特异性结合醛固酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒的制作方法

1.本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸适配体，尤其涉及特异性结合醛固酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒。

背景技术：

2.醛固酮(aldosterone)别名：醛甾酮，醛固醇酮。英文别名aldocortin，reichstein，aldosterol，aldocortene。分子式为c
21h28
o5，分子量为360.444，是肾上腺皮质激素的一种。具有代表性的强电解质代谢作用的盐皮质类固醇。其作用是促进na
+
在体内贮留，同时排出k
+
。是由肾上腺皮质球状带生成，并受肾脏分泌的血管紧张肽原酶的调节。
3.醛固酮是人体内调节血容量的激素，通过调节肾脏对钠离子的重吸收，维持水盐平衡。醛固酮是调节细胞外液容量和电解质的激素，醛固酮的分泌，是通过肾素一血管紧张素系统实现的。当细胞外液容量下降时，刺激肾小球旁细胞分泌肾素，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统、醛固酮分泌增加，使肾脏重吸收钠离子增加，进而引起水重吸收增加，细胞外液容量增多；相反细胞外液容量增多时，通过上述相反的机制，使醛固酮分泌减少，肾重吸收钠离子和水减少，细胞外液容量下降。血钠降低，血钾升高同样刺激肾上腺皮质，使醛固酮分泌增加。
4.目前醛固酮的检测方法有很多种，例如：免疫筛选法，气相谱法，高效液相谱等方法，谱的方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求很高，需要提纯处理等，无法实现快速便捷的检测。且目前的免疫筛选法都是依赖于抗体做的检测试剂盒，虽然有一些可以做到快速简单的检测，但是抗体制备过程比较复杂，成本较高，批次之间有差异，也有一定的缺陷。
5.核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(selex)筛选分离得到的dna或者rna分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面具有广阔的前景。
6.核酸适配体与抗体相比，分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。
7.基于selex的方法，筛选出结合特定小分子的核酸适配体，并将该核酸适配体用于小分子的检测，目前也被广泛研究。针对于醛固酮的核酸适配体还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对醛固酮有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。

技术实现要素：

8.为了克服现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合醛固酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。
9.为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
10.第一方面，本发明提供了特异性结合醛固酮的核酸适配体，包括seq id no.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列。
11.作为本发明的一种优选方案，所述具有高同源性是指与seq id nos.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
12.作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持所述亲和力。
13.作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持所述亲和力。
14.作为本发明的一种优选方案，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。
15.本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或连接同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合醛固酮的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
16.作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持所述亲和力。
17.作为本发明的一种优选方案，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、性标记物、生物素标记物、标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、sirna标记物或酶标记物。
18.本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可在上述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光物质，放射性物质、性物质、生物素、、纳米发光材料、小肽、sirna或酶标记等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合醛固酮的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
19.换言之，以上不论是经部分取代或经过修饰后的核酸适配体序列，都具有原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与醛固酮的结合。
20.作为一个总的技术构思，本发明所述的核酸适配体也可以包含以下三种序列中的任意一种：
21.(1)与前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列的同源性在60％以上的核苷酸序列(例如可将前述核酸适配体序列删除或增加部分互补的核苷酸)，优选地，与seq id nos.1所示的核苷酸序列的同源性可以为70％以上，80％以上，85％以上，90％以上，95％以上，或者99％以上；
22.(2)能够与前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列在严格条件下杂交的核苷酸序列；
23.(3)由前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列转录的rna序列；
24.其中，上述(1)-(3)中的核苷酸序列均能够特异性结合醛固酮。
25.第二方面，本发明还提供了特异性结合醛固酮的核酸适配体衍生物，所述核酸适配体衍生物是由上述核酸适配体的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是由上述核酸适配体改造成的相应肽核酸。
26.以上不论是衍生出的核酸适配体还是衍生出的其他衍生物，都具有与原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能。
27.第三方面，本发明还提供了上述的特异性结合醛固酮的核酸适配体或核酸适配体衍生物的应用，用于醛固酮的检测，可以使用本发明的核酸适配体或其衍生物来检测受试者血液中的醛固酮的含量。
28.第四方面，本发明还提供了包含上述特异性结合醛固酮的核酸适配体或者核酸适配体衍生物的检测醛固酮的试剂盒。
29.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
30.1)核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针；针对于醛固酮的核酸适配体还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对醛固酮有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。
31.2)本发明提供了一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合醛固酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。
附图说明
32.图1是本发明的seq id no.1所示序列的模拟二级结构。
33.图2是本发明的实验组的等温滴定微量热检测结果图。
34.图3是本发明的对照组的等温滴定微量热检测结果图。
35.图4是本发明对照组的质谱图。
36.图5是本发明实验组1的质谱图。
37.图6是本发明实验组2的质谱图。
38.图7是本发明实验组3的质谱图。
39.图8是本发明实验组4的质谱图。
40.图9是本发明实验组5的质谱图。
41.图10是本发明实验组6的质谱图。
42.图11是本发明质谱上机数据拟合的线性曲线。
具体实施方式
43.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
44.实施例1
45.特异性结醛固酮的ssdna核酸适配体的筛选
46.1.合成以下序列所示的随机单链dna文库和引物：
47.随机单链dna文库：
48.lib-qgt-80nt：
49.attggcactccacgcataggn(40n)cctatgcgtgctaccgtgaa
50.其中，“40n”表示40个任意的核苷酸碱基连接而成的序列。
51.该文库由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
52.引物信息如表1，由通用生物公司合成。
53.表1.引物及其序列
[0054][0055]
其中，引物名称中的s代表正向引物，引物名称中a代表反向引物，s1的complementary seqμences，记为s1cs，序列中的20个a表示由20个腺苷酸(a)组成的polya尾，“spacer 18”表示18原子的六乙二醇间臂，biotin为生物素修饰。
[0056]
大部分三种“spacer 18”的结构式如下式i所示。
[0057]
在上述a2-ploya引物中所用的“spacer 18”结构式如式i所示。
[0058][0059]
引物分别用dpbs缓冲液(nacl：8g/l，kcl：0.2g/l，na2hpo4：1.15g/l，kh2ph4:0.2g/l，cacl2:0.1g/l，mgcl2
·
6h2o:0.1g/l；ph7.4)配制成100μm的贮存液，于-20℃保存备用。
[0060]
2.磁珠捕获法固定文库筛选醛固酮
[0061]
采用磁珠固定文库，用小分子竞争结合的方法筛选，共计筛选9轮，筛选流程见图
1。
[0062]
具体筛选方法如下：
[0063]
2.1文库溶解：
[0064]
取出生工合成的文库干粉用12000rpm离心10min。加入dpbs缓冲液，将文库稀释成10000nm 130μl，涡旋混匀，然后12000rpm离心5min。将用dpbs溶解好的s1cs引物100um,吸取26μl加入到文库中，充分混匀引物和文库后14000rpm离心2min。
[0065]
2.2.文库与引物匹配：
[0066]
文库与互补引物的混合液分装到pcr管中，放入pcr仪进行缓慢变复性。使用pcr仪设置如下程序，95℃10min，缓慢降温到60℃，速率0.1℃/s；60℃1min；缓慢降温至25℃，降温速率为0.1℃/s。将变复性好的文库与互补引物混合液，取少许用紫外(a260)测定浓度为c1。
[0067]
2.3.吸取1000μl链霉亲和素磁珠(购买自invitrogen,dynabeads
tm m-270链霉亲和素，货号：65306)，使用dpbs清洗磁珠4遍，每次使用dpbs体积为200μl，用磁铁垂钓磁珠，去除上清。(最后一遍清洗时将磁珠暂时保存于少量dpbs中，防止磁珠干燥。)
[0068]
2.4.将变复性完成后的文库与互补引物混合液加入2.3的磁珠中，混匀，室温旋转仪上摇晃60min，磁铁垂钓磁珠，回收上清，取少许上清测定紫外(a260)浓度得到数值c2。根据测定的浓度，可以计算出文库偶联到磁珠上的效率。文库固定效率＝(c1-c2)/c1，第一轮文库固定效率大于50％，之后每一轮文库固定效率大于85％，继续筛选。为了保证实验的成功率，保证每轮文库已经固定在磁珠上；固定率是有要求的，第一轮要大于50％，之后因为文库量小了，固定率要大于85％，这一步对筛选成功也有帮助。
[0069]
2.5.文库的洗涤：上一步中得到的磁珠进行漂洗，每次往磁珠中加入400μl漂洗缓冲液(dpbs)，悬浮磁珠后室温静置2分钟，然后强磁铁吸附磁珠。重复漂洗操作4遍。每一遍清洗磁珠时换个新的ep管。紧接着对磁珠进行一次长时间漂洗，即加入200μl漂洗缓冲液，将磁珠悬浮后摇床孵育20分钟，然后强磁铁吸附磁珠，去上清。(从第二轮筛选开始此步漂洗缓冲液也只使用200μl,且保证孵育的时间和2.6的靶标洗脱时间一样)。
[0070]
2.6.靶标洗脱：
[0071]
将醛固酮(分子式为c21h28o5，相对分子量为360.44，分子结构如式ⅱ所示)用甲醇溶解到5mm，并吸取4μl加入到196μl的dpbs中，即稀释了50倍到100μm，混匀后全部加入到2.5步得到的sa磁珠中，摇床孵育20min。磁铁垂钓磁珠，回收上清到ep管中，记为elution。
[0072]
[0073]
3.次级文库制备
[0074]
3.1扩增双链：以elution中的核酸分子为模板，用pcr(epcr)进行扩增。方法如下：将全部模板elution加入2ml pcr mix中混匀，将混合液分成100μl/管加入到pcr管中，扩增条件如下：95℃预变性2分钟，95℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，共25个循环，4℃保存。pcrmix的配方见表2。
[0075]
表2.epcr mix配方
[0076]
试剂总体积1000μlddh2o866μl10*pfμ酶bμffer100μldntpmix(10mm)20μl正向引物s1fam(100μm)5μl反向引物a2-polya(100μm)5μlpfμ酶4μl(20μ)
[0077]
3.2扩增产物用正丁醇浓缩：
[0078]
收集所有的epcr产物于15ml尖底离心管中，加入2倍体积的正丁醇，在旋涡混合器上震荡以充分混匀；台式离心机，9000rpm(转/分钟)室温离心10分钟；移弃上相(正丁醇)，得到浓缩的pcr扩增产物。
[0079]
3.3制备单链：
[0080]
浓缩的pcr产物中按体积比1：1加入tbe/尿素变性缓冲液，煮沸变性10分钟使dna完全变性，随后将所有的样品进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，400v电压下电泳至溴酚蓝到达胶底部，使加长的fam标记的链与反向的链分开，7m尿素变性聚丙烯酰胺凝胶配方如表3。
[0081]
表3.变性聚丙烯酰胺凝胶配方
[0082]
成分用量尿素3.78g40％聚丙烯酰胺1.8ml5*tbe1.8mlddh2o2.25ml100％aps60μltemed15μl
[0083]
切胶回收fam标记的链：将凝胶取出放在塑料膜上，ex(nm)：495，em(nm)：517检测我们需要的带有fam标记的ssdna，即目的条带；用干净的刀片将目的条带直接切下，将切下胶条转移至1.5ml ep管中并捣碎，形成碎胶，向其中加入1.2mldpbs后混匀，沸水浴10分钟将胶中的ssdna转移到溶液中，12000rpm离心2分钟，回收上清，转移到15ml的离心管中，再次取1mldpbs至碎胶中，重复煮沸离心取上清，将上清全部转移至同一个15ml离心管中。向15ml离心管中，加12ml正丁醇，上下颠倒混匀离心，9000rpm离心5min。离心后，溶液会出现分层，去除上层液，将下层含有fam荧光的单链文库回收。得到的dna单链用3.5kd的透析袋于4℃透析过夜，即可作为下一轮筛选的文库。
[0084]
4.多轮筛选：
[0085]
接下来的2～9轮筛选中，每次操作均以前一次操作中得到的次级文库为起始核酸文库，文库的固定都采用了如下的浓度和体积：文库为700nm*100μl；互补引物cs-biotin为：1400nm*100μl；sa磁珠为100μl。筛选到第9轮后将所得产物经高通量测序分析，最终得到核酸适配体。
[0086]
所述筛选方法中，该实验是逐轮增加筛选压力，以增进筛选核酸适配体的富集程度，缩短筛选进程。所述增加筛选压力包括减少投入的单链dna文库的量、醛固酮小分子的靶标量和固定了文库的磁珠孵育时间，增加步骤2.5中的清洗时间，清洗次数。
[0087]
5.将得到的富集文库产物经高通量测序分析后，经同源性比对，挑选若干条序列，再由上海生工合成，检测验证亲和力。
[0088]
在后续检测中，确定了1条具有很强的结合能力的序列，将它命名为醛固酮21号(qgt-21)。
[0089]
具体序列为seq id no.1：
[0090]
attggcactccacgcataggcagctgggtcgtgaagacactgcaaagcctgctcacgtaccctatgcgtgctaccgtgaa
[0091]
其模拟二级结构如图1所示，δg＝-12.41kcal/mol。
[0092]
实施例2
[0093]
等温滴定微量热仪(itc)检测醛固酮适配体和醛固酮的亲和力：
[0094]
itc基于热量检测的原理，检测相互作用：
[0095]
基本实验模型：“配体”放在滴定针中，“大分子”放入样品池中，测量反应热。用醛固酮稀释液分别滴定试验溶液和对照溶液，并检测滴定过程中热量的变化情况，使用的仪器为英国马尔文仪器有限公司的peaq-itc。
[0096]
1.将通用公司合成的核酸适配体(qgt-21)和对照序列(qgt-ctl-seq id no.5)分别用dpbs稀释23.2μm，再分别取200μl，然后加入192μldpbs和8μl甲醇，充分混匀，适配体的终浓度为11.6μm，400ul。
[0097]
对照序列(qgt-ctl-seq id no.5)具体如下所示：
[0098]
attggcactccacgcataggactgtcaacgactatgctaagaggccgaagcaccactttccctatgcgtgctaccgtgaa。
[0099]
2.将醛固酮用dbps稀释成200μm，稀释方法为2μl1mm醛固酮(甲醇溶解)加到98μldpbs，充分混匀。
[0100]
3.进行滴定，醛固酮滴定核酸适配体。
[0101]
结果如下：如图3所示，对照序列与醛固酮之间滴定过程，热量低且没有明显的热量变化，仪器不能拟合参数；如图2所示，qgt-21与醛固酮之间滴定过程有明显的热量变化，二者确定有结合，具体的结合得到的参数由peaq-itc根据滴定的热量自动拟合。
[0102]
实施例3
[0103]
醛固酮适配体在质谱检测上的前处理应用：
[0104]
大体流程：将高特异性、高亲和力的醛固酮适配体通过c7或c6间接臂进行生物素化修饰后与链霉亲和素修饰的载体通过非共价键进行偶联。经过洗涤和封闭得到醛固酮的特异性偶联载体。运用该载体实现质谱的前处理，将检测物进行富集，从而检测。
[0105]
具体的载体是用链霉亲和素修饰的磁珠，即sa磁珠(购买来自invitrogen,
dynabeads
tm myone
tm carboxy lic acid，货号：65001)
[0106]
具体步骤：
[0107]
1.在通用生物公司合成以下序列所示的生物素修饰的单链dna：
[0108]5’‑
biotin-seq id nos.1具体序列：
[0109]
biotin-attggcactccacgcataggcagctgggtcgtgaagacactgcaaagcctgctcacgtaccctatgcgtgctaccgtgaa。
[0110]
2.溶解：取出通用生物公司合成的修饰引物干粉，12000rpm离心10min。加入dpbs缓冲液溶解，再用dpbs将其稀释到终浓度为600nm 1000μl，涡旋混匀，待用。
[0111]
3.变复性处理：将2得到的稀释液分装放入pcr仪中进行变复性，pcr程序为：95℃10min，4℃5min；从而将适配体形成所需要的结构。
[0112]
4.吸取700μl10mg/ml的链霉亲和素磁珠(购买自invitrogen,dynabeads
tm myone
tm carboxy lic acid，货号：65001)，使用dpbs清洗磁珠4遍，每次使用清洗的dpbs体积为1000μl，用磁铁垂钓磁珠，去除上清。(最后一遍清洗时将磁珠暂时保存于少量dpbs中，防止磁珠干燥。)再将得到的磁珠液进行分装，分成2份，一份600ul，标记为实验组；一份100ul，标记为对照组，待用。
[0113]
5.将步骤3得到的变复性完成后的适配体液体，1000ul全部加入步骤4得到的实验组磁珠中，混匀，室温旋转仪上摇晃60min。
[0114]
6.清洗吸附：将上一步骤中得到的实验组磁珠，磁铁垂钓磁珠，去上清，再进行清洗，每次往磁珠中加入1000μl漂洗缓冲液(dpbs)，室温混匀1min，然后用磁铁垂钓磁珠，室温静置1分钟，去上清，重复清洗操作5遍，最后再加入600ul dpbs混匀定容，再将得到的磁珠液进行分装，平均分成6份，每份100ul。为防止清洗磁珠时，磁珠的损耗不一致，将对照组磁珠也用100ul dpbs清洗5遍。
[0115]
7.用dpbs稀释醛固酮标准品，分别稀释至浓度为20nm 300ul和50nm，100nm，150nm，200nm，250nm，各150ul。
[0116]
8.将步骤6得到的对照组磁珠，磁铁垂钓磁珠，去上清，向其中加入用dpbs稀释的醛固酮标准品20nm 150ul，混匀，室温旋转仪上摇晃20min，去上清，用200ul dpbs漂洗磁珠2遍。同时，将步骤6得到的分装的对照组磁珠中，分别加入20nm，50nm，100nm，150nm，200nm，250nm，各150ul，混匀，再分别标记为实验组1-6，室温旋转仪上摇晃20min，再分别去上清，用200ul dpbs漂洗各实验组磁珠2遍。
[0117]
9.将上步得到的所有磁珠分别各用200ul甲醇洗脱，即加入混匀后，室温孵育10min，再用强磁铁吸附磁珠，吸取上清，标记，质谱上机检测醛固酮的含量。
[0118]
本实施例利用醛固酮的标准品，并用实施例1的适配体制备的醛固酮适配体磁珠进行醛固酮样品的富集纯化。磁珠上适配体结合保留的醛固酮用甲醇洗脱后，用质谱检测醛固酮的浓度。主要目的是测试适配体磁珠复合物的富集能力，为应用作为模板。
[0119]
质谱得到的检测数据汇总见表4：
[0120]
表4.检测数据汇总
[0121]
名称质谱上机数据对照组9580.563实验组1106624.8
实验组2255091.6实验组3352619.9实验组4474563.7实验组5568121.4实验组6687179.9
[0122]
参见图4，对照组：质谱得到的数据为9580.563，即非特异吸附结合的值。
[0123]
参见图5，实验组1：质谱得到的数据为106624.8。
[0124]
对照组和实验组1有明显的区别，即在相同浓度醛固酮投入下，偶联有适配体的磁珠与裸磁珠相比，偶联有适配体的磁珠上的适配体能特异性的和醛固酮结合，从而富集，可以证明实施例1适配体能起到富集的作用。
[0125]
参见图5-10，实验组2-实验组6的质谱图，可以看出明显的峰型，且质谱得到的数据有明显的线性，将投入的醛固酮浓度和富集下来洗脱上机的质谱数据进行拟合，参见表5与图11所示。
[0126]
表5.拟合数据
[0127][0128]
该实施案例得到的线性曲线，r2趋向于1，线性良好，可以将本实施例运用到质谱。
[0129]
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

技术特征：

1.特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，包括seq id no.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与seq id nos.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。3.根据权利要求1或2所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持所述亲和力。4.根据权利要求1或2所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持所述亲和力。5.根据权利要求4所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。6.根据权利要求1或2所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持所述亲和力。7.根据权利要求6所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、性标记物、生物素标记物、标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、sirna标记物或酶标记物。8.特异性结合醛固酮的核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是由权利要求1-7任一项所述核酸适配体的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是由权利要求1-7任一项所述核酸适配体改造成的相应肽核酸。9.权利要求1-7任一项所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体或权利要求8所述的核酸适配体衍生物的应用，其特征在于，利用所述核酸适配体或者所述核酸适配体衍生物检测醛固酮。10.检测醛固酮的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的特异性结合醛固酮的核酸适配体或者权利要求8所述的核酸适配体衍生物。

技术总结

本发明公开了特异性结合醛固酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合醛固酮的核苷酸序列。本发明提供了一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合醛固酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。配体的筛选方法与应用。配体的筛选方法与应用。