后台有同学在问看⽂献时遇到很多的标签蛋⽩，不知是啥。其实，在我们研究某个蛋⽩的功能的时候，我们期待能够定位它或研究蛋⽩相互作⽤，有⼀种⽅法就是将⼀个通过各种⽅法可以检测到的标签蛋⽩的基因和⽬标蛋⽩的基因进⾏重组融合，那产⽣的融合蛋⽩除了⽬标蛋⽩本⾝，同时会带上可检测的标签蛋⽩，这样⽬标蛋⽩也被⼀并检测到，今天我们⼀起来盘点那些标签蛋⽩。软件打包
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GST标签蛋⽩
GST(⾕胱⽢肽巯基转移酶) 标签蛋⽩本⾝是⼀个在解毒过程中起重要作⽤的转移酶，天然⼤⼩为26KD。应⽤于原核表达的原因有两个，⼀是因为它是⼀个⾼度可溶的蛋⽩，可以⽤来增加外源蛋⽩的可溶性；另⼀原因是它可以在⼤肠杆菌中⼤量表达，提⾼表达量。 GST融合表达系统⼴泛应⽤于各种融合蛋⽩的表达，可以在⼤肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋⽩在⾮变性条件下⽤10mM 还原型⾕胱⽢肽洗脱。
在⼤多数情况下，融合蛋⽩在⽔溶液中是可溶的，并形成⼆体。GST标签可⽤酶学分析或免疫分析很⽅便的检测。标签有助于保护重组蛋⽩免受胞外蛋⽩酶的降解并提⾼其稳定性。在⼤多数情况下GST融合
蛋⽩是完全或部分可溶的。
动力钳纯化：该表达系统表达的GST标签蛋⽩可直接从细菌裂解液中利⽤含有还原型⾕胱⽢肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进⾏纯化。GST标签蛋⽩可在温和、⾮变性条件下洗脱，因此保留了蛋⽩的抗原性和⽣物活性。GST在变性条件下会失去对⾕胱⽢肽树脂的结合能⼒，因此不能在纯化缓冲液中加⼊强变性剂如：盐酸胍或尿素等。
如果要去除GST融合部分，可⽤位点特异性蛋⽩酶切除。
检测：可⽤GST抗体或表达的⽬的蛋⽩特异性抗体检测。
♣His6标签蛋⽩
His6标签蛋⽩是六个组氨酸残基组成的融合标签，可插⼊在⽬的蛋⽩的C末端或N末端。当某⼀个标签的使⽤，⼀是能构成表位利于纯化和检测；⼆是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引⼒，可⽤于固定化⾦属螯合层析(IMAC)，对重组蛋⽩进⾏分离纯化。
His-tag有以下⼏个优点：
1.标签的分⼦量⼩，只有~0.84KD，⽽GST和蛋⽩A分别为~26KD和~30KD，⼀般不影响⽬标蛋⽩的功能；
2.His标签融合蛋⽩可以在⾮离⼦型表⾯活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏⽔性强的蛋⽩得到应⽤，后者在纯化包涵体蛋⽩时特别有⽤，⽤⾼浓度的变性剂溶解后通过⾦属螯和亲和层析去除杂蛋⽩，使复性不受其它蛋⽩的⼲扰，或进⾏⾦属螯和亲和层析复性；
3.His标签融合蛋⽩也被⽤于蛋⽩质-蛋⽩质、蛋⽩质-DNA相互作⽤研究；
4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋⽩直接注射动物进⾏免疫制备抗体；
多任务手势5.可应⽤于多种表达系统，纯化的条件温和；
6.可以和其它的亲和标签⼀起构建双亲和标签。
♣MBP标签
MBP（麦芽糖结合蛋⽩）标签蛋⽩⼤⼩为40kDa，由⼤肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋⽩的溶解性，尤其是真核蛋⽩。MBP标签可通过免疫分析很⽅便地检测。有必要⽤位点专⼀的蛋⽩酶切割标签。如果蛋⽩在细菌中表达，MBP可以融合在蛋⽩的N端或C端。
纯化：融合蛋⽩可通过交联淀粉亲和层析⼀步纯化。结合的融合蛋⽩可⽤10mM麦芽糖在⽣理缓冲液中进⾏洗脱。结合亲和⼒在微摩尔范围。⼀些融合蛋⽩在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合，⽽其他融合蛋⽩则不受影响。缓冲条件为pH7.0到8.5，盐浓度可⾼达1M，但不能使⽤变性剂。如果要去除MBP融合部分，可⽤位点特异性蛋⽩酶切除。
检测：可⽤MBP抗体或表达的⽬的蛋⽩特异性抗体检测。
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Flag标签
舞蹈把杆
Flag标签蛋⽩为编码8个氨基酸的亲⽔性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋⽩在真核表达系统中表达效率更⾼。
使⽤Flag标签的优点：
电子台历FLAG作为标签蛋⽩，其融合表达⽬的蛋⽩后具有以下优点：
1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与⽬的蛋⽩相互作⽤并且通常不会影响⽬的蛋⽩的功能、性质，这样就有利⽤研究⼈员对融合蛋⽩进⾏下游研究。
2.融合FLAG的⽬的蛋⽩，可以直接通过FLAG进⾏亲和层析，此层析为⾮变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋⽩，并且纯化效率⾼。
3.FLAG作为标签蛋⽩，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就⽅便通过Western Blot、ELISA等⽅法对含有FLAG的融合蛋⽩进⾏检测、鉴定。
4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从⽽得到特异的⽬的蛋⽩。因此现FLAG标签已⼴泛的应⽤于蛋⽩表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋⽩相互作⽤等相关领域。♣
SUMO标签
SUMO标签蛋⽩是⼀种⼩分⼦泛素样修饰蛋⽩（Small ubiquitin-likemodifier），是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的重要成员之⼀。
在⼀级结构上，SUMO与泛素只有18%的同源性，然⽽两者的三级结构及其⽣物学功能却⼗分相似。研究发现SUMO可以作为重组蛋⽩表达的融合标签和分⼦伴侣，不但可以进⼀步提⾼融合蛋⽩的表达量，且具有抗蛋⽩酶⽔解以及促进靶蛋⽩正确折叠，提⾼重组蛋⽩可溶性等功能。
此外SUMO还有⼀项重要的应⽤，就是可⽤于完整地切除标签蛋⽩，得到天然蛋⽩。因为SUMO蛋⽩⽔解酶能识别完整的SUMO标签蛋⽩序列，并能⾼效地把SUMO从融合蛋⽩上切割下来。切除SUMO后，经过亲和层析，去除标签蛋⽩部分，就得到和天然蛋⽩⼀样的重组蛋
⽩。所以SUMO标签也常⽤于和其他标签⼀起应⽤，作为特异酶切⽔解位点。
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彩防滑面层涂料HA标签
HA标签蛋⽩，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表⾯抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋⽩的空间结构影响⼩, 容易构建成标签蛋⽩融合到N端或者C端。易于⽤Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
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c-Myc标签
C-Myc标签蛋⽩，是⼀个含11个氨基酸的⼩标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋⽩质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应⽤在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可⽤于检测重组蛋⽩质在靶细胞中的表达。
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eGFP/eCFP/eYFP/mCherry
分别是增强型绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/单体红⾊荧光蛋⽩，具有不同的激发波长发射波长为，均由野⽣型荧光蛋⽩通过氨基酸突变和密码⼦优化⽽来。
就eGFP⽽⾔，相对于GFP，其荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋⽩在真核表达系统中表达效率更⾼。
mCherry是从DsRed演化来的性能最好的⼀个单体红⾊荧光蛋⽩，可以和GFP系列荧光蛋⽩共⽤，实现多⾊标记体内、外实验表明，mCherry在N端和C端融合外源蛋⽩时，荧光蛋⽩活性和被融合的⽬标蛋⽩功能相互没有明显影响。
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Avi Tag标签
AviTag标签蛋⽩是⼀个15个氨基酸的短肽，具有⼀个单⽣物素化赖氨酸位点，与已知天然可⽣物素化序列完全不同，可以加在⽬标蛋⽩的N端和C端。融合表达后，可被⽣物素连接酶⽣物素化，为了纯化重组蛋⽩选⽤低亲和性的单体抗⽣物素蛋⽩或抗⽣物素蛋⽩衍⽣物，除了⽤于蛋⽩质分离纯化，还⽤于蛋⽩质相互作⽤研究。
Avi Tag标签系统具有以下⼏⼤优点:
1.⽆论在体外或者体内，⼏乎所有的蛋⽩都可以在⼀个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被⽣物素化；
2.⽣物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和⽽且标记的专⼀性极⾼；
3.⽣物素AviTag只有15个氨基酸，对蛋⽩空间结构的影响⾮常⼩。
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