分类号：R739.41 密级：一般
U D C：616.006.484 编号：2009211902
广州医学院
MPEP阻断代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5）对人胶质瘤细胞U251增殖的影响及机制的研究 学位申请人：赵冬青
导师：陆永建教授
申请学位级别：医学硕士年级：二零零九级
学科专业：神经外科学研究方向：脑肿瘤与脑血管病
论文提交日期：2012年5月论文答辩日期：2012年5月
学位类型：临床医学专业学位学位授予单位：广州医学院
答辩委员会主席：
评议人：
2012年5月
广州医学院
硕士学位论文
MPEP阻断代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5）对人胶质瘤细胞U251增殖的影响及机制的研究
Study on effects of blocking mGluR5 by MPEP on proliferation of U251 cells and the underlying mec
hanisms乙酰氨基阿维菌素
专业名称：脑肿瘤与脑血管病
学位申请人：赵冬青卷帘纱窗
硅胶分条机
导师组：陆永建教授
袁忠民副教授
广州医学院
2012年5月
目录
摘要 (1)
英文摘要 (2)
前言 (3)
材料与方法 (7)
结果 (15)
讨论 (23)
结论 (25)
本课题的研究意义及展望 (25)
参考文献 (25)
综述 (32)
缩略词 (38)
致谢 (39)
学位论文原创性声明 (40)
学位论文知识产权权属声明 (41)
关于学位论文使用授权的说明 (41)
摘要
目的：通过观察代谢型谷氨酸受体5亚型（metabotropic glutamate receptor 5 subtype, mGluR5）的特异性拮抗剂2-methyl-6-(phenylethynyl)-pyridine(MPEP)对人胶质瘤细胞U251的影响探讨mGluR5对U251细胞增殖的影响并对其相关机制进行分析。
方法：噻唑蓝比法（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）检测100μM MPEP作用48小时对U251细胞增殖的影响。Western blot检测5μM、10μM、20μM、50μM、100μM MPEP作用24小时对U251细胞表达P-c-Jun 及P-JNK的影响及100μM MPEP分别作用4小时、8小时、12小时、24小时对U251细胞表达P-c-Jun及P-JNK的影响。MTT法检测20μM JNK的特异性拮抗剂SP600125及400MOI c-Jun负显性病毒Δ169作用48小时对U251细胞活力的影响。 结果：MTT检测结果显示，100μM MPEP作用48小时，能显著抑制U251细胞的增殖，p＜0.001。Western blot检测结果显示5μM、10μM、20μM、50μM、100μM MPEP 作用24小时均可显著抑制U251细胞P-c-Jun及P-JNK的表达，p＜0.05，并且随着浓度增加其抑制作用逐渐增强，p＜0.05。100μM MPEP作用4小时、8小时、12小时、24小时均可明显抑制U251细胞P-c-Jun及P-JNK的表达，p＜0.05，并且在24小时内随着时间延长其抑制作用逐渐增强，p＜0.05。MTT检测结果显示，20μM 功夫杯
SP600125、400MOI Ad-Δ169作用48小时，均能显著抑制U251细胞的增殖，p＜0.001。
柿子削皮机结论：MPEP特异性阻断mGluR5可抑制胶质瘤U251细胞的增殖，其机制可能是通过抑制JNK通路中后磷酸化c-Jun及磷酸化JNK的表达实现的，而且MPEP对磷酸化c-Jun及磷酸化JNK表达水平的抑制具有浓度依赖性及时间依赖性。
草坪卷关键词胶质瘤；U251；mGluR5；JNK；c-Jun；增殖
Abstract
Objective The purpose of our study was to discuss the effects of metabotropic glutamate receptor 5 subtype (mGluR5) on proliferation of U251 cells and the underlying mechanisms.
Methods We detected the effects of 100μM MPEP on U251 cells for 48h by method of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). In the same way, we detected the effects of 20μM SP600125 (antagonist to JNK) and 400MOI adenovirusesΔ169 (negatively dominant virus of c-Jun) for 48h on U251 cells. Besides, we examined expressions of P-c-Jun and P-JNK of U251 cells with different concentrations of MPEP (10μM, 50μM, 100μM and 150μM) for 24h and that with 100μM MPEP for 4h, 8h, 12h and 24h separately.
Results MTT results of U251 cells with 100μM MPEP for 48h was significantly lower than their control groups, p＜0.001. The grey levels tested by Western blot of expressions of P-c-Jun and P-JNK in U251 cells with 5μM、10μM、20μM、50μM、100μM MPEP for 24h were significantly lower than that in normal controls, p＜0.05, and moreover, it became more lower with time, p＜0.05. Besides, the grey levels of expressions of P-c-Jun and P-JNK in U251 cells with 100μM MPEP for 4h, 8h, 12h and 24h se parately were significantly lower than that in normal controls, p＜0.05, and the trend became more obvious over time, p＜0.05. MTT results of U251 cells with separately 20μM SP600125 or 400MOI Ad-Δ169 for 48h were significantly lower than their control group s, p＜0.001.
Conclusions Blocking mGluR5 by MPEP could significantly inhibit proliferation of U251 cells and this trend might be relevant to expressions of P-c-Jun and P-JNK in JNK pathway. The influence of MPEP on inhibiting expressions of P-c-Jun and P-JNK was concentration-dependent and time-dependent.
Key words glioma; U251; mGluR5; JNK; c-Jun; proliferation
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