分类号：R604 学校代码：10392
学科专业代码：105109 学号：2101003408
福建医科大学
HUNK CpG island methylation in colorectal cancer
tissues and its clinical significance
学位类型：临床医学硕士
所在学院：福总临床医学院
研究生：金志新
学科、专业：外科学(普通外科)
导师：涂小煌教授
研究起止日期：2011年12月至2013年02月
答辩日期：2013年05月08日
二○一三年六月
目录
中文摘要 (03)
英文摘要 (04)
标准电阻器缩略词表 (06)
前言 (07)
第一部分焦磷酸测序法检测结直肠癌患者癌组织及癌旁组织HUNK启动子区CpG岛甲基化率 触摸调光ic
材料与方法 (10)
结果 (17)
讨论 (18)
第二部分免疫组化和实时荧光定量PCR检测结直肠癌组织HUNK表达情况 材料与方法 (20)
结果 (26)
讨论 (29)
全文结论 (32)
参考文献 (33)
综述叶酸与DNA甲基化作用机制的研究进展 (37)
水磨片致谢 (44)
泥浆固液分离附录硕士在读期间完成和发表的文章 (45)
HUNK启动子区CpG岛甲基化在结直肠癌
中的检测及其临床意义
中文摘要
【目的】
微生物检查
检测结直肠癌患者癌组织及癌旁组织中HUNK启动子区CpG岛甲基化率及其表达情况，探讨其与病理及临床之间的关系。
【方法】
应用焦磷酸测序法测定30例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织HUNK启动子区CpG岛甲基化率，并应用免疫组化和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测结直肠癌组织及癌旁组织中HUNK蛋白和mRNA表达，分析其表达与病理学特征及临床关系。
【结果】
1. 焦磷酸测序法检测结直肠癌患者癌组织组HUNK启动子区CpG岛甲基化率20.67±7.36，癌旁组织组为83.07±
2.71，两者比较差异有统计意义(P<0.05)，并且结直肠癌组织低甲基化与性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度等密切相关，与年龄、肿瘤大小和淋巴转移等无关；
2. 免疫组化检测结直肠癌及癌旁组织阳性率分别为60.0%(18/30)和26.7%(8/30)，差异有统计学意义(χ2=6.79，P<0.01)，并且结直肠癌组织高表达HUNK与性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度等密切相关，与年龄、肿瘤大小和淋巴转移等无关；
3. 实时荧光定量PCR检测结直肠癌及癌旁组织HUNK mRNA表达情况，结果显示结直肠癌组织中HUNK mRNA表达水平较癌旁组织明显升高(P<0.05）。
【结论】
1. HUNK启动子区CpG岛在结直肠癌组织中呈低甲基化状态；
2. HUNK在结直肠癌组织中高表达，与肿瘤部分、分化程度、浸润深度等显著相关，可能成为结直肠癌患者筛查、预后判断的基础。
【关键词】
HUNK；结直肠癌；甲基化；免疫组化；实时荧光定量PCR
HUNK CpG island methylation in colorectal cancer tissues
and its clinical significance
ABSTRACT散热模组
【Objective】
To investigate the ratio of HUNK CpG island methylation in tumor tissues and adjacent tissues of the cancer in the patients with colorectal carcinoma and relationship with clinical pathological parameters.
【Methods】
The ratio of HUNK CpG island methylation was detected by pyrosequencing in 30 cases of colorectal carcinoma tumor tissues and adjacent tissues of the cancer; HUNK protein and mRNA expression was analyzed using immunohistochemistry and real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) respectively. The relationship among HUNK expression and clinicopathological parameters was analyzed.
【Results】
1.The mean ratio of HUNK CpG island methylation was significantly lower in patients with colorectal carcinoma(20.67±7.36) than in the healthy control(83.07±
2.71)（P<0.05). Low methylation ratio in colorectal cancer tissue was correlated with Patients' gender, tumor staging, tumor position and the depth of serosal invasion, but wasn’t correlated with patients' age, the size of tumor and the degree of lymph node metastasis;
2.The expression of HUNK was significantly higher in colorectal carcinoma tissues than cancer adjacent tissues as shown by immunohistochemistry (χ2=6.79, P<0.01). HUNK expression was correlated with Patients' gender, tumor staging, tumor position and the depth of serosal invasion, but wasn’t correlated with patients' age,the size of tumor and the degree of lymph node metastasis;
3.qRT-PCR results showed that the HUNK mRAN level of colorectal carcinoma tissues was significantly higher than that of cancer adjacent tissues (P=0.020). 【Conclusions】
1.There was high expression of HUNK in tumor tissues of the patients with colorectal carcinoma;
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