过氧化氢（H 2O 2）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC3590规格：50T/48S 产品内容： 试剂一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入6mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体12mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体60mL×1瓶，4℃保存； 标准品：液体1mL×1支，4℃保存。1mmol/mL H 2O 2标准液产品说明：
H 2O 2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD 和XOD 等催化产生，由CAT 和POD 等催化降解。H 2O 2
不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H 2O 2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H 2O 2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 H 2O 2与硫酸钛生成黄的过氧化钛复合物，在415nm 有特征吸收。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比皿、丙酮、浓盐酸、研钵和冰。操作步骤：一、H 2O 2提取：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、组织样品的制备
称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上待测。3、血清（浆）样品
按照每100μL 血清（浆）加入0.9mL 试剂一的比例充分混匀。注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。二、测定步骤和加样表
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。
3、用丙酮将1mmol/mL 标准液稀释为1μmol/mL 的标准溶液。
4、在EP 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL）
测定管
标准管
对照管
样本
吸取的量为全部上清液
1umol/mL 标准溶液
1000
试剂一1000试剂二100100100试剂三
200
200
200
4000g，常温离心10min，弃上清，留沉淀
试剂四
1000
1000
1000
加入试剂四溶解沉淀（可用丙酮清洗3-5次先洗去植物素），室温静置5min，倒入比皿中，415nm 处，蒸馏水调零，记录测定管吸光度。对照管只需做一次即可。计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管，∆A 标准=A 标准管-A 对照管。三、H 2O 2含量计算：
1、按照细菌、细胞个数计算：
细菌或细胞中H 2O 2含量（μmol/104细菌或细胞）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(500×V 样本÷
V 提取)=0.002×∆A 测定÷∆A 标准。2、按组织鲜重计算：
组织中H 2O 2含量（μmol/g 鲜重）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W)
=∆A 测定÷∆A 标准÷W。
3、按照蛋白浓度计算：
H 2O 2含量（μmol/mg prot）＝∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷（Cpr×V 样本）
=∆A 测定÷∆A 标准÷Cpr。
4、按血清（浆）体积计算：
血清（浆）中H 2O 2含量（μmol/mL）＝∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷V 血清（浆）
=10×∆A 测定÷∆A 标准。
500：细胞/细菌个数，以万计；C 标液：H 2O 2标准溶液浓度，1μmol/mL；V 样本：加入的样本体积，1mL；W：组织鲜重，g；V 提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；V 血清（浆）：所用血清（浆）体积，0.1mL。
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