导电碳浆【摘要】 目的 建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法 样品经提取、薄层展开后，采用薄层谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365 nm，发射波长Em＝409 nm。结果 盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 3。黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。结论 该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。
【关键词】 黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定
Key words：Coptis chinensis Franch.；Xianglian Pills；fluorescence spectrophotometry；berberine hydrochloride；content determination
黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于消化道感染、泻痢等疾病。以黄连作原料的中成药香连丸气微
、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，原发性高血压、糖尿病等疾病。本试验采用薄层谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。
1 仪器与试药
烟道蝶阀 RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。
盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713-9906)；黄连(贵州，批号20060424；四川，批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连Coptis chinensis Franch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司，批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司，批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司，批号050428)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.473 mg/mL的对照品溶液。
取黄连药材粗粉约0.1 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95 mL，60 ℃水浴加热15 min，取出，超声处理30 min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，滤过，滤液作为黄连供试品溶液[1]。
精密称取香连丸约0.4 g，加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液，索式回流提取至无，提取液置水浴上蒸至约20 mL，定量转移至50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为香连丸供试品溶液[2]。
2.2 薄层分析条件[3]
用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板，取对照品溶液适量，点样后用氨水饱和30 min，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展距10 cm，晾干后置紫外光(365 nm)下检视，盐酸小檗碱呈黄绿荧光斑点(Rf＝0.40)。
2.3 荧光条件的确定
取对照品溶液，用荧光分光光度计扫描，结果显示，盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365 nm，最大发射波长Em＝409 nm。煤层注水器
取对照品溶液1 mL，分别加入不同体积的1 mol/L NaOH溶液，并用甲醇定容至2 mL，在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定其荧光强度。结果表明，随着NaOH量的增加，其荧光强度不断增大，当加入50 μL时荧光强度最大，此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50 μL。
2.4 线性关系考察
分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0 μL，间隔1.5 cm依次点于同一硅胶G板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2 mL容量瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50 μL，甲醇定容，摇匀，在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定荧光强度，以荧光强度为纵坐标，盐酸小檗碱含量为横坐标，得回归方程为：Y＝10.337X－1.897，r＝0.999 3，表明盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。
2.5 精密度试验
2.5.1 同板精密度
精密吸取对照品溶液10 μL，点于同一硅胶G板上，呈等距离的6个点，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝1.34%。
2.5.2 异板精密度
精密吸取对照品溶液10 μL，点于6个不同的硅胶G板上，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝2.55%。
2.6 稳定性试验
取同一份对照品洗脱液，每隔20 min测定一次荧光强度，连续测定7次，结果RSD＝1.50%，表明盐酸小檗碱在该条件下2 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验封边机青岛金鼎机械
太阳能沼气 取黄连(批号20060827)和香连丸(批号061001)各5份，按“2.1”项下方法提取，并按“2.4”项下方法测定，结果黄连中盐酸小檗碱平均含量为8.04%，RSD＝1.49%；香连丸中盐酸小檗碱平均含量为3.47%，RSD＝2.39%。表明本法重复性良好。
2.8 样品含量测定
精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10 μL，分别点于同一硅胶板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1.5 mL，振摇5 min，超声15 min， 3 000 r/min离心10 min，取上清液，置2 mL容量瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50 μL，甲醇定容，摇匀，测定其荧光强度，平行测定3次。结果见表1。表1 黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果(略)
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的黄连约0.1 g(批号20060827)及香连丸约0.4 g(批号061001)，各6份，分别加入适量的盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.1”及“2.4”项下方法操作，测定其含量，
计算回收率，结果见表2。表2 黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果(略)驱动链轮
3 讨论
本试验曾分别采用乙醇和盐酸-甲醇(1∶100)溶液对样品进行提取，结果发现，采用乙醇提取时，小檗碱提取率不佳，在本试验薄层展开条件下，难以达到理想的分离效果；而采用盐酸-甲醇(1∶100)溶液提取时，黄连及香连丸中小檗碱与盐酸反应形成生物碱盐，使其溶解度增加，提取较为完全，且在本试验薄层展开条件下能较好的分离，故选用盐酸-甲醇(1∶100)溶液作为提取溶剂。
目前，盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层谱法、紫外分光光度法、高效液相谱法等[4-5]，由于本试验样品成分复杂，干扰较大，采用薄层谱法、紫外分光光度法进行含量测定往往背景干扰大，重现性差；而高效液相谱法易造成谱柱的钝化。荧光分光光度法具有灵敏性高、选择性强、试验样品量少、设备简单的特点，适用于痕量成分的检测。本试验采取薄层谱-荧光分光光度法，可以减少盐酸小檗碱衍生物等成分的干扰，简便、有效、回收率高，适用于黄连和香连丸的质量控制。
【参考文献】
1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.213.
[2] 周华平，宋广聪，王仁英.薄层扫描法测定香连丸中盐酸小檗碱的含量[J].基层中药杂志，2000，14(5)：15－16.
[3] 杨广德，杨二库，王嗣岑.薄层谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量[J].西北药学杂志，2000，15(4)：159.
[4] 梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社，2004.115－118.
[5] 桑 媛，张冬海.黄柏胶囊中小檗碱含量的分光光度分析[J].中国药业， 2006，15(5)：50.
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