导读:就爱阅读网友为您分享以下“酵母菌的分离纯化实验方案”资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!
酵母菌的分离纯化
实验目的
2. 无菌操作技术;
3. 工业微生物的分离与纯化技术;
4. 工业微生物的检测及保藏。
基本原理
1、 培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生
物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH的要求选择合适的PH。
1
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、 接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、 把特定微生物从混杂的微生物体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有:稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、 微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法(CFU)、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材
仪器设备
恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器
2
皿
烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片
试剂与材料
苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染液
其它
纱布、滤纸
实验内容及操作步骤
(一)、样品的选择
酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
(二)、样品的处理
制备苹果悬液
1. 首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。
2. 激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。
3. 用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。
4. 再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取
三次并混匀。
5. 同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀
3
释度的苹果悬液。
(三)、培养基的制备与灭菌
1、培养基的选择:选择麦芽汁为培养基培养酵母菌
2、麦芽汁琼脂培养基的制备
取新鲜麦芽汁200mL在65?水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水 约400mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121?灭菌30min。培养皿采用干热灭菌(蒸汽灭菌锅) 生理盐水
称取氯化钠0.43g，加入50ml水，装入100ml小锥形瓶中，灭菌备用。
3、 分装
已过滤灭菌的培养基应进行分装。因要制作平板和斜面培养基，所以需将培养基分装于培养皿和试管中。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或培养皿，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或培养皿口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和培养皿的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3,4毫升
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议