一种具有开胃健脾功效的中药组合物的质量检测方法

本发明涉及中药领域，特别是涉及一种具有开胃健脾功效的口服制剂的质量标准及检测方法。

现代人生活节奏快、压力大，饮食不规律，导致胃痛、腹胀、食欲减退，嗳气恶心等各种肠胃不适，中医多称之为“脾胃不和”。脾胃不和是一种常见病和多发病。据《素问·逆调论》记载“胃不和则卧不安”，可见脾胃不和将会严重影响人们的生活。大量临床研究表明，中医药脾胃不和有很好的疗效。

本申请人于2004年申请的发明名称为《一种脾胃不和、可开胃健脾的药物》、专利号为200410022869.2的中国专利发明，其处方来源于《中国人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第七册收录的开胃理脾丸。开胃理脾丸检测方法执行的是国家卫生局颁布的标准号为WS3－B－1284－93的质量标准，该标准中所用检测方法主要对产品的形状、鉴别及其他丸剂的常规项进行了检查，鉴别项仅针对药材粉末进行了显微鉴别，对白术进行了薄层谱鉴别。该标准专属性不强，鉴别品种较少，且无含量测定项，难以准确反映产品的质量，已不能适应中药现代化发展的技术要求及产品质量稳定可控的要求。本发明可进一步完善开胃理脾口服药物的质量标准研究，以保证产品的疗效、质量及安全。

本发明的目的旨在提供中国发明专利200410022869.2所述的发明即一种开胃理脾口服制剂的质量标准及其检测方法。本发明检测方法采用先进的谱分析技术，有效控制其活性指标成分，建立产品的质量标准。该检测方法稳定性好，精密度高，专属性强，能准确控制所述发明口服制剂的质量，为其有效性、安全性和质量可控性提供有力保障。

本发明所述的一种具有开胃理脾功效的口服制剂的制法是通过以下步骤实现的：

按开胃理脾丸的比例分别称取各组分，将陈皮切成条状、木香切成薄片，加水蒸气蒸馏法提取芳香水，过滤，滤液备用。党参、茯苓等九味加水煎煮多次，过滤，合并滤液并浓缩，加入乙醇静置沉降24小时。取上清液，沉淀部分滤过，合并上清液与滤液，减压回收乙醇至无醇味，冷藏滤过。取芳香水及适量药液搅拌均匀，加入适量适宜的药用辅料，混匀，混合物冷藏后滤过，制成口服溶液；或将药液浓缩成干浸膏研磨成细粉，加入芳香油及药用辅料制成口服固体制剂。

本发明提供了一种具了开胃健脾功效的中药组合物的质量检测方法，该方法包括以下步骤：

1、鉴别

采用薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，在供试品谱中，应具有党参、甘草、陈皮和木香的斑点特征。具体步骤如下：

取本发明具有开胃健脾功效的口服液20ml或口服固体制剂研磨后4g，用石油醚、乙醚或正己烷振摇提取2～4次，每次20ml，水层用水饱和正丁醇振摇提取，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，作为供试品溶液；

A、党参鉴别：另取党参对照药材2g，用水40ml加热回流2小时，冷却，滤过，取滤液，用石油醚、乙醚或正己烷20ml振摇提取，水层同法制成对照药材溶液；吸取党参对照溶液及供试品溶液各2μl，照薄层谱法，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点；

B、甘草鉴别：取甘草对照药材1g，用石油醚、乙醚或正己烷40ml加热回流1小时，滤渣加甲醇30ml加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，加水洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液；取对照药材溶液及供试品溶液各10μl；照薄层谱法，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上显相同颜的荧光斑点；

C、陈皮鉴别：取橙皮苷对照品，用甲醇制成饱和溶液作为对照品溶液；取橙皮苷对照品溶液及供试品溶液各10μl；照薄层谱法，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品谱中，在与对照品谱相应位置上显相同颜的荧光斑点；

D、木香鉴别：取本发明具有开胃健脾功效的口服液20ml，用石油醚适量振摇提取，分取提取液，蒸干，残渣用乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；取木香对照药材0.2g，加石油醚适量静置，再超声处理，滤过，取滤液作为对照药材溶液；照薄层谱法，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚-乙酸乙酯（8.5∶1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显示相同的蓝紫主斑点；

在所述鉴别项下的供试品溶液所使用的提取溶剂优选石油醚，提取温度控制在60℃～90℃。

在所述鉴别项下的党参鉴别中对照品所使用的提取溶剂优选石油醚，提取温度控制在60℃～90℃。

在所述鉴别项下的甘草鉴别中对照品所使用的提取溶剂优选乙醚，乙醚用量为40ml。

在所述鉴别项下的木香鉴别中供试品溶液和对照品溶液所使用的提取溶剂石油醚优选用量为10ml，提取温度为30℃～60℃。

在所述鉴别项下的木香鉴别所使用的展开剂石油醚温度优选为60℃～90℃。

2、含量测定

（2）含量测定

采用高效液相谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D），测定本发明中药组合物口服液中芍药的芍药苷成分，具体步骤如下：

谱条件与系统适用性试验：谱柱使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86），检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：精密量取本发明具有开胃健脾功效的口服液10ml或口服固体制剂研磨后2g置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定方法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得；

本品每1ml含白芍以芍药苷计，不得少于0.30mg。

开胃理脾口服制剂中组分较多，本发明为更准确鉴别党参，前处理中使用温度范围在60～90℃内的石油醚以便除去口服制剂中的干扰物质，弃去有机相后，水相用饱和正丁醇提取，蒸干正丁醇后的残渣加甲醇溶解，再使用常规鉴别方法鉴别党参，最后得到的图谱显清晰。

另根据木香有效成分性质，使用温度范围在30～60℃内的石油醚提取木香中的有效成分，再以温度范围在60～90℃内的石油醚和乙酸乙酯以一定比例为展开剂鉴别木香，得到的图谱杂质干扰小，清晰准确。

与原有技术相比，本发明所述的检测方法完善了开胃理脾口服制剂的质量标准，在原有技术的鉴别项加入了党参、甘草、陈皮和木香的薄层谱检测；对开胃理脾口服制剂进行了含量测定，通过高效液相谱检测开胃理脾口服制剂中白芍苷的含量，规范并完善了原有质量标准。

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。但下述的实施例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

图1为木香薄层谱图。

图中：1、开胃理脾口服液样品1；2、缺木香阴性样品；3、木香对照药材；4、开胃理脾口服液样品2；5、开胃理脾口服液样品3。

图2为开胃理脾口服液芍药苷对照品谱图

图3为开胃理脾口服液白芍阴性样品谱图

图4为开胃理脾口服液供试品谱图

下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的权利范围以权利要求书为准。

经反复试验，该质量标准专属性强、重复性好、准确度高，适合作为开胃理脾口服制剂的质量标准。

以上所述实施例仅仅是本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，所属领域技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

 本发明的典型但非限制性的实施例如下。

实施例1：开胃理脾口服液

党参的定性鉴别：

对照品溶液制备：取党参对照药材2g，用40ml水加热回流2小时，冷却，滤过，取滤液，用石油醚（60~90℃）20ml振摇提取1次，水层用水饱和正丁醇液振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，即得。

供试品溶液制备：取本品20ml，用石油醚（60~90℃）振摇提取3次，每次20ml，水层用水饱和正丁醇液振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，即得。

 照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ  B）试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇～冰醋酸～水（7∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

甘草的定性鉴别：

对照品溶液制备：取甘草对照药材1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，即得。

供试品溶液制备：取本品20ml，用石油醚（60~90℃）振摇提取3次，每次20ml，水层用水饱和正丁醇液振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，即得。

照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ  B）试验，吸收上述对照药材溶液及供试品溶液各10μl，分别点于同一用1%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯～甲酸～冰醋酸～水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上显相同颜的荧光斑点。

陈皮的定性鉴别：

对照品溶液制备：取橙皮苷对照品，用甲醇制成饱和溶液作为对照品溶液。

供试品溶液制备：取本品20ml，用石油醚（60~90℃）振摇提取3次，每次20ml，水层用水饱和正丁醇液振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，即得。

照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ  B）试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各10μl，分别点于同一用0.5%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯～甲醇～水（100∶17∶13）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯～乙酸乙酯～甲酸～水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照品谱相应位置上显相同颜的荧光斑点。

木香的定性鉴别：

对照品制备：取木香对照药材0.2g，加石油醚（30~60℃）10ml静置10分钟，再超声处理5分钟，滤过，取滤液，即得。

供试品制备：取本品20ml，用10ml石油醚（30~60℃）振摇提取，分取石油醚液，蒸干，残渣用乙酸乙酯1ml使溶解，即得。

照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ  B）试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚（60~90℃）～乙酸乙酯（8.5∶1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显示相同的蓝紫主斑点。

芍药的定量检测：

谱条件与系统适用性试验：使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈～0.1%磷酸溶液（14：86）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

线性关系考察：

精密称取芍药苷对照品10.25mg置50ml容量瓶中，用50%甲醇适量使溶解，并用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0ml分别置10ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取各溶液10μl注入高效液相谱仪测定，记录峰面积。结果表明：芍药苷在102.5～2050ng的质量范围内与峰面积有良好的线性关系。线性方程为：y=1368.1x～8506.9；R2=0.9998。

精密度试验：

供试品溶液的制备：精密量取本品样品溶液10ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

      取按供试品溶液的制备方法制得的一份样品溶液，连续6次分别取10μl注入液相谱仪测定，记录峰面积。检测RSD值为0.60%，显示仪器精密度较好。

稳定性试验：

供试品溶液的制备：精密量取本品样品溶液10ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

取同一批按供试品制备方法制得样品溶液，分别于0、2、4、8、12、14h，各取样10μl注入液相谱仪测定，记录峰面积。检测RSD值为0.67%，显示本品溶液在14h内能够基本保持稳定，稳定性好。

重复性试验：

供试品溶液的制备：精密量取本品样品溶液10ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

取同一批样品，按供试品溶液的制备方法制得6份供试品溶液，分别取10μl，注入液相谱仪检测测定，记录峰面积。检测RSD值为0.70%，显示本检测方法重复性好。

准确度试验：

对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加50%甲醇制成每1ml约含60.08μg/ml的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品5.0ml，共6份，分别置50ml量瓶中，按相应比例加入芍药苷对照品后，再加入水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的维膜滤过，取续滤液，即得。

取上述溶液10μl注入液相谱仪，记录峰面积，计算回收率。检测本品回收率在95%～105%之间，RSD值为1.70%。显示本测定方法有较好的加样回收率。

样品的测定：

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取三批本品10ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，检测到以上三批样品含量均在0.30mg/ml以上。