２０２１年第６期浙江畜牧兽医收稿日期：２０２１ ０７ １６
基金项目：２０２１年平湖市科技计划项目（２０２１１０）
作者简介：沈亚菊（１９８１－），女，高级兽医师，硕士，从事基层动物防疫，２８５７３５８４５＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者：林瑞平（１９８１－），男，高级兽医师，本科，从事基层
动物防疫，１３９６７３４３４４７＠１３９．ｃｏｍ
沈亚菊１，冯高乐１，邵 高１，朱 赞１，张志方２，夏天中２，林瑞平１
（１．平湖市畜牧兽医站，浙江平湖３１４２００；２．平湖市动物卫生监督所）
摘要：为了评判重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株和Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）的
临床免疫效果，首先对部分规模鸡场高致病性禽流感免疫现状开展问卷调查；从重组禽流感病毒（Ｈ５ ＋Ｈ７）三价灭活苗免疫的８个鸡场采集了２３９份禽血清和２１０份拭子分别进行血清学、病原学检测，结果显示，虽然参与调查的肉鸡场均不同程度地存在养殖户年龄偏大、文化程度偏低、鸡场生物安全防控风险隐患、首免日龄不合理等问题，但所有检样的免疫合格率均大于７０％，未发现禽流感病毒阳性样品。其次选择了２７日龄快速型黄羽肉鸡进行重组禽流感病毒（
Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗免疫试验，分别于首免后１４ｄ、２８ｄ和二免后１４ｄ、２８ｄ、４２ｄ采血进行抗体监测。免疫试验结果显示重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗首免１４ｄ后抗体平均滴度达６ ２以上，２８ｄ时抗体平均滴度达９ ２以上。结果表明重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株和Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）免疫能为鸡提供针对Ｒｅ １１、Ｒｅ １２和Ｈ７ Ｒｅ３毒株的良好保护。
关键词：禽流感；免疫现状；免疫效果；调查
中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５－７３０７（２０２１）０６－０００３－００３
高致病性禽流感在世界范围内的家禽和野鸟中
广泛流行［１］
，
给我国的养禽业造成了巨大的损失。
当前我国家禽Ｈ５亚型禽流感主要流行Ｈ５Ｎ６亚型，少量Ｈ
５Ｎ１亚型，偶尔分离到Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ８和Ｈ５Ｎ２等，在野鸟和鸭上Ｈ５Ｎ８的发生呈增多趋势，病毒ＨＡ基因进化分支有３个，主要流行的是呈全国性分布的２．３．４．４ｄ分支，其次为在不同区域的省份出现的２．３．２．１ｄ分支，个别病毒属于野鸟分支。Ｈ７亚型禽流感流行主要以Ｈ７Ｎ９为主，偶尔分离出Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ３和Ｈ７Ｎ２等亚型，病毒ＨＡ基因分为以鸡为主的Ｈ７Ｎ９分支和鸭源Ｈ７病毒，Ｈ７Ｎ９
病毒随时间出现了不同的小分支［１－３］。为有效防控
高致病性禽流感，我国采取了强制免疫政策。２０２０年，农业部批准了针对高致病性禽流感病毒的最新疫苗“重组禽流感（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株＋Ｒｅ １２株，Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）”和“重组禽流感（
Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ２ｒＳＤ５７株＋ｒＦＪ５６株，Ｈ７Ｎ９ｒＬＮ７９株）”。为了解浙江平湖市规模鸡场禽流感防控现状及免疫情况，本课题组对部分养
鸡场做了问卷调查，并对其中部分鸡场进行了高致病性禽流感免疫抗体水平和病原学检测，另选择某
鸡场开展政府采购重组禽流感病毒（
Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株和Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）免疫试验。１ 材料与方法
１．１ 问卷调查 通过问卷调查的形式，对８户规模鸡场进行了问卷调查，分别编号肉鸡１、肉鸡２至肉鸡８。
１．２ 血清学和病原学检测 全血样品来自８个使用重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株Ｒｅ １２株Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）免疫的养禽场，在免疫后３０ｄ以上采集，每场采集３０份，共分离血清２
吸咪头
３９份，同时采集２１０份咽喉和泄殖腔拭子。１．３ 免疫试验
１．３．１ 试验疫苗 政府采购重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株和Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株），哈药集团生物疫苗有限公司生产，批号２
０２０４１，生产日期２０２００９０６。１．３．２ 试验方法 试验用鸡来自浙江省平湖市新埭镇某养鸡场，
２７日龄快速型黄羽肉鸡１２０羽。免疫前先测定鸡高致病性禽流感母源抗体水平。随机选择６０羽进行重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗一次免疫试验，鸡右侧胸部肌肉注射疫苗０ ５ｍＬ／羽，于免疫后１４ｄ、２８ｄ、４２ｄ采血进行抗体
３
超导失超浙江畜牧兽医２０２１年第６期
监测。另择６０羽进行重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗二次免疫试验，首免２７日龄，间隔３０ｄ加强免疫一次，鸡右侧胸部肌肉注射疫苗０．５ｍＬ／羽，首免后１４ｄ、２８ｄ和二免后１４ｄ、２８ｄ、４２ｄ采血进行抗体监测。
１．４ 检测方法 依据《高致病性禽流感诊断技术》（ＧＢ／Ｔ１８９３６－２０２０），采用ＨＡ和ＨＩ试验，对Ｈ５和Ｈ７亚型免疫抗体进行检测和结果判定。ＨＩ抗体滴度≥４ ２为免疫抗体合格，体阳性率≥７０％为合格。病原学检测采用禽流感病毒通用荧光ＲＴ ＰＣＲ检测。
１．５ 诊断试剂 禽流感病毒Ｈ７亚型血凝抑制试验抗原（Ｈ７ Ｒｅ３株）、禽流感病毒Ｈ５亚型血凝抑制试验抗原（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株和Ｒｅ １２株）和阳性血清均由哈尔滨维科生物技术开发有限公司生产，批号分别为：２０２１００１、２０１９００９、２０１９００７。禽流感病毒通用
型荧光ＲＴ ＰＣＲ检测试剂盒（Ｂ盒），哈尔滨国生生物科技股份有限公司生产，批号：２０２００８２０。
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２ 结果
２．１ 问卷调查
２．１．１ 养殖户基本情况 本次调查的８个鸡场均是家庭饲养场，鸡场场主全部是男性，年龄４５－５９岁４人占５０％，１８－４４岁３人占３７．５％，６０－６９岁１人占１２．５％。文化程度小学或初中学历４人占５０％，高中或中专学历２人占２５％，没上过学和大专及以上各为１人，分别占１２．５％。从事养鸡５－１５年５人占６２．５％，５年以下２人占２５％，１５年以上１人占１２．５％。
２．１．２ 养殖规模 ８个鸡场均是饲养肉鸡，年出栏肉鸡１万－５万羽占３７．５％，１０万羽以上和１万羽以下各占２５％，５－１０万羽的１２．５％。鸡场死淘率２％－５％为５个占６２．５％，５％－８％为２个占２５％，１５％以上为１个占１２．５％。
２．１．３ 鸡场防疫条件 本次调查的８个鸡场周边５００ｍ内有村民住房集聚区，３个鸡场周边５００ｍ内有养禽场。除了１个鸡场门口有消毒池，８个鸡场几乎没有生物安全防护措施，场内无门
禁、围栏围墙等物理隔离设施，门口缺乏消毒池或消毒垫，进场无洗澡更衣、更换胶鞋等专门区域。４个鸡场的生产区和生活办公区隔开，１个鸡场的供料道与出粪道分开，各养殖栋舍出入口均未设有消毒垫。４个鸡场的进场车辆、外来人员需要消毒，５个鸡场采取定期全场喷雾消毒或石灰撒播。８个鸡场均未设专门的兽医诊断室和配备体温计、常规解剖器械等诊疗工具，６个鸡场配有疫苗存储专用冰箱。２．１．４ 禽流感临床知识 本次调查８个鸡场场主对高致病性禽流感临床症状知晓率，知晓脚鳞出血、鸡冠出血或发绀、头部和面部水肿发紫的５个占６２．５％，知晓急性发病死亡、神经症状的４个占５０％，知晓肌肉和其他组织器官广泛性严重出血的２个占２５％，知晓绿稀便２个占２５％。２．１．５ 禽流感免疫 ８个鸡场均进行了重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活疫苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株和Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）免疫，４个鸡场进行鸡新城疫、禽流感（Ｈ９亚型）二联灭活疫苗免疫，另１个鸡场进行鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（Ｈ９亚型）三联灭活疫苗免疫。使用的禽流感疫苗来自哈药集团、青岛易邦的５个，来自肇庆华农、湖南中岸的各１个。８个鸡场均开展禽流感免疫抗体检测，且对免疫效果满意。免疫程序多样化：１０日龄首免＋２０日龄二免，７日龄首免＋３０日龄二免，９日龄首免＋３０日龄二免，１０日龄首免＋３０日龄二免，１５日龄首免＋３０日龄二免。免疫剂量或按说明书推荐或比推荐剂量增加０．５倍。８个鸡场对家禽疫苗免疫注意事项及具体操作熟练掌握且认真执行，对本市的高致病性禽流感防控政策表示满意。２．１．６ 鸡场盈利 各鸡场盈利水平不一，肉鸡平均盈利高的５－６元／羽，低的２－３元／羽，甚至亏损５元／羽。
２．２ 血清学和病原学检测
由表１可以看出８个肉鸡场的禽流感Ｈ５亚型（Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株）及Ｈ７亚型（Ｒｅ ３株）免疫抗体合格率均大于７０％，达到国家规定的标准，免疫效果较好。２１０份咽喉和泄殖腔拭子使用禽流感通用荧光ＲＴ ＰＣＲ试剂盒进行检测，结果均未检测到禽流感病原学阳性样品。
２．３ 免疫试验结果 ２７日龄时试验鸡Ｈ５亚型Ｒｅ １２株和Ｈ７ Ｒｅ３株母源抗体完全消失，Ｈ５亚型Ｒｅ １１株母源抗体的平均滴度为０．６８ ２，基本消失。首免１４ｄ后３个疫苗株的免疫抗体平均滴度达６ ２以上，到２８ｄ时３个疫苗株的免疫抗体平均滴度达到高峰，均在９ ２以上。二免１４ｄ后３个疫苗株的免疫抗体平均滴度经过短暂小幅下降后上升至高峰水平。
４
２０２１年第６期浙江畜牧兽医
表１ 鸡场的禽流感免疫抗体检测结果
场名
Ｈ５亚型Ｒｅ １１株
合格数／样品数
（个）
合格率
（％）
Ｈ５亚型Ｒｅ １２株
合格数／样品数
（个）
合格率
（％）
Ｈ７ Ｒｅ３株
合格数／样品数
（个）
合格率
（％）
日志存储
肉鸡场１２８／３０９３．３ ２８／３０９３．３ ２７／２９９３．１肉鸡场２３０／３０１００３０／３０１００３０／３０１００肉鸡场３３０／３０１００３０／３０１００２３／３０７６．７肉鸡场４３０／３０１００３０／３０１００３０／３０１００肉鸡场５２９／２９１００２６／２８９２．９２６／２８９２．９肉鸡场６３０／３０１００３０／３０１００２９／２９１００肉鸡场７３０／３０１００３０／３０１００３０／３０１００肉鸡场８３０／３０１００２９／３０９６．７２２／３０７３．３表２ 禽流感免疫后抗体消长规律
日龄Ｈ５亚型
Ｒｅ １１株
平均滴度
（ｎ ２）
Ｈ５亚型
Ｒｅ １２株
平均滴度
（ｎ ２）
捕虾机电路图
Ｈ７ Ｒｅ３株
平均滴度
（ｎ ２）
２７（首免）０．６８０ ０
４１７．６８７．３５６．２５
５５９．８９．７９９．０５
６９９．４５９．３８８．７５
７１（二免后２周）７．４７８．５３７．４９
８５９．１８９．４８８．９３
９９８．７９８．９２８．５８
３ 分析
问卷调查结果显示，半数以上养殖户年龄偏大、文化程度偏低，数字畜牧应用系统养殖管理使用、智能手机养殖ＡＰＰ操作困难，严重影响数字化畜牧业养殖档案电子台帐推行。有的肉鸡场生物安全防控体系薄弱，没有设立门岗、管理制度严格控制鸡场与外界人流、物流，尽管有一套自己的免疫程序和消毒方法，基本做到单一品种饲养、全进全出、不同批次间清栏消毒空置净化鸡舍，但考虑经济因素较多，会根据周边疫病流行情况、市场行情来调整，执行时可能存在不彻底、不规范。本调查发现各规模鸡场禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活疫苗首免日龄７－１０日龄、１５日龄、３０日龄均有，所用免疫程序比较混乱。临床上血清学检测结果８个肉鸡场的禽流感Ｈ５亚型（Ｒｅ １１株、Ｒｅ １２株）及Ｈ７亚型（Ｒｅ ３株）免疫抗体合格率均大于７０％，达到国家规定的标准，可能与采样时间距离末次免疫时间长短有关。８个肉鸡场的禽流感病原学阴性说明鸡未受野毒感染。
免疫试验结果表明２７日龄肉鸡Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１、Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １２、Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３三种
母源抗体基本消失，这与刘婷婷［４］等研究结果相似。说明禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活疫苗的首免日龄不要晚于２７日龄，否则会增加野毒感染风险。重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗首免、二免后鸡Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１、Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １２、Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３三种抗体的整体消长趋势基本同步。
本研究中８个规模鸡场血清学结果和小免疫试验结果显示，重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活苗（Ｈ５Ｎ１Ｒｅ １１株Ｒｅ １２株Ｈ７Ｎ９Ｈ７ Ｒｅ３株）是有效的，６０日龄出栏肉鸡禽流感免疫一次，１００日龄出栏肉鸡需在首免３０ｄ后加强免疫一次，这样出栏检测时肉鸡具有较高的抗体效价，能有效的降低鸡感染Ｈ５和Ｈ７亚型禽流感病毒的风险。
参考文献
［１］毕英佐．Ｈ５流行毒株有变，２０１９疫苗毒株为Ｒｅ １１ｚ＋Ｒｅ １２株［Ｊ］．北方牧业，２０１９．
［２］田国彬．禽流感流行现状与综合防控措施［Ｊ］．北方牧业，２０２０（２１）：２１－２２．烫印膜
［３］陈晓涵．重组禽流感病毒（Ｈ５＋Ｈ７）三价灭活疫苗研究及应用．中国农业科学院．
［４］刘婷婷，吕宗德，李凤玲，等．蛋鸡Ｈ５、Ｈ７亚型禽流感病毒母源抗体消长规律及其免疫程序的研究［Ｊ］．兽医
导刊，２０２０（１２）：２０７－２０８．
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