具有防治自闭症功效的肠菌组合物及其制备方法和其应用与流程

1.本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种具有防治自闭症功效的肠菌组合物及其制备方法和其应用。

背景技术：

2.肠道菌是人体肠道的正常微生物，人体肠道内寄生着10万亿个细菌，它们能影响体重和消化能力、抵御感染和自体免疫疾病的患病风险，还能控制人体对癌症药物的反应。一般情况下肠道菌与人体和外部环境保持着一个平衡状态，对人体的健康起着重要作用，但是这种平衡在某些情况下可被打破，形成肠道菌失调，表现为肠道菌在种类、数量、比例、定位和生物学特性上的变化。许多原因和疾病能引起肠道菌失调，引发疾病或者加重病情，从而更加促进菌失调，形成恶性循环，致使肠道疾病和许多疾病有关系，如胃肠道疾病(如难治性便秘、肠易激综合征、功能性腹泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病)、代谢性疾病(肥胖、高血脂、糖尿病)、神经系统疾病(如抑郁症、帕金森、阿尔茨海默症、自闭症)等。
3.自闭症患者合并有认知功能障碍、语言功能障碍、人际沟通障碍等病变，以致罹患者的社会生活适应存在显著困难且广泛性发展障碍(pervasive developmental disorder，pdd)。自闭症的发病与遗传、产伤、免疫系统异常、神经内分泌失调等因素相关。目前我国自闭症患病率跟世界上其他国家相似，大约为1％，患者数量已经超过1000万，目前自闭症的以教育干预为主，药物为辅，常规药物包括抗抑郁药物、抗精神类药物、情绪稳定剂、中枢兴奋剂等。
4.肠菌移植(fecal microbiota transplantation，fmt)是将健康人粪便中的功能菌移植到患者胃肠道内，为患者重建具有正常功能的肠道菌，用于防治患者肠道疾病、肠道外疾病及肠道菌紊乱导致疾病的有效手段。现有肠菌产品大多存在如下缺陷：(1)菌提取工艺易导致有效菌及其代谢产物的丢失，降低肠菌存活率；(2)菌质量及稳定性不佳，易导致服用患者胃肠胀气、腹部不适等不良反应。为此，开发用于更高效的肠菌组合物以满足未被满足的临床需求。

技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种具有防治自闭症功效的肠菌组合物，所述组合物的活菌数为(0.1-100)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(0.1-100)
×
108cfu/g，肠球菌(0.1-100)
×
106cfu/g，肠杆菌(0.1-100)
×
107cfu/g，乳酸菌(0.1-100)
×
108cfu/g和拟杆菌(0.1-100)
×
106cfu/g。
6.本发明的优选技术方案中，所述组合物的活菌数为(1-50)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(1-50)
×
108cfu/g，肠球菌(1-50)
×
106cfu/g，肠杆菌(1-50)
×
107cfu/g，乳酸菌(1-50)
×
108cfu/g和拟杆菌(1-50)
×
106cfu/g。
7.本发明的优选技术方案中，所述组合物的菌活性≥85％，优选≥90％，更优选≥
95％。
8.本发明的优选技术方案中，所述组合物在-80℃下储存3个月，肠菌存活率≥90％，优选肠菌存活率≥95％。
9.本发明的优选技术方案中，所述组合物在-80℃下储存6个月，肠菌存活率≥80％，优选肠菌存活率≥85％。
10.本发明的优选技术方案中，所述组合物选自冻干制剂、胶囊剂、片剂、微丸中的任一种。
11.本发明的优选技术方案中，所述组合物的菌制备包括下述步骤：在搅拌(800rpm-1500rpm)条件下，将粪便：冻干保护液按照质量体积比为1：1-5加料并搅拌混匀后，过滤，收集滤液，冻干，即得，其中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
12.本发明的优选技术方案中，所述粪便为新鲜粪便，优选为质量大于50g且布里斯托分级在3-5级的健康人粪便。
13.本发明的优选技术方案中，所述新鲜粪便提供者的年龄为6-24岁、体检合格的健康志愿者。
14.本发明的优选技术方案中，所述搅拌混合在厌氧条件下的搅拌混合。
15.本发明的优选技术方案中，所述粪便与冻干保护液的质量体积比为1：1-2。
16.本发明的优选技术方案中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
17.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由8％的海藻糖，1.5％的谷氨酸，0.3％的维生素c，1％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
18.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由9％的海藻糖，2％的谷氨酸，0.4％的维生素c，2％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
19.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由10％的海藻糖，2.5％的谷氨酸，0.5％的维生素c，3％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
20.本发明的优选技术方案中，所述搅拌速度为1000rpm-1200rpm。
21.本发明的优选技术方案中，所述过滤为逐级过滤，优选为不锈钢网的逐级过滤，其中，筛网直径逐级为2.35mm(8目)，1.18mm(16目)，0.25mm(60目)和0.09mm(170目)。
22.本发明的优选技术方案中，所述滤液置于-80℃下预冻24-48h后，再冻干。
23.本发明的优选技术方案中，所述冻干时间为20-30h，优选为26-29h。
24.本发明的优选技术方案中，所述冻干曲线为：-30℃，3h；-20℃，5h；-10℃,5h；0℃,5h；10℃,3h；20℃，3h；30℃，5h。
25.本发明的目的在于提供一种具有防治自闭症功效的肠菌组合物的制备方法，所述组合物的活菌数为(0.1-100)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(0.1-100)
×
108cfu/g，肠球菌(0.1-100)
×
106cfu/g，肠杆菌(0.1-100)
×
107cfu/g，乳酸菌(0.1-100)
×
108cfu/g和拟杆菌(0.1-100)
×
106cfu/g，包括下述步骤：在搅拌(800rpm-1500rpm)条件下，将粪便：冻干保护液按照质量体积比为1：1-5加料并搅拌混匀后，过滤，收集滤液，冻干，即得，其中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
26.本发明的优选技术方案中，所述组合物的活菌数为(1-50)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(1-50)
×
108cfu/g，肠球菌(1-50)
×
106cfu/g，肠杆菌(1-50)
×
107cfu/g，乳酸菌(1-50)
×
108cfu/g和拟杆菌(1-50)
×
106cfu/g。
27.本发明的优选技术方案中，所述组合物的菌活性≥85％，优选≥90％，更优选≥95％。
28.本发明的优选技术方案中，所述组合物在-80℃下储存3个月，肠菌存活率≥90％，优选肠菌存活率≥95％。
29.本发明的优选技术方案中，所述组合物在-80℃下储存6个月，肠菌存活率≥90％，优选肠菌存活率≥95％。
30.本发明的优选技术方案中，所述组合物选自冻干制剂、胶囊剂、片剂、微丸中的任一种。
31.本发明的优选技术方案中，所述粪便为新鲜粪便，优选为质量大于50g且布里斯托分级在3-5级的健康人粪便。
32.本发明的优选技术方案中，所述新鲜粪便提供者的年龄为6-24岁、体检合格的健康志愿者。
33.本发明的优选技术方案中，所述搅拌混合在厌氧条件下的搅拌混合。
34.本发明的优选技术方案中，所述粪便与冻干保护液的质量体积比为1：1-2。
35.本发明的优选技术方案中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
36.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由8％的海藻糖，1.5％的谷氨酸，0.3％的维生素c，1％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
37.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由9％的海藻糖，2％的谷氨酸，0.4％的维生素c，2％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
38.本发明的优选技术方案中，冻干保护液由10％的海藻糖，2.5％的谷氨酸，0.5％的维生素c，3％的甘氨酸和余量为生理盐水组成。
39.本发明的优选技术方案中，所述搅拌速度为1000rpm-1200rpm。
40.本发明的优选技术方案中，所述过滤为逐级过滤，优选为不锈钢网的逐级过滤，其中，筛网直径逐级为2.35mm(8目)，1.18mm(16目)，0.25mm(60目)和0.09mm(170目)。
41.本发明的优选技术方案中，所述滤液置于-80℃下预冻24-48h后，再冻干。
42.本发明的优选技术方案中，所述冻干时间为20-30h，优选为26-29h。
43.本发明的优选技术方案中，所述冻干曲线为：-30℃，3h；-20℃，5h；-10℃,5h；0℃,5h；10℃,3h；20℃，3h；30℃，5h。
44.本发明的另一目的在于提供本发明的肠菌组合物用于制备防治自闭症的制品中的应用。
45.本发明的另一目的在于提供本发明的肠菌组合物用于制备防治难治性便秘、肠易激综合征、功能性腹泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抑郁症、帕金森、阿尔茨海默症、减重、高血压、糖尿病的制品中的应用。
46.除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发
明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。
47.除非另有说明，本发明采用如下方法检测：
48.1.平板培养法检测不同细菌菌数：称取新鲜粪便1g或肠菌组合物0.1g，将其置于含有9ml生理盐水的试管中，搅拌，充分混匀后，再将其稀释为10-1
倍，再倍比稀释为10-2
、10-3
、10-4
、10-5
、10-6
倍。分别取各稀释度50μl待测品，将其分别接种于不同细菌的专性培养基平板上。接种完毕后，于37℃厌氧工作站内培养72h，观察结果并按平板活菌计数法进行计数。
49.2.流式细胞仪检测活菌数和菌活性：称取新鲜粪便1g或肠菌组合物0.1g，将其置于含有9ml生理盐水的试管中，搅拌，充分混匀后，将其稀释为10-1
倍，再倍比稀释至10-8
倍，50μm滤网过滤，除去大颗粒食物残渣，按照thermofisher公司细菌活性检测试剂盒(live/dead backlighttm bacterial viability kit)进行染后，流式细胞仪检测。
50.3.儿童自闭症评定量表(cars量表)：cars量表由人际关系、模仿(词和动作)、情感反应、躯体运用能力、对环境变化的适应性等15个维度组成。
51.表1 cars评分标准
52.序号类别评分(分)1严重异常42中度异常33轻度异常24与年龄相当1
53.表2 cars判定标准
54.序号cars总分(分)结果判定1≥30自闭症230＜cars总分＜36轻中度自闭症3≥36严重自闭症
55.4.自闭症行为量表(abc量表)：由krug于1978年编制，表中列出57项自闭症儿童的行为特征，包括感觉能力(s)、交往能力(r)、运动能力(b)、语言能力(l)和自我照顾能力(s)五个方面。要求评定者与儿童至少共同生活3-6周，填写者与儿童生活至少半年以上的教师。评分时，对每一项作“是”与“否”的判断。“是”评记“∨”符号，“否”不打号。
56.把“是”的项目合计累分，总分≥31分为自闭症筛查界限分；总分》53分作为自闭症诊断界限分。
57.5.社交反应量表(srs量表)：由constantino和gruber于2005年编制。由5个亚量表共65个项目组成：5个亚量表分别为社交知觉、社交认知、社交沟通、社交动机及自闭症行为方式。
58.srs的项目包括了dsm—iv诊断标准中的3个主要方面：社交互动障碍、社交交流障碍及刻板和狭隘的兴趣。
59.6.胃肠道症状评定量表(gsrs量表)：评价患者胃肠道症状，内容为过去一周是否有以下症状：上腹痛、胸部不适、反酸、饥饿痛、恶心、肠鸣音、腹胀、咽喉部不适、是否有口气、小便是否有异味、便秘、腹泻、大便稀、大便干结、有便意需立即排便、里急后重。
60.评分标准：完全没有1分，稍微有2分，少量有3分，中等程度4分，较明显不适5分，比较严重6分，特别严重7分。
61.7.alpha多样性指数之chao1指数：chao1指数是用来反映物种丰富度的指标。检测方法：使用genelute
tm
粪便dna分离试剂盒(dnb200)将样品中的dna提取出来，用超声波破碎仪随机打断成长度约为350bp的片段，经末端修复、3’端加a、加测序接头、纯化、片段选择、pcr扩增等步骤完成整个文库制备。文库构建完成后，先用电泳及nanodrop进行初步定量，对浓度》＝15ng/ul的文库进行qubit定量，用毛细管电泳对文库的插入片段大小进行检测，插入片段大小符合预期后，使用qpcr方法对文库的有效浓度进行准确定量(文库有效浓度＞3nm)，以保证文库上机质量。建库质检合格后，把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求混合后进行illumina hiseq测序。对测序下机数据进行生物信息分析得到alpha多样性指数之chao1指数。
62.与现有技术相比，本发明具有下述有益技术效果：
63.1、本发明科学筛选肠菌组合物的活菌数及菌组成，优化制备工艺及参数，制得组合物具有菌活性高、菌多样性丰富、稳定性好、肠菌存活率高、安全有效等优点，显著提高了肠菌移植的有效性，显著改善自闭症患者的肠道菌多样性、胃肠道症状和自闭症症状，疗效切确且安全有效，并具有防治及显著改善便秘、肠易激综合征、功能性腹泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抑郁症、帕金森、阿尔茨海默症、减重、高血压、糖尿病等病症效果。
64.2、本发明的肠菌组合物制备具有操作简便、显著缩短生产周期，显著降低生产成本，适合于大规模工业化生产等优点。
附图说明
65.图1初始粪便、实施例1制备得到的肠菌组合物在-80℃下分别储存0、3、6个月的肠菌存活率对比。
66.图2患者服用肠菌组合物前、第4周、第8周的gsrs量表分值变化。其中，**表示与服用胶囊前相比，p《0.01；*表示与服用胶囊前相比，p《0.05。
67.图3患者服用肠菌组合物前、第4周、第8周的cars量表分值变化。其中，**表示与服用胶囊前相比，p《0.01；*表示与服用胶囊前相比，p《0.05。
68.图4患者服用肠菌组合物前、第4周、第8周的srs量表分值变化。其中，**表示与服用胶囊前相比，p《0.01；*表示与服用胶囊前相比，p《0.05。
69.图5患者服用肠菌组合物前、第4周、第8周的abc量表分值变化。其中，**表示与服用胶囊前相比，p《0.01；*表示与服用胶囊前相比，p《0.05。
70.图6患者服用肠菌组合物前、第4周、第8周的chao1指数变化。其中，**表示与服用胶囊前相比，p《0.01；*表示与服用胶囊前相比，p《0.05。
具体实施方式
71.以下参照实施例说明本发明。但本发明不局限于实施例。
72.实施例的粪便分别来自于6-24岁之间不同的健康志愿者的布里斯托分级3-5级的新鲜粪便。实施例1健康志愿者为15岁男性，实施例2健康志愿者为16岁女性，实施例3健康志愿者为20岁男性，3名健康志愿者具有长期良好的生长发育状态、智力状态、饮食结构、睡
眠状态、日常活动、机体锻炼正常，且具有规律的排便习惯，体检合格，各项指标符合以下要求：
73.1.供体一般检查标准合格，即无遗传性疾病、胃肠道病变、恶性肿瘤家族史、内外科体格检查均为阴性、无疾病(如慢性病、肠易激综合征、炎性肠病、自身免疫性疾病)、血液学检测合格(血常规、肝肾功能、电解质和c反应蛋白正常)、粪便检测合格(粪便常规检查正常，隐血实验阴性，艰难梭菌、弯曲菌、沙门菌、志贺菌、产志贺毒素大肠杆菌及虫卵、囊泡、寄生虫、孢子、诺如病毒、轮状病毒等病原学检测阴性，多重耐药基因[碳青霉烯类耐药的肠杆菌科(cre)，产广谱β-内酰胺酶菌(esbl)和耐甲氧西林的金黄葡萄球菌(mrsa)等耐药菌]检测阴性)。
[0074]
2.粪便宏基因组检测评估合格，即未检出以下致病菌：弯曲杆菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、大肠杆菌o157:h7、小肠结肠炎耶尔森菌、艰难梭菌、弧菌、幽门螺杆菌；大肠杆菌丰度≤4.9％，副流感嗜血杆菌丰度≤0.2％，克雷伯肺炎杆菌丰度≤0.6％；未检出以下致病菌：嗜水气单胞菌、大肠弯曲杆菌、空肠弯曲杆菌、红嘴鸥弯曲杆菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、迟钝爱德华氏菌、艾伯特埃希氏菌、李斯特菌、产碱普罗威登斯菌、肠沙门氏菌、福氏志贺菌、宋内志贺郡、弧菌、拟态弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、血链球菌；多样性、疾病风险和物质代谢能力三种检测指标异常数≤1。
[0075]
实施例1肠菌组合物的制备
[0076]
肠菌组合物的制备，包括下述步骤：
[0077]
(1)在厌氧条件下，称取50g健康志愿者的新鲜粪便中加入225ml冻干保护液，在1000-1500rpm下搅拌混合2分钟，得到粪便浆液，其中，冻干保护液由8％的海藻糖，1.5％的谷氨酸，0.3％的维生素c，1％的甘氨酸和余量为生理盐水组成；
[0078]
(2)在厌氧条件下，将粪便浆体在1000-1500rpm下搅拌2-3分钟，逐级经过直径2.35mm(8目)、1.18mm(16目)、0.25mm(60目)，0.09mm(170目)不锈钢滤网过滤，收集滤液；
[0079]
(3)将滤液置于-80℃预冻24小时后，再将其冻干，其中，冻干曲线为：-30℃，3h；-20℃，5h；-10℃,5h；0℃,5h；10℃,3h；20℃，3h；30℃，5h，即得。
[0080]
经检测，肠菌组合物中的活菌数为3.21
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为2.31
×
108cfu/g，肠球菌6.11
×
106cfu/g，肠杆菌7.32
×
107cfu/g，乳酸菌7.48
×
108cfu/g，拟杆菌6.12
×
106cfu/g。
[0081]
实施例2肠菌组合物的制备
[0082]
(1)在厌氧条件下，称取100g健康志愿者的新鲜粪便中加入300ml冻干保护液，在1000-1500rpm下搅拌混合2分钟，得到粪便浆液，其中，冻干保护液由9％的海藻糖，2％的谷氨酸，0.4％的维生素c，2％的甘氨酸和余量为生理盐水组成；
[0083]
(2)在厌氧条件下，将粪便浆体在1000-1500rpm下搅拌2-3分钟，逐级经过直径2.35mm(8目)、1.18mm(16目)、0.25mm(60目)，0.09mm(170目)不锈钢滤网过滤，收集滤液；
[0084]
(3)将滤液置于-80℃预冻24小时后，再将其冻干，其中，冻干曲线为：-30℃，3h；-20℃，5h；-10℃,5h；0℃,5h；10℃,3h；20℃，3h；30℃，5h，即得。
[0085]
经检测，肠菌组合物中的活菌数为5.68
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为5.32
×
108cfu/g，肠球菌9.55
×
106cfu/g，肠杆菌9.98
×
107cfu/g，乳酸菌8.86
×
108cfu/g，拟杆菌9.35
×
106cfu/g。
[0086]
实施例3肠菌组合物的制备
[0087]
(1)在厌氧条件下，称取150g健康志愿者的新鲜粪便中加入370ml冻干保护液，在1000-1500rpm下搅拌混合2分钟，得到粪便浆液，其中，冻干保护液由10％的海藻糖，2.5％的谷氨酸，0.5％的维生素c，3％的甘氨酸和余量为生理盐水组成；
[0088]
(2)在厌氧条件下，将粪便浆体在1000-1500rpm下搅拌2-3分钟，逐级经过直径2.35mm(8目)、1.18mm(16目)、0.25mm(60目)，0.09mm(170目)不锈钢滤网过滤，收集滤液；
[0089]
(3)将滤液置于-80℃预冻24小时后，再将其冻干，其中，冻干曲线为：-30℃，3h；-20℃，5h；-10℃,5h；0℃,5h；10℃,3h；20℃，3h；30℃，5h，即得。
[0090]
经检测，肠菌组合物中的活菌数为4.56
×
10
12
cfu/g，双歧杆菌为1.59
×
109cfu/g，肠球菌2.98
×
107cfu/g，肠杆菌2.44
×
108cfu/g，乳酸菌9.97
×
108cfu/g，拟杆菌3.57
×
107cfu/g。
[0091]
试验例1本发明肠菌组合物的稳定性研究
[0092]
按照本发明的方法，检测初始粪便、实施例1的肠菌组合物、实施例1的肠菌组合物在-80℃条件下分别保存3个月和6个月的活菌数和肠菌存活率，结果见图1。肠菌存活率＝1g肠菌组合物中活菌数/1g初始粪便中活菌数
×
100％。
[0093]
试验例2本发明肠菌组合物防治自闭症患者的疗效研究
[0094]
选取同时患有便秘或腹泻症状的自闭症患者志愿者15名。
[0095]
1、纳入标准：
①
年龄4-12岁，性别不限。
②
有半年内经过标准的自闭症诊断观察量表(ados-2)评估明确诊断为孤独症谱系障碍的儿童；
③
无其他神经系统疾病，如癫痫、脑瘫、抽动障碍、染体或基因异常等；
④
入组前1个月内未服用过益生菌、免疫抑制剂、抗生素等，如果正在服用，建议停用1个月来评估；
⑤
受试者自愿并由监护人签署知情同意书，同意采集患者临床资料和外周血、尿液、粪便样本用于临床研究；
⑥
患者能自行吞服胶囊(3号胶囊)。
[0096]
2、排除标准：(1)继发性自闭症(有明确的病因，如代谢异常、基因病等)；(2)入组前1个月内服用过益生菌等生物制剂，免疫抑制剂、抗生素及其它补充剂；(3)发热(体温高于37.3℃)；(4)伴有严重的需要立即的胃肠道疾病，如肠梗阻、肠出血、肠穿孔等；(5)伴有严重的免疫缺陷病；(6)伴有严重的过敏史；(7)严重营养不良或体重过轻的患者；(8)正在进行特殊饮食者；(9)bmi大于同年龄、同性别儿童的90百分位；(10)其他研究者认为不适合入组的患者。
[0097]
3、方案：受试者分别在第1周的第1-6天、第5周的第1-6天，每天分早晚两次(4粒/此)共服用8粒含实施例1肠菌组合物的肠溶胶囊(规格为每粒3号明胶肠溶胶囊中含0.08g肠菌组合物)。常温纯净水送服，30分钟内服用完毕；服用前空腹4小时以上，服用完毕1小时后再进食。服用后，随访8周。
[0098]
采集患者服用胶囊前及服用胶囊后(第4周，第8周)的gsrs量表、cars评分量表、srs量表、abc量表分值、chao1指数结果见图2-6。结果表明，本发明的肠菌组合物显著改善自闭症患者的肠道菌多样性、胃肠道症状、自闭症症状，疗效切确且安全有效。
[0099]
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求保护的范围。

技术特征：

1.一种具有防治自闭症功效的肠菌组合物，其特征在于，所述组合物的活菌数为(0.1-100)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(0.1-100)
×
108cfu/g，肠球菌(0.1-100)
×
106cfu/g，肠杆菌(0.1-100)
×
107cfu/g，乳酸菌(0.1-100)
×
108cfu/g和拟杆菌(0.1-100)
×
106cfu/g。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的活菌数为(1-50)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(1-50)
×
108cfu/g，肠球菌(1-50)
×
106cfu/g，肠杆菌(1-50)
×
107cfu/g，乳酸菌(1-50)
×
108cfu/g和拟杆菌(1-50)
×
106cfu/g。3.如权利要求1-2任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的菌活性≥85％，优选≥90％，更优选≥95％。4.如权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物在-80℃下储存3个月，肠菌存活率≥90％，优选肠菌存活率≥95％。5.如权利要求1-4任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物在-80℃下储存6个月，肠菌存活率≥80％，优选肠菌存活率≥85％。6.如权利要求1-5任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的菌制备包括下述步骤：在搅拌(800rpm-1500rpm)条件下，将粪便：冻干保护液按照质量体积比为1：1-5加料并搅拌混匀后，过滤，收集滤液，冻干，即得，其中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。7.如权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于，所述粪便为新鲜粪便，优选为质量大于50g且布里斯托分级在3-5级的健康人粪便。8.如权利要求1-7任一项所述的具有防治自闭症功效的肠菌组合物的制备方法，所述组合物的活菌数为(0.1-100)
×
10
11
cfu/g，双歧杆菌为(0.1-100)
×
108cfu/g，肠球菌(0.1-100)
×
106cfu/g，肠杆菌(0.1-100)
×
107cfu/g，乳酸菌(0.1-100)
×
108cfu/g和拟杆菌(0.1-100)
×
106cfu/g，包括下述步骤：在搅拌(800rpm-1500rpm)条件下，将粪便：冻干保护液按照质量体积比为1：1-5加料并搅拌混匀后，过滤，收集滤液，冻干，即得，其中，所述冻干保护液由8-10％(w/w)的海藻糖、1.5-2.5％(w/w)的谷氨酸、0.3-0.5％(w/w)的维生素c、1-3％(w/w)的甘氨酸和余量为生理盐水组成。9.如权利要求1-7任一项所述的肠菌组合物或如权利要求8所述的制备方法制备得到的肠菌组合物用于制备防治自闭症的制品中的应用。10.如权利要求1-7任一项所述的肠菌组合物或如权利要求8所述的制备方法制备得到的肠菌组合物用于制备防治难治性便秘、肠易激综合征、功能性腹泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抑郁症、帕金森、阿尔茨海默症、减重、高血压、糖尿病的制品中的应用。

技术总结

本发明涉及一种具有防治自闭症功效的肠菌组合物，所述组合物中含有活菌数为(0.1-100)

技术研发人员：

张洵 孙龙 王秀呈

受保护的技术使用者：

东源益康（北京）医药科技有限公司

技术研发日：

2022.08.12

技术公布日：

2022/11/8