五、总结与评价：采用同学之间的评价、示范和老师的综合评价。

本文发布于:2024-09-22 15:48:09，感谢您对本站的认可！

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