靶向白介素-34的化合物和方法与流程

1r. structure 20, 676
–
687, 和felix j, de munck s, verstraete k, meuris l, callewaert n, elegheert j. 等人)。人类和小鼠il-34多肽公开于例如美国专利号9,770,486中。il-34是人类中242个氨基酸(seq id no: 41)和小鼠中235个氨基酸(seq id no: 42)的蛋白。
5.已在本领域中描述了抗il-34抗体，且例如wo 2016/196679记载各种抗il-34抗体和其潜在用途。然而，迄今为止，尚未批准靶向il-34的抗体用于用途。
6.因此，仍存在对替代和/或改进的抗il-34抗体、其药物组合物和使用其用于与涉及il-34的免疫介导的疾病和/或可用抗il-34抗体的疾病(诸如神经炎性病症和/或阿尔兹海默氏病)相关的应用和/或诊断应用的方法的尚未满足的需求。此外，鉴于以下至少一种或多种特性，仍存在对替代和/或改进的抗il-34抗体的尚未满足的需求，所述替代和/或改进的抗il-34抗体具有优于现有技术抗il-34抗体的特别有利特性的组合：1)期望的缔合和解离速率，2)中和人类il-34以实现抗神经炎性应答和体内效力的功效，3)作为用于和/或预防免疫介导的病症和/或炎性病症的单药疗法足够有效；4)持续作用时间；5)足够有限地诱导不期望的细胞因子释放，6)可接受地低的免疫原性(即，人类中的足够非免疫原性)；7)避免不想要的免疫减弱；和/或8)期望的体内稳定性、物理和化学稳定性，包括但不限于热稳定性、溶解性、低自缔合和药代动力学特征，所述特征对于开发和/或用于炎性或神经炎性病症(例如ad)是可接受的。
7.发明概述：本发明的实施方案提供了新型抗人类il-34和抗鼠il-34抗体。根据一些实施方案，本发明提供了抗体，其包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含互补决定区(cdr) lcdr1、lcdr2和lcdr3，且所述hcvr包含cdr hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述lcdr1、lcdr2和lcdr3以及hcdr1、hcdr2和hcdr3选自表1中提供的cdr组合。本文使用的序列标识符列于表1中，且所述序列提供于本文提供的氨基酸和核苷酸序列列表中。
8.表 1： 氨基酸和核苷酸序列
。
9.因此，本发明的实施方案还提供了包含选自以下的lcvr和hcvr的抗体：a. 具有seq id no:4的氨基酸序列的lcvr和具有seq id no:3的氨基酸序列的hcvr；b. 具有seq id no:4的氨基酸序列的lcvr和具有seq id no:14的氨基酸序列的hcvr；c. 具有seq id no:22的氨基酸序列的lcvr和具有seq id no:21的氨基酸序列的hcvr。
10.根据其他实施方案，本发明还提供了包含如以上在a-c中所述的lcvr和hcvr与选自seq id no:51和seq id no: 52的铰链区和fc区的组合的抗体。
11.根据其他实施方案，本发明还提供了包含lc和hc的抗体，所述lc和hc选自或具有与以下氨基酸序列具有至少95%同源性的氨基酸序列：a. 具有seq id no:2的氨基酸序列的lc和具有seq id no:1的氨基酸序列的hc；b. 具有seq id no:2的氨基酸序列的lc和具有seq id no:13的氨基酸序列的hc；和c. 具有seq id no:20的氨基酸序列的lc和具有seq id no:19的氨基酸序列的hc。
12.如本文所用，“抗体1”是指一种抗体，其具有seq id no:5的hcdr1氨基酸序列、seq id no:6的hcdr2氨基酸序列、seq id no:7的hcdr3氨基酸序列、seq id no:8的lcdr1氨基酸序列、seq id no:9的lcdr2氨基酸序列、seq id no:10的lcdr3氨基酸序列、seq id no:3的hcvr氨基酸序列、seq id no:4的lcvr氨基酸序列、seq id no:1的hc氨基酸序列、seq id no:2的lc氨基酸序列、seq id no:11的hc dna序列和seq id no:12的lc dna序列。除非另有指明，否则使用与north等人，j. mol. biol. 2011:406:228-256的方法一致的注释规则，对本文阐述其序列的各抗体中的框架和cdr序列进行注释。
13.如本文所用，“抗体2”是指一种抗体，其具有seq id no:15的hcdr1氨基酸序列、seq id no:16的hcdr2氨基酸序列、seq id no:17的hcdr3氨基酸序列、seq id no:8的lcdr1氨基酸序列、seq id no:9的lcdr2氨基酸序列、seq id no:10的lcdr3氨基酸序列、seq id no:14的hcvr氨基酸序列、seq id no:4的lcvr氨基酸序列、seq id no:13的hc氨基酸序列、seq id no:2的lc氨基酸序列、seq id no:18的hc dna序列和seq id no:12的lc dna序列。 除非另有指明，否则使用与north等人，j. mol. biol. 2011:406:228-256的方法一致的注释规则，对本文阐述其序列的各抗体中的框架和cdr序列进行注释。
14.如本文所用，“抗体3”是指一种抗体，其具有seq id no:23的hcdr1氨基酸序列、seq id no:24的hcdr2氨基酸序列、seq id no:25的hcdr3氨基酸序列、seq id no:26的lcdr1氨基酸序列、seq id no:27的lcdr2氨基酸序列、seq id no:28的lcdr3氨基酸序列、seq id no:21的hcvr氨基酸序列、seq id no:22的lcvr氨基酸序列、seq id no:19的hc氨基酸序列、seq id no:20的lc氨基酸序列、seq id no:29的hc dna序列和seq id no:30的lc dna序列。 除非另有指明，否则使用与north等人，j. mol. biol. 2011:406:228-256的方法一致的注释规则，对本文阐述其序列的各抗体中的框架和cdr序列进行注释。
15.各hc的羧基末端部分限定主要负责效应子功能的恒定区，并且在本发明的一些实施方案中，所述抗体具有各hc的恒定区中减少效应子功能的一种或多种修饰。优选地，本发明的实施方案为igg4抗体，且因此含有igg4 fc区或从人类igg4衍生的fc区，例如修饰的igg4fc区。
16.根据一些实施方案，将两条hc的恒定区中减少效应子功能的修饰和氨基酸取代引入igg4铰链区和fc区中。因此，一些实施方案具有在两条hc的恒定区中的修饰，所述两条hc在两个残基230和231处均包括氨基酸丙氨酸(分别在抗体1的hc、抗体2的hc和seq id no: 52中例举)和在两条hc的恒定区中的促进稳定性的进一步修饰，包括在残基224处的氨基酸脯氨酸(在抗体1的hc、抗体2的hc和例如seq id no: 51中例举)、和残基443处氨基酸赖氨酸的缺失(在seq id no.1的hc中例举)。
17.据信，本发明的抗体具有优于现有技术抗il-34抗体的特别有利特性的组合，包括但不限于以下特性中的一种或多种：1)期望的缔合和解离速率，2)中和人类il-34以实现抗神经炎性应答和体内效力的功效，3)作为用于和/或预防免疫介导的病症和/或炎性病症的单药疗法足够有效；4)持续作用时间；5)足够有限地诱导不期望的细胞因子释放，6)可接受地低的免疫原性(即，人类中的足够非免疫原性)；7)避免不想要的免疫减弱；和/或8)期望的体内稳定性、物理和化学稳定性，包括但不限于热稳定性、溶解性、低自缔合和药代动力学特征，所述特征对于开发和/或用于炎性或神经炎性病症(例如ad)是可接受的。
18.本发明的实施方案使用如本文描述的实施方案中提供的药理学上有利的抗人类il-34抗体通过经由il-34中和提供可用于预防、下调或改善炎性和/或神经炎性相关病症的组合物和方法来提供优于现有技术的显著进步。本发明的抗人类il-34抗体能够改善免疫和/或炎性病理，或恢复免疫稳态，优选地，通过抑制免疫应答的先天组，和/或废除小神经胶质细胞增生或其他单核细胞/巨噬细胞谱系细胞活化和/或增殖，由此直接改变根本性疾病病理。临床上使用此类抗体可导致所疾病的持久长期改善。
19.此外，需要诊断性抗人类il-34抗体，其对人类il-34有特异性，且具有改善的结合亲和力，且表明在人类il-34测定中的增强的敏感性、和改善的酶联免疫吸附测定(elisa)
测定条件，其导致最小干扰和宽稀释线性。根据本发明的一些方面，提供抗人类il-34抗体，包括人类il-34中和抗体，其结合seq id no: 41所示的人类il-34。白介素34 (il-34；也称为未表征的蛋白c16orf77)被分泌为由39 kda单体组成的同源二聚体。其不属于已知细胞因子家族。人类il-34被合成为含有20 aa信号序列的242个氨基酸(aa)前体，且导致222 aa成熟链。如本文所用，il-34是指成熟链。成熟链含有n-连接糖基化的一个潜在位点。人类il-34在氨基酸水平上与小鼠il-34具有71%同一性。il-34在各种组织(包括心脏、脑、肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、小肠、前列腺和结肠)中表达，并在脾脏中丰度最高。除非另有说明，否则“h il-34”或“人类il-34”在本文中关于il-34多肽使用时是指野生型人类il-34，且优选具有seq id no: 41中所示的氨基酸序列，其为移除前导序列的成熟il-34。(参见，例如lin等人, science (2008) vol. 320, issue 5877, pp. 807-811)。
20.一种示例性人类il-34 (包含20 aa信号肽序列，将其移除以产生成熟多肽)为：(seq id no: 41，参见ncbi参考序列号np_689669.2，2018年3月1日)。
21.根据本发明的一些方面，提供了抗鼠il-34抗体(包括鼠il-34中和抗体)，其结合以seq id no.42提供的人类il-34。一种示例性鼠il-34 (包含20 aa信号肽序列，将其移除以产生成熟多肽)为：(seq id no: 42，参见ncbi参考序列号np_00l l28572.l，2018年3月1日)。
22.如本文所用，“人类抗il34抗体”或“抗人类il-34抗体”是指结合人类il-34的抗体，并在体外或体内施用时，导致il-34活性中和和/或阻断应答，诸如至少一种显著降低的期望活性，例如il-34信号传导的期望的降低，如通过il-34反应性分子或细胞终点变化所证明。例如，cns中的小神经胶质细胞数目、密度或表型是il-34反应性分子或细胞效应的一个实例。如本文所用，术语“信号传导”和“信号转导”和“il-34介导的”在其关于il-34时是指由于il-34的活性所导致的细胞和/或细胞间应答。
23.如本文所用的术语“抗体”是指结合抗原的免疫球蛋白分子。抗体的实施方案包括单克隆抗体、多克隆抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或缀合抗体。所述抗体可以是任何类型(例如igg、ige、igm、igd、iga)和任何亚类(例如igg1、igg2、igg3、igg4)的。一种示例性抗体是免疫球蛋白g (igg)型抗体，其由四条多肽链构成：两条重链(hc)和两条轻链(lc)，其经由链间二硫键交联。lc被归类为κ或λ，其各自特征在于特定恒定区。本发明的实
施方案可包含igg1或igg4抗体，且进一步包含κ轻链或λ轻链。优选地，本发明的抗体包含为κ恒定区的轻链恒定区。
24.hc被归类为γ、μ、α、δ或ε，并将抗体的同种型分别定义为igg、igm、iga、igd或ige。四条多肽链中各自的氨基末端部分包含主要负责抗原识别的约100至125个或更多个氨基酸的可变区。四个多肽链中各者的羧基末端部分包括主要负责效应子功能的恒定区。每条重链包含重链可变区(vh)和重链恒定区。重链的恒定区包含ch1、ch2和ch3结构域。ch1紧随hcvr；所述ch1和hcvr形成抗原结合(fab)片段的重链部分，所述片段为结合抗原的抗体的一部分。ch2紧随铰链区并在ch3之前。ch3紧随ch2并在重链的羧基末端处。轻链的恒定区含有一个结构域cl。cl紧随lcvr之后；所述cl和lcvr形成fab的轻链部分。
25.本发明的抗体包括igg hc，其可进一步分为亚类，例如igg1、igg2、igg3、igg4，且本发明的实施方案可包括每条hc的恒定区中的一个或多个修饰，例如其增强或减少效应子功能。如本文所用的术语“fc区”是指抗体的区域，其包含抗体重链的ch2和ch3域。任选地，fc区可包括抗体重链的铰链区的一部分或整个铰链区。已知igg1诱导抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)和补体依赖性细胞毒性(cdc)，且本文描述的fc突变可减少聚集，减少或增强adcc或cdc活性(或其他功能)，和/或修饰抗体的药物动力学。本文描述的抗人类il-34抗体的实施方案具有减少的对fcγr和c1q受体的结合，由此减少或消除可由具有野生型igg fc区的抗体诱导的细胞毒性。因此，根据一些实施方案，在fc区中在如本文所述的位置处引入突变。患者安全性可以用充分降低或消除的包含修饰的fc区的此类抗人类il-34抗体的效应子功能来改善，且与本文描述的其他特性组合，提供具有改善的可用活性概况的剂，同时避免不期望的活性。
26.当在某些生物系统中表达时，抗体在fc区中进行糖基化。通常，糖基化发生在抗体的fc区中高度保守的n-糖基化位点处。n-聚糖通常附接至天冬酰胺。抗体同样可在其他位置处进行糖基化。本发明的抗体是单克隆抗体。单克隆抗体是衍生自单一拷贝或克隆的抗体，包括例如任何真核、原核或噬菌体克隆，且不受其产生方法的限定。单克隆抗体可例如通过杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、合成技术(例如cdr-移植)或本领域中已知的此类或其他技术的组合来产生。本发明涵盖为人类或人源化抗体的本发明的抗体。在单克隆抗体的背景下，术语“人类”和“人源化”是本领域技术人员众所周知的(weiner lj, j. immunother. 2006; 29: 1-9; mallbris l, 等人, j. clin. aesthet. dermatol. 2016; 9: 13-15)。本发明的抗体的示例性实施方案还包括抗体片段或抗原结合片段，其包含保留与抗原特异性相互作用的能力的抗体的至少一部分(诸如fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、scfv抗体片段、二硫键连接的fv (sdfv)、fd片段和线性抗体)。
27.每条lc和hc的氨基末端部分包括约100-120个氨基酸的可变区，其主要负责经由其中含有的cdr的抗原识别。 vh和vl区域可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其散布有更保守的区域，称为框架区(fr)。cdr暴露于蛋白的表面上并且是抗体的抗原结合特异性的重要区域。每个vh和vl均由三个cdr和四个fr构成，从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列： fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。 在本文中，重链的三个cdr被称为“hcdr1、hcdr2和hcdr3”，且轻链的三个cdr被称为“lcdr1、lcdr2和lcdr3”。 所述cdr含有与抗原形成特异性相互作用的大部分残基。抗体结合特定抗原的功能能力在很大程度上受六个cdr影响。将氨基酸残基分配给cdr可根据众所周知方案、包括描述于以下中的那些来进
行：kabat (kabat等人,
ꢀ“
sequences of proteins of immunological interest,
”ꢀ
national institutes of health, bethesda, md. (1991))，chothia (chothia等人,
ꢀ“
canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”, journal of molecular biology, 196, 901-917 (1987); al-lazikani等人,
ꢀ“
standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”, journal of molecular biology, 273, 927-948 (1997))，north (north等人,
ꢀ“
a new clustering of antibody cdr loop conformations”, journal of molecular biology, 406, 228-256 (2011))或imgt (在www.imgt.org可得的国际immunogenetics数据库；参见lefranc等人, nucleic acids res. 1999; 27:209-212)。
28.出于本发明的目的，且除了另作说明之处之外，north cdr定义用于本文描述的抗il-34抗体，并将氨基酸分配至lcvr和hcvr区域内的cdr结构域。以下是基于north定义的抗体1的cdr序列的表格。技术人员也可应用kabat、chothia和/或imgt的替代定义，以根据本发明的抗体(包括表1中的抗体1-3)的那些惯例指定cdr。
29.本发明的抗体实施方案具有几种药理学上有用且重要的活性的组合，并在一个方面能够以高亲和力结合人类il-34，并对人类il-34具有高特异性、以及其他有用特性。除非另有指示，否则如本文所用的术语“结合(bind)”和“结合(binds)”欲指蛋白或分子与另一蛋白或分子形成有吸引力的相互作用的能力，所述相互作用导致两个蛋白或分子的接近性，如通过本领域中已知的常用方法确定。除非另有指示，否则如本文关于抗il-34抗体对人类il-34的亲和力使用的短语“特异性结合”欲指优选小于约1 x 10-11 m，甚至更优选约1 x 10-11 m至约1 x 10-12 m的kd，如通过本领域中已知的常用方法来测定，包括通过使用spr生物传感器和/或msd，基本上如本文所述。短语“特异性结合”也指示与其他抗原相比抗il-34抗体对人类il-34的相对亲和力，其中对人类il-34的亲和力导致人类il-34的特异性识别。
30.本发明的抗体实施方案可通过本领域中已知的多种技术从包含本发明实施方案的序列的构建体表达和产生。如本文可互换使用的术语“核酸”或“多核苷酸”是指核苷酸的聚合物，包括单链和/或双链含核苷酸分子，诸如dna、cdna和rna分子，并入天然核苷酸、修饰的核苷酸和/或核苷酸的类似物。本公开的多核苷酸也可包括例如通过dna或rna聚合酶或合成反应并入其中的底物。本发明的dna分子是包含编码具有本发明的抗体中的至少一个多肽(例如重链、轻链、可变重链和可变轻链)的氨基酸序列的多肽的非天然存在的多核苷酸序列的dna分子。
31.编码hcvr或lcvr区的分离的dna可通过将各自的hcvr或lcvr编码dna可操作地连接至另一编码重链或轻链恒定区的dna分子以分别形成重链或轻链而转化为全长重链基
因。人类的序列以及其他哺乳动物重链恒定区基因是本领域中已知的。涵盖这些区域的dna片段可例如通过标准pcr扩增来获得。
32.本发明的多核苷酸可在宿主细胞中在所述序列已可操作连接至表达控制序列之后得以表达。表达载体通常可作为附加体(episome)或作为宿主染体dna的整合部分在宿主生物中复制。通常，表达载体将含有选择标记，例如四环素、新霉素和二氢叶酸还原酶，以允许检测用期望的dna序列转化的那些细胞。含有目标多核苷酸序列(例如编码抗体的多肽的多核苷酸和表达控制序列)的载体可通过众所周知方法转移至宿主细胞中，所述方法根据细胞宿主的类型而变化。
33.本发明的抗体可容易地在哺乳动物细胞中产生，其非限制性实例包括cho、ns0、hek293或cos细胞。使用本领域中众所周知的技术来培养宿主细胞。抗体的哺乳动物表达通常导致糖基化。抗体的糖基化通常是n-连接或o-连接的。n-连接糖基化是指碳水化合物部分附接至天冬酰胺残基的侧链。o-连接糖基化是指将糖(例如n-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖)附接至羟基氨基酸。通常，糖基化发生在抗体的fc区中高度保守的n-糖基化位点(例如根据imgt或eu索引编号，igg1中的位置297)处。糖基化位点可进行修饰以改变糖基化(例如阻断或减少糖基化或改变氨基酸序列以产生另外或不同糖基化)。
34.来自igg亚类的抗体的哺乳动物表达可导致c-末端氨基酸自从一条或两条重链的剪割；例如，igg1抗体可移除一或两个c-末端氨基酸。对于igg1抗体，如果存在c-末端赖氨酸，则其可在表达期间从重链截短或切掉。另外，倒数第二个甘氨酸同样可从重链截短或切掉。
35.抗体的哺乳动物表达也可以导致n-末端氨基酸的修饰。例如，在重链或轻链的最n-末端氨基酸是谷氨酰胺的情况下，其可以被修饰为焦谷氨酸。
36.本发明的抗体或包含其的药物组合物可通过肠胃外途径施用，其非限制性实例是皮下施用和静脉内施用。可以将本发明的抗体与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂以单一或多个剂量施用于患者。本发明的药物组合物可通过本领域中众所周知的方法来制备(例如remington: the science and practice of pharmacy，第22版(2012)，a. loyd等人，pharmaceutical press)且包含如本文所公开的抗体和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
37.本发明的抗体实施方案的用途：根据一些实施方案，本发明的抗il-34抗体可用于免疫介导的疾病。如本文所用，术语“免疫介导的疾病”或“炎性疾病或病症”可互换使用且是指由于不适当或过度免疫应答而引起的不期望的病况，其中il-34抑制导致更多稳态且更少的病理应答。术语“免疫介导的疾病”或“炎性病症”意欲包括此类病况，无论其是由小神经胶质细胞或巨噬细胞细胞免疫应答、或类似组织驻留细胞类型的那些(诸如组织细胞、库普弗(kupffer)细胞、肺泡巨噬细胞、肠道巨噬细胞、巨噬细胞样滑膜细胞或朗格汉斯(langerhans)细胞)介导。考虑通过本文描述的本发明抗体的示例性疾病包括阿尔兹海默氏病；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra)；炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld)。
38.在一些更具体实施方案中，所述免疫介导的疾病是阿尔兹海默氏病(ad)。 根据本发明的其他实施方案，所述抗il-34抗体可用于免疫介导的疾病的诊断应用。 在一些实施
pg/ml的范围，和/或如技术人员针对适当的参考组和样品来源所确定。在进一步实施方案中，所述免疫介导的疾病是以下之一：ad；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra)；炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld)。
47.在一个实施方案中，本发明提供了测定体液中人类il-34水平的方法，其包括： (a)使所述体液与特异性结合由如seq id no:41中的氨基酸序列组成的人类il-34的抗人类il-34诊断性单克隆抗体或其抗原结合片段接触，所述抗体或其抗原结合片段包含： 轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其分别包含氨基酸序列(seq id no:8)、(seq id no:9)和(seq id no:10)，以及重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包含氨基酸序列(seq id no:15)、(seq id no:16)和(seq id no:17)；(b)任选地，除去任何非特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段；和(c)检测和/或定量特异性结合人类il-34的单克隆抗体或其抗原结合片段的量。 优选地，其中所述体液为血液、血清或血浆或脑脊髓液，且所述接触离体发生。
48.tau蛋白病包括但不限于阿尔兹海默氏病(ad)、皮克氏病(pick’s disease；pid)、进行性核上性麻痹(psp)、皮层基底节变性(cbd)、嗜银颗粒病、唐氏综合征(down’s syndrome)、慢性创伤性脑病(cte)、创伤性脑损伤(tbi)、额颞叶痴呆伴随与染体17连锁的帕金森氏症(ftdp-17)、关岛的帕金森氏症-痴呆综合征、c型尼曼匹克症(niemann-pick disease type c)、肌强直性营养不良(参见li, c., g
ö
tz, j. tau-based therapies in neurodegeneration: opportunities and challenges. nat rev drug discov 16, 863
–
883 (2017))。
49.在本发明的实施方案中，患者是人类，其已诊断为具有医学风险、病况或病症(诸如本文描述的疾病或病症之一)，需要用本文描述的抗体。在其中可通过本发明的方法的病症(诸如阿尔兹海默氏病；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra);炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld))通过确立且接受的分类已知的那些情况下，其分类可见于各种众所周知医学著作中。例如，目前，diagnostic and statistical manual of mental disorders的第5版(dsm-5)提供了用于鉴定本文描述的某些病症的诊断工具。而且，international classification of diseases第十修订版(icd-10)提供了本文描述的某些病症的分类。技术人员将认识到，存在本文描述的疾病和病症的替代命名法、疾病分类学和分类系统，包括如dsm-5和icd-10中所述的那些，且该术语和分类系统随着医学科学进展而变化。
50.术语“(treating)”(或“(treat)”或“(treatment)”) 是指减慢、中断、遏制、缓解、停止、减轻或逆转现有症状、病症、病况或疾病的进展或严重程度。
51.如本文所用，术语“先天免疫”包括免疫应答的组，与免疫应答的适应组相反，其为引发和维持适应免疫应答(抗体和t细胞应答)所需的。
[0052]“有效量”意指本发明的抗人类il-34抗体或包含这种抗体的药物组合物将引发组织、系统或人类的生物或医学应答或对组织、系统或人类的期望效应(这是健康专业人员正在寻求的)的量。如本文所用，术语患者的“有效应答”或患者的对的应答性是指在施用本公开的抗体后赋予患者的临床或益处。所述抗体的有效量可以根据因素诸如个体的疾病状态、年龄、性别和重量以及所述抗体在个体中引发期望应答的能力而变化。有效量也是其中抗体的任何毒性或有害效应均被有益效应胜过的量。此类益处包括以
mg至约200 mg，约175 mg至约200 mg，约50 mg至约175 mg，约75 mg至约175 mg，约100 mg至约175 mg，约125 mg至约175 mg，或约150 mg至约175 mg。
[0058]
然而，还设想低于或高于本文提及的剂量的剂量，特别是考虑到本领域技术人员已知和/或本文描述的剂量考量。可通过定期评价来监测正在进行的患者的进展，并在必要时相应地调整剂量。
[0059]
本文公开的方法的潜在优点是可能在患有免疫介导的病症或神经炎性病症的患者中产生显著和/或延长的缓解，其具有可接受的安全性概况，包括可接受的耐受性、毒性和/或不良事件，使得患者受益于整体方法，且更具体地，本发明的抗体将提供有效，同时避免临床上不期望的免疫抑制和/或免疫相关不良事件，诸如“细胞因子风暴(cytokine storm)”或显著细胞因子释放。本发明的抗体可用于细胞因子风暴，或其他不良细胞因子释放。如本文所用，“显著细胞因子释放”是指可测量的细胞因子的显著增加，其可通过本领域普通技术人员已知的方法来检测。例如，可通过elisa在人类血液样品中检测显著细胞因子释放，其中将来自未刺激的血液的细胞因子水平和与抗体孵育的血液的细胞因子水平进行比较。例如，在一些此类研究中，如果与抗体孵育的血液中il-6、或l-8、或ifn-γ的水平比未刺激的血液中的水平高至少三倍，则可检测到显著细胞因子释放。优选地，将进行如本文实施方案中所述的免疫介导的病症的，其中该患者将不经历显著细胞因子释放。
[0060]
附图简述图1显示表达hcsf1r的293 sre细胞中人类il-34诱导的荧光素酶报告子活性的抗体1中和。
[0061]
图2显示pathhunter express二聚化测定中抗体1中和csf1r的二聚化的能力。
[0062]
图3显示抗体1抑制nih-3t3/csf1r细胞中erk磷酸化的能力。
[0063]
图4显示通过流式细胞术的抗il34抗体抑制人类单核细胞中il-34诱导的cd163的表达的能力。
实施例
[0064]
提供以下实施例以举例说明但不限制请求保护的发明。下列测定的结果证实，本发明的例举的单克隆抗体和/或其抗原结合片段结合和/或中和il-34，且因此可用于本文描述的免疫介导的疾病和炎性疾病。
[0065]
实施例1：抗体产生、表达和纯化使用人类抗体噬菌体展示文库获得一组人类抗il-34抗体且经筛选以鉴定可以是有效il-34中和抗体的试剂。将突变系统性引入各抗体的各个互补决定区(cdr)且所得文库经历多轮用递减浓度的抗原和/或递增解离时段的选择，以便分离具有改进的亲和力的克隆。各个变体的序列经测定并用于构建组合文库，该组合文库经历另一轮增加严格性的选择以鉴定各个cdr区之间的累加性或协同突变配对。对各个组合克隆进行测序，且测定结合特性。为了进一步增加对il-34的亲和力，这些组合克隆经历另外几轮单诱变和组合诱变。可针对人类或小鼠il-34进行该筛选以增加针对所选择种类(例如对于人类il-34的抗体1，和对于小鼠il-34的抗体3)的亲和力。也可诱变选择的抗体以固定翻译后修饰，诸如甲硫氨酸氧化，同时保留对il-34的结合亲和力。另外，可对抗体进行框架(fw)取代以将这些fw1序
列复原至其种系状态以便降低潜在免疫原性风险。
[0066]
获得工程改造和/或优化的抗il-34抗体，在本文中称为抗体1、抗体2和/或抗体3，其具有如以下在标题为“氨基酸和核苷酸序列列表”的部分中所列的重链和轻链的可变区的氨基酸序列、和完整重链和轻链氨基酸序列、和编码其的核苷酸序列。下表1中显示对应于这些片段的seq id no、以及轻链和重链cdr氨基酸序列。
[0067]
可基本上如下表达和纯化本发明的例举的抗il-34抗体。适当的宿主细胞(诸如hek 293、ns0或cho)可用最佳预先确定的hc:lc载体比(诸如1:3或1:2)或编码hc和lc两者的单载体系统用表达系统瞬时或稳定转染以分泌抗体。使用许多常用技术中的任一种纯化已分泌抗体至其中的澄清培养基。例如，可将培养基施用至蛋白a或g柱，例如mabselect
®
柱(ge healthcare)或用于fab片段的kappaselect柱(ge healthcare)，所述柱已经用相容缓冲液(诸如磷酸盐缓冲盐水(ph 7.4))平衡。可洗涤柱以移除非特异性结合组分。可例如通过ph梯度(诸如20 mm tris缓冲液，ph 7.0至10 mm柠檬酸钠缓冲液，ph 3.0或磷酸盐缓冲盐水，ph 7.4至100 mm甘氨酸缓冲液，ph 3.0)洗脱结合的抗体。抗体级分可诸如通过sds-page检测，且然后可合并在一起。例如，通过ph梯度(诸如0.1m磷酸钠缓冲液ph 6.8至0.1m柠檬酸钠缓冲液ph 2.5)洗脱结合的抗体。抗体级分诸如通过sds-page检测，且然后合并在一起。进一步纯化是任选的，这取决于预期用途。可使用常用技术将抗体浓缩和/或无菌过滤。可溶性聚集体和多聚体可通过常用技术(包括大小排阻、疏水相互作用或离子交换、多峰或羟磷灰石谱)有效移除。在这些谱步骤之后，抗体的纯度为大于99%。该产物可在-70℃下立即冷冻，或可冻干，或在4℃下保存以用于立即使用。本发明的例举的人类抗体的氨基酸seq id no显示于下表1中。
[0068]
表达质粒含有抗体1的lc和hc基因的cdna形式(例如编码呈现于表1中的例举抗体1的hc的seq id no: 12的dna序列、和编码根据表1的lc氨基酸序列的dna序列，例如编码呈现于表1中的例举抗体1的lc的seq id no: 13的dna序列)；且从用于此目的的常用且合适的构建体，诸如基于人类巨细胞病毒主要即刻早期启动子的构建体表达。lc和hc基因侧接有由转座酶酶识别的反向末端重复(itr)序列。亲本细胞系用与表达质粒和使得转座酶酶能够瞬时表达的转座酶mrna共转染，以促进抗体1基因表达盒稳定整合至基因组dna中。
[0069]
使用荧光活化的细胞分选(facs)技术使选择的大批培养物经历单细胞克隆。扩增克隆衍生的细胞系且针对抗体1产生进行筛选。选择且确立克隆衍生的细胞系。该细胞系在没有任何含动物组分物质的情况下产生并用于生产。
[0070]
将分泌抗体至其中的澄清培养基施用至用相容的缓冲液(诸如磷酸盐缓冲盐水(ph 7.4)或20mm tris与150 mm氯化钠(ph 8.0))平衡的蛋白a亲和柱。用1m nacl洗涤该柱以移除非特异性结合组分。例如用ph (近似) 3.5的柠檬酸钠洗脱结合的抗体并用1m tris缓冲液中和级分。抗体级分诸如通过sds-page或分析型大小排阻检测，且然后合并。可溶性聚集体和多聚体可通过常用技术(包括大小排阻、疏水相互作用、离子交换或羟磷灰石谱)有效移除。使用常用技术将本发明的例举的抗体il-34抗体浓缩和/或无菌过滤。在这些谱步骤之后，例举抗体的纯度为大于95%。本发明的例举的抗il-34抗体可在-70℃下立即冷冻或在4℃下储存几个月。
[0071]
实施例2：抗il-34抗体的表征对人类il-34的结合亲和力
本发明的抗il-34单克隆抗体对人类il-34(包括前导序列或成熟人类il-34)的结合亲和力可通过本领域中已知的方法来测定。除了指出的情况之外，所有试剂和材料均可购自meso scale discovery (msd
®ꢀ
)，并且可在37℃下进行测量。人类和小鼠il-34可进行制备并使用imac和大小排阻谱纯化或购自商业供应商。人类csf1r fc融合蛋白(例举的化合物d)也进行制备，通过mabselect
tm sure
tm (ge healthcare)纯化，且通过大小排阻谱进一步精细纯化(polish)。
[0072]
简言之，通常，从40或50或60或80或100或120 nm至100fm的起始浓度制备人类、猕猴或小鼠il-34的2倍或3倍稀释系列；且各系列包括il-34空白对照。在3% (w/v)封闭剂a溶液(msd
®
，#r93aa-1)中制备样品并将表1中的固定最终浓度为5至50 pm的各例举抗体添加至各样品。包括仅抗体对照。将体积为50
ꢀµ
l的各蛋白-抗体样品添加至96孔微量滴定板(greiner，ek-20101)的各个孔。用光学胶粘膜(thermo fisher scientific，#4311971)密封板并在37℃下孵育1至3天以允许样品平衡。在分析前一天，使96孔msd
®
标准板(msd
®
，#l15xa)的各行用30
ꢀµ
l的磷酸盐缓冲盐水(pbs)中浓度为1
ꢀµ
g/ml的对应il-34 (如以滴定系列所使用)包被。在实验当天，msd
®
标准板用150
ꢀµ
l pbst (含有0.05% tween 的pbs)洗涤三次并在室温下在maxq 4450台式振荡器(thermo fisher scientific)上以300 rpm振荡下用150
ꢀµ
l 3%封闭剂a溶液封闭60分钟。用pbst进行三次洗涤后，将50
ꢀµ
l的各蛋白-抗体样品(如以上所述制备且孵育)添加至msd
®
标准板并在37℃下在以300 rpm振荡下孵育150秒。用pbst进行三次洗涤后，将在1% (w/v)封闭剂a溶液中制备的50
ꢀµ
l 1
ꢀµ
g/ml sulfo-tag标记的检测抗体添加至msd
®
标准板并在37℃下在以300 rpm振荡下孵育板150秒。用pbst再洗涤板三次，随后添加150
ꢀµ
l/孔的1x读取缓冲液(msd
®
，#r92tc-2)。使用meso quickplex sq 120/1300仪器(meso scale discovery)读取msd
®
标准板。使用graphpad prism 8 (针对windows，8.0.0版，graphpad software，la jolla california usa，www.graphpad)进行数据分析并使用graphpad prism 8的积分四参数逻辑曲线模型来测定结合亲和力(kd)。结果提供于表2、3和4中。
[0073]
表2：抗体-人类il-34复合物在37℃下的结合亲和力(kd)。
[0074]
表3：抗体-食蟹猴il-34复合物在37℃下的结合亲和力(kd)
。
[0075]
表4：抗体-小鼠il-34复合物在37℃下的结合亲和力(kd)。
[0076]
il-34以近似50-100 pm亲和力结合人类csf1r，需要高亲和力抗体以有效中和cns中的该细胞因子。据信，阻断il-34为疾病改善提供有用手段，同时避免与一些现有免疫调节疗法相关的安全性问题。因此，中和il-34介导的信号传导代表用于管控神经炎症、小神经胶质细胞增生和神经退行性疾病诸如阿尔兹海默氏病和其他tau蛋白病和炎性疾病的方法。
[0077]
表2、3和4中的结果显示，抗体1、2和3对il-34具有高亲和力，且具体而言，抗体1和抗体2显示与hcsf1r-fc相当的对人类il-34的亲和力。因此，本发明的抗体具有使得其能够有效体内中和il-34的结合特性。
[0078]
物理化学属性：关于性抗体产品属性，包括化学稳定性、光稳定性、3x缓慢冷冻/解冻、溶解性，抗体1表现出用作人类剂的期望的物理化学属性的组合。
[0079]
稳定性样品制备为了制备稳定性样品，在4℃下将抗体水溶液过夜透析至pbs、或10 mm组氨酸/280 mm甘露醇ph 6 (h6m)或10 mm组氨酸/150 mm nacl ph 6 (h6n)或10 mm组氨酸/17%蔗糖ph 6.0 (h6s)中。当需要时，将聚山梨醇酯-80以0.05%添加至最终稳定性样品(“t”)。使用amicon旋转浓缩器将配制的抗体1进一步浓缩至期望浓度。
[0080]
缩写：4wk = 4周；h6mt = 10 mm组氨酸/280 mm甘露醇/0.05%聚山梨醇酯，ph 6.0；h6st = 10 mm组氨酸/17%蔗糖、0.05%聚山梨醇酯，ph 6.0。
[0081]
化学稳定性抗体1表明在pbs中以5 mg/ml的四周(4wk)化学稳定性热点检查的可接受评级。在35℃下在pbs中储存四周后且与时间0对照相比，抗体1显示0.26%聚集体生长，如通过分析型大小排阻谱(asec)所测量。通过lc-ms(液相谱-质谱法)肽作图检查热点。当与4wk/4℃样品相比时，在35℃下在pbs中报告以下降解/热点变化：d104的异构化(0.1%)；g93/d94/s95的裂解(0.8%)。cdr降解的总变化为0.9%。
[0082]
高浓度稳定性温度保持
(hcsf1r)的293/sre细胞在0.05%胰蛋白酶-pbs中解离且以70,000个细胞/100 ml铺板于组织培养物处理的96孔板中。第二天，移除生长培养基，并用补充有热灭活的1% fbs (胎牛血清)的dmem-f12 (dulbecco氏改良eagle培养基(dulbecco's modified eagle medium)：营养物混合物f-12)使细胞饥饿。饥饿后24小时，用100 ng/ml人类il-34或食蟹猴il-34和多种浓度的hcsf1r-fc或抗体1处理细胞6小时。孵育后，在轻轻搅拌下用50 μl promega
tm glo
tm 裂解缓冲液(promega
tm e266a)裂解细胞5分钟。添加50 ml brightglo
tm
发光试剂(promega
tm e2620)并在裂解的细胞上孵育2分钟。在perkin elmer wallac 1420 victor2
tm
微板读取器上读取发光。显示于表5和图1中的相对荧光单位(rfu)的减小反映抗体1中和il-34和降低荧光素酶活性的能力。抗体1的半数最大抑制浓度(ic
50
)值对于hil-34的中和为385 pm (图1)，且对于食蟹猴il-34为654 pm。人类csf1r-fc在此测定中用作阳性对照且以560 pm的ic
50 抑制荧光素酶活性。
[0089]
表5：抗体1对表达hcsf1r的293 sre细胞中人类il-34诱导的荧光素酶报告子活性的中和。
[0090]
表5和图1显示在以上基于293 hcsf1r细胞的测定中抗体1可有效中和人类il-34诱导的荧光素酶报告子活性(ic
50 0.3852 nm)，并且在该测定中证明与hcsf1r-fc至少相当或更优的功效。这些数据支持抗体1中和人类il-34介导的信号传导并其中il-34介导的信号传导贡献于发病机理的疾病的能力。
[0091]
pathhunter
® express二聚化测定中抗体1中和csf1r的二聚化的能力：可通过将u2os csf1r/csf1r细胞(path hunter
®
express二聚化测定，discoverx)铺板于96孔板中以评价抗il-34抗体抑制csf1r的二聚化的能力来进一步评价人类il-34中和。这些测定利用酶片段互补(efc)技术，其中b-半乳糖苷酶(b-gal)酶分为两个片段prolink (pk)和酶受体(ea)。独立地，这些片段不具有b-gal活性；然而，当通过蛋白-蛋白相互作用迫使互补时，它们形成活性b-gal酶。pathhunter
® express二聚化测定检测csf1r受体-二聚体对的两个亚单位的配体诱导的二聚化。所述细胞已经工程改造以共表达融合至酶供体(ed)的一个csf1r受体亚单位和融合至酶受体(ea)的第二csf1r二聚体配偶体。人类il-34与一个受体亚单位的结合诱导其与其二聚体配偶体相互作用，迫使两个酶片段互
补。这导致形成功能酶，所述功能酶水解底物以生成化学发光信号。显示于表6和/或图2中的相对荧光单位(rfu)的减小反映抗体1中和人类il-34和减少化学发光的能力。抗体1的半数最大抑制浓度(ic
50
)值为226 pm。人类csf1r-fc在该测定中用作阳性对照且以353 pm的ic
50
抑制荧光素酶活性。表6和图2中的数据支持在该测定中抗体1阻断人类il-34与csf1r的相互作用由此抑制csf1r的二聚化的能力。该数据支持使用本发明的抗体以中和人类il-34。
[0092]
表6：pathhunter
® express二聚化测定中抗体1中和csf1r的二聚化的能力。
[0093]
抗il-34抗体抑制nih-3t3/csf1r细胞中erk磷酸化的能力。
[0094]
或者，可通过将nih-3t3/csf1r细胞铺板于96孔板中以评价抗il-34抗体抑制胞外信号调节激酶(erk)磷酸化的能力来测定il-34中和。在该测定中，在第1天将细胞铺板于补充有10% fbs的dmem中并在37℃下孵育过夜。在第2天，移除培养基，将细胞在无血清dmem中洗涤并在无血清dmem中再孵育24小时时段。在第三天，移除培养基并在抗il-34抗体存在或不存在的情况下将1
ꢀµ
g/ml il-34添加至所述细胞5分钟。通过全细胞裂解物试剂盒(meso scale discovery，目录号k15107d-3)评价磷酸化/总erk1/2。显示于表7和/或图3中的相对荧光单位(rfu)的减小反映抗体3中和il-34和减少化学发光的能力。抗体3的半数最大抑制浓度(ic
50
)值为16 nm。在该测定中人类csf1r-fc用作阳性对照并以63 nm的ic
50
抑制荧光
素酶活性。
[0095]
表7：抗体3抑制nih-3t3/csf1r细胞中erk磷酸化的能力。
[0096]
通过流式细胞术，抗il34抗体抑制人类单核细胞中il-34诱导的cd163表达的能力：也可通过流式细胞术测量人类单核细胞在用il-34处理后细胞表面抗原cd163的表达来评价il-34中和(参见例如boulakirba, s.等人，il-34 and csf-1 display an equivalent macrophage differentiation ability but a different polarization potential. sci rep 8, 256 (2018)。用il-34处理cd14阳性单核细胞72小时并在用针对cd163的抗体染后通过流式细胞术评价cd163表达。在描述于图4中的实验中，表达cd163的细胞数量的右移指示il-34处理增加单核细胞中该抗原的表达。通过添加抗体3来抑制cd163表达的增加。在该实验中，将同种型匹配的igg4抗体用作阴性对照。
[0097]
响应于il-34，抗体3对人类单核细胞中cd163表达的抑制，表明本发明的抗体调节单核细胞/巨噬细胞数目和/或对il-34的表型分化反应的能力，并支持使用本发明抗体以免疫介导的疾病，诸如神经炎症和其他炎性病况(参见例如lelios, i.等人，emerging roles of il-34 in health and disease, j exp med (2020) 217 (3): e20190290)。
[0098]
实施例4：抗il-34抗体的体内功能表征抗体3减少小鼠的背侧皮层和海马体中小神经胶质细胞数目的能力使用小鼠模型检查本发明的抗il-34抗体减少小神经胶质细胞数目的能力。简言之，向fbv雌性小鼠(envigo，6至8周龄)施用50 mg/kg皮下剂量的抗体3、或同种型匹配的igg对照抗体。在抗体施用后的不同时间(1、3、7和14天)，用co2使动物安乐死并用盐水灌注脑。灌注后，收集脑组织，在显微镜下切下背侧皮层和海马体并在液氮中快速冷冻。从背侧皮层和海马体制备mrna并用于通过taqman评价抗il34抗体或对照抗体处理对小神经胶质细胞标志物iba-1和cd11b的表达的影响。将mrna表达的改变相对于内部gapdh mrna对照归一化且呈现为倍数变化。将iba-1和cd11b mrna的表达常规用作小神经胶质细胞数目的替代标志物，且这些标志物的表达的降低通常被认为反映脑小神经胶质细胞的减少。还在施用抗体3后评价针对il-34的两种受体(csf1r和ptp ζ)和两种csf1r配体(il-34和csf-1)的mrna的表达。结果提供于表8中(a-海马体和b-皮层)：
表8：抗体3对小神经胶质细胞标志物的mrna表达的影响抗体3在小鼠阿尔兹海默氏病模型(tg4510小鼠)中减少小神经胶质细胞数目的能力：还检查本发明的抗il-34抗体减少小鼠阿尔兹海默氏病模型(tg4510小鼠)中小神经胶质细胞数目的能力。tg4510小鼠是tau蛋白病模型，其特征在于前脑中人类tau的p301l突变体形式的过表达。这些小鼠用于研究神经纤维缠结的形成作为阿尔兹海默氏病、神经退行性tau蛋白病和额颞叶痴呆的模型，并且它们表现出与认知受损相关的神经性病变的年龄依赖性和区域特异性进展。简言之，连续9周对8周龄的雌性tg4510小鼠施用5、15和50 mg/kg每两周剂量的抗il-34抗体或同种匹配的igg对照。在给药时段结束时，使动物安乐死并用pbs灌注。灌注后，收集脑组织并经由正中矢状面(midsagittal section)将两个半球分离并与各半球分开，在显微镜下切下背部皮层和海马体并在液氮中快速冷冻。为了评价抗il-34抗体对于小神经胶质细胞标志物的表达的影响，从海马体制备mrna，并通过实时pcr分析海马体的cd11b、iba-1和csf1r的表达，如表9中所示。
[0099]
表9：通过实时pcr分析的抗体3对小神经胶质细胞标志物(来自海马体的mrna，cd11b、iba-1和csf1r)的表达的影响。
[0100]
抗il34抗体减少tg4510小鼠中磷酸化tau的能力：为了评价抗il-34抗体是否可降低磷酸化-tau (与阿尔兹海默氏病相关的tau的
病理形式之一)，从用抗il-34抗体或igg对照抗体处理的动物的皮层制备蛋白裂解物。简言之，将抗磷酸化tau抗体(at8)用于包被96孔板的孔并在4℃下孵育24小时。第二天，用0.05% tween/pbs洗涤板，用synblock
tm
缓冲液(immunochemistry technology)封闭并在4℃下与皮层裂解物孵育24小时，随后添加生物素化tau检测抗体(cp27)和链霉抗生物素蛋白-辣根过氧化物缀合物。如表9中所示，用抗il-34抗体降低tg4510小鼠皮层中的磷酸化tau。
[0101]
表9：fdt248：at8 tau elisa p1皮层(μg/mg蛋白)。
[0102]
氨基酸和核苷酸序列的列表抗体1的重链(seq id no:1)抗体1的轻链；抗体2的lc (seq id no:2)抗体1的hcvr (seq id no:3)抗体1的lcvr；抗体2的lcvr (seq id no:4)
抗体1的hcdr1 (seq id no:5)抗体1的hcdr2 (seq id no:6)抗体1的hcdr3 (seq id no:7)抗体1和抗体2的lcdr1 (seq id no:8)抗体1和抗体2的lcdr2 (seq id no:9)抗体1和抗体2的lcdr3 (seq id no:10)编码抗体1的重链的dna(seq id no:11)编码抗体1的轻链的dna(seq id no:12)抗体2的重链(seq id no:13)
抗体2的hcvr (seq id no:14)抗体2的hcdr1 (seq id no:15)抗体2的hcdr2 (seq id no:16)抗体2的hcdr3 (seq id no:17)编码抗体2的重链的dna(seq id no:18)no:18)抗体3的重链(seq id no:19)
抗体3的轻链(seq id no:20)抗体3的hcvr (seq id no:21)抗体3的lcvr (seq id no:22)抗体3的hcdr1 (seq id no:23)抗体3的hcdr2 (seq id no:24)抗体3的hcdr3 (seq id no:25)抗体3的lcdr1 (seq id no:26)抗体3的lcdr2 (seq id no:27)抗体3的lcdr3 (seq id no:28)
编码抗体3的重链的dna(seq id no:29)编码抗体3的轻链的dna(seq id no:30)人类il-34 (seq id no:41)鼠il-34 (seq id no:42)igg4paa铰链区(seq id no:51)igg4paa fc区(seq id no:52)

技术特征：

1.结合人类il-34的抗体，其中所述抗体包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中所述vh包含重链互补决定区(hcdr) hcdr1、hcdr2和hcdr3，且所述vl包含轻链互补决定区(lcdr) lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包含seq id no:5，所述hcdr2包含seq id no:6，所述hcdr3包含seq id no:7，所述lcdr1包含seq id no:8，所述lcdr2包含seq id no:9，且所述lcdr3包含seq id no:10。2.权利要求1的抗体，其中所述vh包含seq id no:3且所述vl包含seq id no:4。3.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体包含：包含seq id no:1的重链(hc)和包含seq id no:2的轻链(lc)。4.结合人类il-34的抗体，其包含vh和vl，其中所述vh包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，且所述vl包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包含seq id no:15，所述hcdr2包含seq id no:16，所述hcdr3包含seq id no:17，所述lcdr1包含seq id no:8，所述lcdr2包含seq id no:9，且所述lcdr3包含seq id no:10。5.权利要求4的抗体，其中所述vh包含seq id no:14且所述vl包含seq id no:4。6.权利要求4或5的抗体，其中所述抗体包含：包含seq id no:13的hc和包含seq id no:2的lc。7.结合鼠il-34的抗体，其中所述抗体包含vh和vl，其中所述vh包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，且所述vl包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包含seq id no:23，所述hcdr2包含seq id no:24，所述hcdr3包含seq id no:25，所述lcdr1包含seq id no:26，所述lcdr2包含seq id no:27，且所述lcdr3包含seq id no:28。8.权利要求7的抗体，其中所述vh包含seq id no:21且所述vl包含seq id no:22。9.权利要求7或8的抗体，其中所述抗体包含：包含seq id no:19的hc和包含seq id no:20的lc。10.核酸，其包含编码选自以下中的一者或多者的seq id no的序列： 11、12、18、29和30。11.载体，其包含权利要求10的核酸。12.权利要求11的载体，其中所述载体包含：编码seq id no:11或18的第一核酸序列和编码seq id no:12的第二核酸序列。
13.权利要求11的载体，其中所述载体包含：编码seq id no:29的第一核酸序列和编码seq id no:30的第二核酸序列。14.包含第一载体和第二载体的组合物，所述第一载体包含编码seq id no:11或18的核酸序列且所述第二载体包含编码seq id no:12的核酸序列。15.包含第一载体和第二载体的组合物，所述第一载体包含编码seq id no:29的核酸序列且所述第二载体包含编码seq id no:30的核酸序列。16.细胞，包含权利要求12或13的载体。17.包含第一载体和第二载体的细胞，所述第一载体包含编码seq id no:11或18的核酸序列且所述第二载体包含编码seq id no:12的核酸序列。18.包含第一载体和第二载体的细胞，所述第一载体包含编码seq id no:29的核酸序列且所述第二载体包含编码seq id no:30的核酸序列。19.权利要求16-18中任一项的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。20.产生抗体的方法，其包括在使得所述抗体得以表达的条件下培养权利要求16-19中任一项的细胞和从培养基回收表达的抗体。21.通过权利要求20的方法生产的抗体。22.药物组合物，其包含权利要求1-9或21中任一项的抗体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。23.有此需要的受试者中的免疫介导的疾病的方法，其包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-9或21中任一项的抗体或权利要求22的药物组合物。24.权利要求23的方法，其中所述免疫介导的疾病选自：阿尔兹海默氏病；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra)；炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld)。25.权利要求23的方法，其中所述免疫介导的疾病是阿尔兹海默氏病。26.权利要求1-9或21中任一项的抗体，其用于疗法中。27.权利要求1-9或21中任一项的抗体或权利要求22的药物组合物，其用于免疫介导的疾病。28.权利要求27的抗体或药物组合物，其中所述免疫介导的疾病选自：阿尔兹海默氏病；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra)；炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld)。29.权利要求27的抗体或药物组合物，其中所述免疫介导的疾病是阿尔兹海默氏病。30.权利要求1-9或21中任一项的抗体在制备用于免疫介导的疾病的药物中的用途。31.权利要求30的用途，其中所述免疫介导的疾病选自：阿尔兹海默氏病；tau蛋白病；舍格伦综合征(ss)；类风湿性关节炎(ra)；炎性肠病(ibd)、特应性皮炎、肾病、败血症和/或非酒精性脂肪肝病(nafld)。32.权利要求30的用途，其中所述免疫介导的疾病是阿尔兹海默氏病。33.测定体液中人类il-34水平的方法，其包括：(a)使所述体液与特异性结合由如seq id no:41中的氨基酸序列组成的人类il-34的抗人类il-34诊断性单克隆抗体或其抗原结合片段接触，所述抗体或其抗原结合片段包含：
轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其分别包含氨基酸序列(seq id no:8)、(seq id no:9)和(seq id no:10)，以及重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，其分别包含氨基酸序列(seq id no:15)、(seq id no:16)和(seq id no:17)；(b)任选地，除去任何非特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段；和(c)检测和/或定量特异性结合人类il-34的单克隆抗体或其抗原结合片段的量。34.权利要求33的方法，其中所述体液为血液、血清或血浆、或脑脊髓液，且所述接触离体发生。

技术总结

本发明涉及IL-34抗体、包含其的组合物和使用所述抗体和/或其组合物用于免疫介导的疾病、诸如神经退行性疾病、例如阿尔兹海默氏病或Tau蛋白病的方法。氏病或Tau蛋白病的方法。

技术研发人员：

M

受保护的技术使用者：

伊莱利利公司

技术研发日：

2021.04.23

技术公布日：

2023/3/28