曾怡史梦琪杨欢何萍王有为杜俊蓉
【摘要】目的探讨除湿止痒软膏的抗炎及止痒作用。方法用2，4-二硝基氟苯（DNFB）腹部致敏和背
部反复激发建立BALB/c小鼠特应性皮炎模型。实验动物分为正常对照组（未致敏也未）、模型对照组（致敏 但未）、氢化可的松乳膏组（致敏+氢化可的松）、除湿止痒软膏组（致敏+除湿止痒软膏）。连续用药14d，末
次给药12h后取背部皮肤，测定皮肤厚度及质量，进行HE染和甲苯胺蓝染，ELIS A法检测皮损组织中干
扰素（IF N）γ、肿瘤坏死因子（TNF）α、白细胞介素（IL）-4、IL-5含量。利用磷酸组胺诱发Hartley豚鼠局部皮肤瘙
痒模型，观察除湿止痒软膏对豚鼠致痒阈的影响。结果用药后第15天，与模型对照组相比，氢化可的松乳
膏和除湿止痒软膏均可明显减少小鼠的背部皮肤厚度和质量（P <0.01），减少淋巴细胞和肥大细胞浸润（P <
0.01）以及降低皮损组织中IF N-γ、TNF-α、IL-4及IL-5水平（P <0.05或P <0.01）。与正常对照组相比，氢化可
的松乳膏组小鼠背部皮肤厚度和质量减小（P <0.01），除湿止痒软膏组无明显变化。此外，除湿止痒软膏也可显
著提高豚鼠耐受磷酸组胺的致痒阈（P <0.01）。结论除湿止痒软膏可明显抑制DNF B引起的小鼠特应性皮
炎，其抗炎机制可能与恢复体内Th1/Th2型细胞因子平衡有关。除湿止痒软膏可明显减轻磷酸组胺所致豚鼠皮
肤瘙痒反应。
【关键词】皮炎，特应性；抗炎药（中药）；止痒药；组胺；除湿止痒软膏
A nti鄄inflam mator y and antipruritic effects of Chu s h i zh i yang ointment Z en g Y i *, S hi M en g qi, Y an g Huan,
He Pin g, W an g Yo u w ei, D u Junr o n g. *D epart m ent of Phar m ac o l ogy, W est C hina S ch oo l of Phar m ac y, S ichuan
U ni v ersit y, C hen g du 610041, C hina
Co rresp o ndin g auth o rs:W an g Yo u w ei, E m ail:w an gyo u w ei2000@163.c om;D u Junr o n g, E m ail: dujr_1@163.c om 【A bstract】O bjective To explore the anti鄄inflamm atory and antipruritic effects of C hushi z hi y an g ointm ent in a
mouse m odel.Metho ds A total of40m ale8鄄week鄄old B ALB/c mice were included in this study,and randomly
and equally divided into4groups.A mouse m odel of atopic derm atitis（AD）was established in three groups of mice
by repeated application of2,4鄄dinitroflurobenzene（DNFB）to shaved abdominal skin for sensitization and to shaved
dorsal
skin for stim ulation.After establishm ent of the AD model,the three groups were topically treated with sodium chloride physiological solution（m odel group）,hydrocortisone cream（hydrocortisone group）and C hushi z hi y an g ointm ent
（C hushi z hi y an g group）respectively for14consecutive days.The rem aining group receiving no sensitization or treatm ent
served as the norm al control group.All the mice were sacrificed12hours after the final treatm ent,and the dorsal skin of
mice was resected followed by the determination of skin thickness and weight as well as hem atoxylin鄄eosin（HE）staining
and toluidine blue staining for the counting of leukocytes and m ast cells respectively.M oreover,enzym e鄄linked
imm unosorbent assay（ELIS A）was perform ed to m easure the levels of interferon鄄gamm a（IF N鄄γ）,tumor necrosis
factor alpha（TNF鄄α）,interleukin4（IL鄄4）and IL鄄5in dorsal skin lesions.In addition,a local skin
itching m odel was
induced by histamine phosphate in Hartley guinea pigs,which was used to explore the effect of C hushi z hi y an g ointm ent
on itch thresholds.Results Com pared with the model group,both the C hushi z hi y an g group and hydrocortisone group
showed reduced thickness and weight of dorsal skin in mice（all P <0.01）,num bers of infiltrating lymphocytes and
m ast cells
（all P <0.01）and levels of IF N鄄γ,TNF鄄α,IL鄄4and IL鄄5in skin lesions（P <0.05or0.01）on day15after the start
of
treatm ent.The thickness and weight of dorsal skin in mice were significantly decreased in the hydrocortisone group（P <
0.01）,but experienced no significant changes in the C hushi z hi y an g group com pared with the norm al control group. Additionally,C hushi z hi y an g ointm ent could significantly increase itch thresholds in guinea pigs induced by histamine
phosphate（P <0.01）.Conclusions C hushi z hi y an g ointm ent can significantly inhibit DNF B鄄induced AD in mice,likely
by restoring the balance between Th1and Th2type cytokines.Moreover,C hushi z hi y an g ointm ent could m arkedly relieve
itching induced by histamine phosphate in guinea pigs.
【Key words】Derm atitis,atopic;Anti鄄inflam m atory drugs（TCD）;Antipruritics;Histamine;C hushi z hi y an g
ointm ent
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DOI：10.3760/c m a.j.issn.0412-4030.2015.08.011
作者单位：610041成都，四川大学华西药学院药理系（曾怡、史梦琪、杨欢、何萍、杜俊蓉）；四川省医学科学院、四川省人民医院皮肤病性病研究所（王有为）
通信作者：王有为，Em ail：wangyou**************m；杜俊蓉，Em ail：dujr_1@163.c om
目前临床上特应性皮炎（a topic derma titis，AD）以外用糖皮质激素和口服抗组胺药为主，长期
使用不良反应明显。除湿止痒软膏由蛇床子、苦参、
黄连、黄柏、白鲜皮、虎杖、紫花地丁、地肤子、萹蓄、
茵陈、苍术、花椒、冰片十三味中药组成，有清热除湿、祛风止痒功效，临床上已用于湿疹［1-2］。本实
验通过2，4-二硝基氟苯（DNFB）诱导小鼠AD模型
和磷酸组胺诱发豚鼠局部瘙痒模型，评价除湿止痒
软膏的抗炎及止痒作用。
资料与方法
一、材料
1.实验动物：Hartley豚鼠24只，雌雄各半，体
重（222.6± 26.1）g，由成都彭县养殖场提供，合格证
号0007476。SPF级8周龄BALB/c雄鼠40只，体重（22.9± 1.5）g，由成都达硕生物科技有限公司提供，
合格证号0003282。
2.实验药品：除湿止痒软膏（规格0.777g生药/g 膏，成都明日制药有限公司，批号140803）；氢化可
的松乳膏（10g∶10mg，天津金耀药业有限公司，批
号12041337）；赛庚啶乳膏（10g∶50mg，湖南五洲
通药业有限责任公司，批号130630）；DNFB（成都存档文件
格雷西亚化学技术有限公司，批号D16877），溶于
丙酮橄榄油溶液（4∶1）中配成0.15%DNFB溶液；磷酸组胺（成都科龙化工试剂厂，批号201312）；Na2S·9H2O（成都市科龙化工试剂厂，批号20130844），
脱毛剂配方：8g Na2S·9H2O用温水60ml溶解后，加
入40ml75%乙醇配制而成。
3.主要试剂及设备：小鼠IL-5ELISA试剂盒（美
国RB公司），小鼠IL-4、小鼠IFN-γ、小鼠TNF-α ELISA试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）；Bra dford蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术
有限公司）；外径千分尺（青海量具刃具有限责任公司），全波长多功能酶标仪（美国T herm o Fishe r公司）。
二、小鼠AD模型实验［3-4］
1.实验分组及小鼠AD模型建立：将40只BALB/c小鼠按体重分为正常对照组、模型对照组、氢
化可的松乳膏组、除湿止痒软膏组，每组10只。实验
前1天均剃除并脱去小鼠腹部毛发，面积约2cm×
3cm；第1天，实验组小鼠均于腹部脱毛处外涂100μl 0.15%DNFB致敏，正常对照组外涂100μl丙酮橄
榄油溶液；第3天均剃除并脱去小鼠背部毛发，面
积约2cm× 3cm；第7天，实验组小鼠于背部脱毛处涂100μl0.15%DNFB激发，正常对照组外涂100μl
丙酮橄榄油溶液，每周激发2次，连续4周。共激发9次。
2.给药方案：造模成功24h后开始给药，给药时程为14d。除湿止痒软膏每天3次（9：00/15：00/ 21：00），每次0.04g；氢化可的松乳膏每天2次（9：00/ 21：00），每次0.04g；模型对照组和正常对照组同时
给予100μl生理氯化钠液，每天3次。用药第8天给予100μl0.15%DNFB进行第10次激发。
3.观察指标：末次给药12h后，小鼠断颈处死
并作以下处理：①选取小鼠背部皮肤3个不同固定部位，用8mm金属打孔器打孔，去除皮下脂肪组织后立即用外径千分尺测量厚度，分析天平称重；②背部皮肤标本制成10%组织匀浆，EL ISA法测定上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-5含量，以1g/L匀浆组织中细胞因子含量作为相对细胞因子含量［5］；③背部皮肤标本4%甲醛固定、石蜡包埋、切片，HE染和甲苯胺蓝染，高倍镜（× 400）下取10个HE染切片无重叠视野计数淋巴细胞，100倍镜下取5个甲苯胺蓝染切片无重叠视野计数肥大细胞。
三、局部瘙痒模型实验［6］
将24只Ha rtle y豚鼠按体重随机分为模型对照组、赛庚啶乳膏组、除湿止痒软膏组，每组8只。实验前
红兵打针1天将豚鼠右后足背剪毛并脱毛，面积约1cm× 1cm，并在脱毛处涂药1次，0.03g/只。实验当日将脱毛处皮肤用细砂纸轻轻擦伤，使之发红，但以不出血为度，再给药1次。10m in后开始在创面处滴0.01%磷酸组胺溶液，以后每隔3m in以0.02%、0.03%、0.04%……递增浓度，每次30μl，直至豚鼠回头舔右后足，以此时给予的磷酸组胺总量为致痒阈，比较各组致痒阈差异。
四、统计学方法
数据以x ± s表示，采用SPSS16.0软件进行随机区组设计资料的方差分析，方差齐时组间多重比较用LSD法，方差不齐时用Dunne tts T3法。P <0.05 为差异有统计学意义。
结果
一、药物对各组小鼠皮肤厚度及质量的影响用
药后第15天，氢化可的松乳膏组皮肤萎缩，
皮肤厚度和质量均减小，与正常对照组相比，差异
有统计学意义（P <0.01）。除湿止痒软膏组小鼠皮肤
质量和厚度均已恢复至正常，与正常对照组相比，
差异无统计学意义（P > 0.05）。见表 1。 二、
药物对各组小鼠皮肤组织结构的影响 小鼠 AD 模型建立后，背部皮肤出现增厚、红 斑、水肿、厚痂（图 1A ）。用药后第 7 天，模型对照组 部分痂皮脱落，有鳞屑、中度红斑及水肿（图 1B ）；氢 化可的松软膏组背部有轻度红斑，水肿消去（图 1C ）； 除湿止痒软膏组仍有轻度红斑及水肿，无明显痂皮
（图 1D ）。用药后第 15 天，模型对照组背部皮损程度 （图 1F ） 基本同第 7 天，HE 染 对照组 IFN -γ、TNF -α、IL -4、IL -5 水平均升高，差异 均有统计学意义（P < 0.01 或 P < 0.05）；氢化可的松
乳膏和除湿止痒软膏组 4 类细胞因子恢复正常，差 异无统计学意义（P > 0.05）。与模型对照组相比，氢 化可的松乳膏和除湿止痒软膏均可明显抑制这 4 类 细胞因子水平升高（P < 0.01 或 P < 0.05），且氢化可 的松 乳膏对 TNF -α 抑制 作用强于除 湿 止 痒 软 膏
（P < 0.05）。见表 2。
可见表皮突下延，表皮细胞 中度水肿，棘层、颗粒层肥厚， 表 1 用药后第 15 天对特应性皮炎小鼠皮肤质量及厚度、皮损淋巴细胞 及肥大细胞的影响（x ± s ）
角化过度伴角化不全；真皮层
组别
只数 皮肤质量 （mg ） 皮肤厚度 （mm ） 淋巴细胞 （个/m m 2） 肥大细胞 （个/m m 2） 大量炎症细胞浸润，以淋巴细
胞为主（图 2B ），可见肥大细胞。 氢化可的松乳膏组红斑水肿消 失，皮肤变薄皱缩（图 1G ），真皮 层细胞层数减少，与模型对照 正常对照组 10 模型对照组
10 氢化可的松乳膏组 10 除湿止痒软膏组 10
F 药物（P 值） F 区组（P 值）
23.04 ± 1.11
槐木可以做防腐木吗0.677 ± 0.025
128.3 ± 17.2
7.5 ± 0.6
后桥壳39.06 ± 1.90 a
1.073 ± 0.040
a
488.6 ± 43.8 a
42.9 ± 1.1 a
13.52 ± 0.44 a b
0.293 ± 0.011 a b 205.6 ± 11.4 a b 18.7 ± 2.5 a b 25.02 ± 1.25 b 0.748 ± 0.036 b 252.9 ± 13.7 a b 22.8 ± 2.5 a b 66.040（0.000） 108.189（0.000） 25.763（0.000） 50.808（0.000） 0.932（0.660） 0.845（0.626）
0.782（0.684） 1.580（0.160）
相比，淋巴细胞（图 2C ）和肥大 细胞浸润均减轻（P < 0.01）。除 湿止痒软膏组轻度红斑，水肿 消 失 ， 表 皮 增 厚 不 明 显 （图 注：组间多重比较，a ：与正常对照组相比，P < 0.01；b
：
与模型对照组相比，P < 0.01
表 2 用药后第 15 天对特应性皮炎小鼠组织匀浆 相对细胞因子含
量的影响（x ± s ） ng/L
组别
只数 干扰素 γ 肿瘤坏死因子 α 白细胞介素 4 白细胞介素 5
1H ），与模型对照相比，真皮层
淋巴细胞（图 2D ）和肥大细胞 浸润均减轻（P < 0.01）。淋巴细 胞和肥大细胞计数结果见表 1。
制卡三、药物对各组小鼠皮损 正常对照组
10
模型对照组
10 氢化可的松乳膏组 10 除湿止痒软膏组 10
F 药物（P 值） F 区组（P 值）
22.98 ± 3.39 332.03 ± 52.59 44.48 ± 5.86 10.58 ± 1.58
57.22 ± 9.09 a 617.25 ± 48.45 b 77.62 ± 5.96 b
14.84 ± 1.12 a 17.26 ± 2.38 c 255.48 ± 64.65 c 38.40 ± 10.74 d 8.03 ± 1.01 c 25.96 ± 2.68 d 415.11 ± 49.01 d e 52.05 ± 2.09 c 9.77 ± 0.58 c 6.470（0.003） 6.899（0.002） 4.741（0.007） 5.599（0.003） 0.806（0.655）
0.911（0.589）
0.560（0.885） 1.052（0.430）
组织匀浆细胞因子水平的影响
与正常对照组相比，模型
注：a ：与正常对照组相比，P < 0.05；b ：与正常对照组相比，P < 0.01；c
：与模型对照组相比， P < 0.01；d ：与模型对照组相比，P < 0.05；e ：与氢化可的松乳膏相比，
P < 0.05
图 1 小鼠特应性皮炎模型皮损及用药后第 7、15 天各组小鼠皮损情况 1A ：建模后小鼠背部出现增厚、潮红、水肿、厚痂；1B ：模型对照
组第 7 天痂皮脱落，有鳞屑，中度红斑及水肿；1C ：氢化可的松乳膏组第 7 天小鼠背部有轻度红斑，水肿消去；1D ：除湿止痒软膏组第 7 天仍有 轻度红斑及水肿，无明显痂皮；1E ：正常对照组第
15 天；1F ：模型对照组第 15 天背部皮损程度基本同第 7 天；1G ：氢化可的松乳膏组第 15 天 红斑水肿消失，皮肤变薄皱缩；1H ：除湿止痒软膏组第 15 天轻度红斑，水肿消失，表皮增厚不明显 图 2 用药后第 15 天各组小鼠皮损 HE 染（× 100） 2A ：正常对照组；2B ：模型对照组表皮增厚明显，大量炎症细胞浸润；2C ：氢化可的松乳膏组炎症细胞浸润减少；2D ：除湿止痒软 膏组炎症细胞浸润减少
表 3 除湿止痒软膏对磷酸组胺所致豚鼠
瘙痒反应的影响（x ± s ）
不同的原因之一，其具体机制有待进一步探讨。 瘙
痒是各类皮炎湿疹的一个重要特征，也是影 组别
只数 模型对照组 8
赛庚啶乳膏组 8 除湿止痒软膏组 8
F 药物（P 值） 致痒阈（μg ） 涂抹次数 21.3 ± 6.5 2.9 ± 0.5 134.3 ± 50.6
a
7.5 ± 1.4 a
201.3 ± 44.2 b
9.8 ± 1.3 b
4.895（0.022） 7.820（0.004） 响患者生活质量的关键所在。组胺是最早发现的瘙 痒介质之一。在小鼠 AD 模型中，除湿止痒软膏可减
少皮损组织肥大细胞浸润，提示该药还可能抑制组 胺释放。因此，本实验建立外源性磷酸组胺诱发豚 F 区组（P 值）
0.374（0.931）
0.379（0.929）
注：与模型对照组相比，：P < 0.05；：P < 0.01
四、药物对磷酸组胺诱发豚鼠局部瘙痒的影响 与模型对照组相比，除湿止痒软膏和赛庚啶乳 膏均可明显提高豚鼠耐受磷酸组胺的致痒阈 （P < 0.01 或 P < 0.05）。见表 3。
讨
论
中医认为 AD 是先天禀性不耐而素体热耐；或 后天脾失健运或营血不足，复感风湿热邪，风燥湿 热郁结于肌肤而发病［7］。近年来，T h1/Th2 失衡学说 成为该病发病机制研究热点。一般认为急性阶段以 Th2 型免疫反应为主，细胞因子如 IL -4、IL -5 表达 增加，随着病程发展，逐渐转以 T h1 型免疫反应为 主，且搔抓可诱导这一过程的转化［8-9］。抗原种类，接 触剂量、频率、剂量和途径等均可影响 T h1/T h2 平衡 偏倚方向［10］。本研究建立的小鼠 AD 模型具有潮红、 结痂和鳞屑、肥厚、苔藓化、浸润等特点，被认为处 于亚急性阶段。AD 模型对照组皮损组织 IFN -γ、 TNF -α、IL -4、IL -5 水平均增加，呈现 T h1、T h2 混合 型变态反应，与已有文献［4］结果一致。有文献［2］报道， 该模型细胞因子表达呈 T h2 优势型，我们认为可能 与本实验中使用的 DNFB 激发剂量更大有关。用药 后第 15 天后，除湿止痒软膏和氢化可的松乳膏均可 明显减轻小鼠的皮肤水肿和炎症细胞浸润，不同程 度恢复皮损组织中上述 4 类细胞因子水平，提示其 抗炎作用可能与纠正 T h1/T h2 平衡相关。与氢化可 的松乳膏不同的是，除湿止痒软膏并未引起皮肤萎 缩，且对 TNF -α 抑制作用弱于氢化可的松乳膏。对
鼠局部瘙痒模型，结果证实除湿止痒软膏确可显著 抑制磷酸组胺所致豚鼠皮肤的局部瘙痒。 本文结
果表明，除湿止痒软膏对 DNFB 诱导小 鼠 AD 模型及磷酸组胺诱导豚鼠局部瘙痒模型具有 良好的作用，值得进一步分析其抗炎止痒有效 成分、考察量效关系，进而优化配方及开发新剂型， 以发挥更大的临床应用价值。
声明 本研究由成都明日制药有限公司资助
参 考 文 献
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TNF -α 抑制作用的差异可能是两种药物强度
本刊 2016 年重点号征稿启事
（收稿日期：2015鄄02鄄12）
（本文编辑：吴晓初）
·读者·作者·编者·
2016 年《中华皮肤科杂志》初步计划组织免疫性皮肤病重点号（第 1 期），银屑病重点号（第 4 期），性传播疾病重点号（第 5期），真菌病专刊（第 8 期），设述评、专家论坛、专家笔谈、指南与共识、论著、综述、病例报告、来信、临床病例诊治经验及讨论等流量交换
栏目，特向全国各医院皮肤性病科及相关学科临床及科研人员征稿，各栏目文稿要求见本刊稿约。欢迎投稿。
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