过氧化氢（H 2O 2）含量检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC3595规格：100T/96S 产品内容：
试剂一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存； 标准品：液体1mL×1支，4℃保存，1mmol/mL H 2O 2标准液。产品说明：
H 2O 2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD 和XOD 等催化产生，由CAT 和POD 等催化降解。H 2O 2
不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H 2O 2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H 2O 2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 H 2O 2与硫酸钛生成黄的过氧化钛复合物，在415nm 有特征吸收。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵和冰。操作步骤：一、H 2O 2提取：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：
称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。3、血清（浆）样品：按照每100μL 血清（浆）加入0.9mL 试剂一的比例充分混匀；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。二、测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。
3、如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL 标准液稀释为2μmol /mL 的标准溶液，用微量玻璃比则用丙
酮将1mmol/mL 标准液稀释为1μmol /mL 的标准溶液。4、在EP 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL）
测定管标准管
对照管
样本250
标准溶液250
试剂一250试剂二252525试剂三
50
50
50
4000g，常温离心10min，弃上清，留沉淀
试剂四
250
250
250
加入试剂四溶解沉淀后（可先用丙酮清洗3-5次来洗去植物素），室温静置5min，取200μL 转移至微量玻璃比皿或96孔板中测定415nm 处吸光值。对照管只要做一次即可。计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管，∆A 标准=A 标准管-A 对照管。三、H 2O 2含量计算：
1、按照细菌、细胞数量计算：
H 2O 2含量（μmol/104
cell）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(500×V 样本÷V 提取)
=0.004×∆A 测定÷∆A 标准。
2、按组织鲜重计算：
H 2O 2含量（μmol/g 鲜重）=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W)
=2×∆A 测定÷∆A 标准÷W。
3、按照蛋白浓度计算：
H 2O 2含量（μmol/mg prot）＝∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×V 样本÷（Cpr×V 样本）
=2×∆A 测定÷∆A 标准÷Cpr。
4、按血清（浆）体积计算：
H 2O 2含量(μmol/mL)=∆A 测定÷（∆A 标准÷C 标液）×10
=20×∆A 测定÷∆A 标准。
500：细胞或细菌总数，万个；C 标液：H 2O 2标准溶液浓度，2μmol/mL；V 样本：加入的样本体积，
0.25mL；W：组织鲜重，g；V 提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；10：血清稀释倍数，[0.1mL 血清（浆）+0.9mL 试剂一]÷0.1mL 血清（浆）=10。
注意：如果用微量玻璃比皿（光径d=1cm）将1mmol/mL 标准液稀释为1μmol /mL 的标准溶液。计算公式亦作改变。
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