微生物实验注意事项
1.实验过程中要及时详细标清除产物和日期，实验做完以后要对以前的过度产品做个清理，以免东西积累过多。 2.实验后的DNA和RNA要及时放回冰箱，以免时间长降解，特别是用水溶解的时候。 3.要及时甘油保存你鉴定出的细菌,每个细菌保存两份，存放在—80度冰箱里。 4.实验用的酶类虽然在室温下放一段时间也没什么问题,但还是要及时放回冰箱，以免活性降低。 5.要及时清理实验台面，保持干净,整洁，有序。 6.无菌操作台用后及时清理干净，操作真菌和细菌等最好不要交叉使用。 7.培养基使用的时候要注意无菌操作，移液器不要插入培养基中，之准许无菌头进入瓶子腔体，如培养基较少，可以倾斜瓶子,移液器取液体最好不要用到最大量程,以免吸液过猛导致与移液器接触。 8.灭好的培养基标签一定要写好，包括名称，日期，是否加抗生素，是否加抗生素非常重要，特别是在共用培养基的实验室。 9.实验用过的试剂盖子一定要盖好,以免挥发。特别是有毒的物品，如氯仿，苯酚等，用完后的瓶子及时拿出实验室。 10.带手套接触有毒物品后，要及时处理掉手套。不管是否接触过有毒物品，,不要戴着手套乱接触其他东西，如开窗等。 11.做实验过程中不要接电话,说话，考虑其他事情。特别是PCR和配溶液的时候。做PCR和配溶液的时候要把所用的试剂全，一字排开,加完一种东西就把这种东西放到一边，可防止自己少加错东西。 12.同时作几个实验的时候一定要有定时器，防止自己忘记,特别是在煮东西，加热溶化溶液等危险操作的时候，切忌。 13.饭前，有活动前不要做实验，这时候匆匆忙忙非常容易出错，特别是作有危险的实验，更要注意。 14.作好试验记录，不管有没有结果,一定要坚持。还有点用图片，测序结果等，如果不清楚记录东西多了,就乱了，混了。这个一定要认真做好。 15.要随时写下自己的想法，因为有些想法稍纵即逝。 |
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微生物实验注意事项
一、无菌操作要求
2。 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用.
燃煤助燃剂3。 接种食品样品时， 应在进无菌室前用肥皂洗手， 然后用 75%酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边.
6。 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
buckboost电路7。 金属型铸造机接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸 5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求
1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门， 另设有 0。5-0.7m2 的小窗， 以备进入无菌间后传递物品。
2。 无菌间内应保持清洁,工作后用2%—3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3。 无菌间使用前后应将门关紧， 打开紫外灯， 如采用室内悬吊紫外灯消毒时, 30W 需紫外灯，距离在 1.0m 处，照射时间不少于 30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线
下操作， 以免引起损伤, 灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭, 除去上面灰尘和油垢, 以减少紫外线穿透的影响。
4。 处理和接种食品标本时,进入无菌间操作，不得随意出入,如需要传递物品，可通过小窗传递。
5。 在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭 菌后方能使用.
1．灭菌前准备
(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如 用金属筒应将上面通气孔打开.
（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包 好.
2．装放
(1）干热灭菌器:装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
（2）大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内，物品之间不能 过挤.
3．设备检查
（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整.
(2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后,观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。
（3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进 行灭菌处理的要求.
4．灭菌处理
手摇甘蔗榨汁机 （1） 干热灭菌法：此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。
① 器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。
② 灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。
③ 菌时将箱门关紧，接上电源,先将排气孔打开约 气，温度升至 160℃调节指示灯，维持 1。5 –2h。
④ 灭菌完毕后或温度升温过程中，须在 60℃以下才能打开箱门。30min，排除灭菌器中的冷空sys8气.
(2) 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：
① 手提式高压锅在主体内加入 3L 清水,立式高压锅加水 16L（重复使用时应将水 量补足，水变混浊需更换）。
② 手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破 裂的灭菌器不得使用） 。
③ 盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源,并打 开顶盖
上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气 10—15min) 。
④ 关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有 关情况而定) 。
⑤ 达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零 时,自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到 体剧烈沸腾或容器爆破.60℃以下再开盖取物，以防突然减压。
（3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：
① 关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动 排出。
② 夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室 阻气器自动排出.
③ 待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至
④ 自然或人工降温至 60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压， 液体剧烈沸腾或容器爆破。
⑤ 使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按 动相应开关,以便按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以 备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。
5．灭菌温度与时间：干热灭菌器灭菌温度160耐腐蚀热电偶℃，1。5—2h。（2）
（二）间歇灭菌方法
1. 压力蒸气灭菌
灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌,某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。
（1）将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖,打开排水口,使器内余水排尽。
（2)关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒 10～20min。
（3）灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入 37℃温箱过夜，次日仍 按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。
2．血清凝固器使用方法，培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时,因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固,又可达到灭菌目的.
(1）使用。在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后
（2)将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后,接上电源，升温 75～90℃1h 灭菌,放 37℃温箱过夜,再如此灭菌三次.
3．煮沸消毒:可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮 5～15 min,也可在水中加入 2﹪石炭酸煮沸 5 min，加入 0。02﹪甲醛, 80℃煮 60 min 均可达到灭菌目的,煮沸消毒的增消剂时, 应注意对物品的腐蚀性. 但选用4．灭菌处理：灭菌后物品,按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染.
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