多发性骨髓瘤相关障碍的抗ICAM-1抗体

多发性骨髓瘤相关障碍的抗ICAM-1抗体

技术领域

本发明涉及对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对 ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生 物用于多发性骨髓瘤相关障碍的用途。本发明还涉及给予这些抗体、其 片段、变体、融合体和衍生物的方法。

多发性骨髓瘤(也称为骨髓瘤或MM)是B细胞的恶性肿瘤并占总的血 液恶性肿瘤的10％至20％。目前，其是一种不能治愈的疾病，诊断时的中位 数年龄为65-70岁，诊断的极少数患者在40岁以下。在美国，预期在2008 年有19,920例多发性骨髓瘤的新病例和超过10,000例死亡是骨髓瘤相关的 (American Cancer Society,2008)。该疾病具有轻微的男性优势，并且发现在 非裔美国人中更频繁，而在亚洲人体中不那么普遍(Kyle&Rajkumar, Blood.2008Mar15；111(6):2962-72.综述)。

已知许多障碍与多发性骨髓瘤相关(在其临床表现及其分子和生理基础 方面)，但是其是可以与多发性骨髓瘤区分的不同障碍。例如，像由克隆浆 细胞障碍引起或其特征为克隆浆细胞障碍的许多这样的相关障碍的多发性 骨髓瘤，和患有这样的障碍的患者可以显示已知在多发性骨髓瘤中出现的一 种或多种症状。因此这样的相关障碍可以独立地由多发性骨髓瘤引起，或可 以与多发性骨髓瘤同时存在(并在多发性骨髓瘤形成之前或之后形成)。因 此，患者可以与多发性骨髓瘤同时或与多发性骨髓瘤无关地患有这样的多发 性骨髓瘤相关障碍。

三种这样的多发性骨髓瘤相关障碍为浆细胞瘤(PC)；浆细胞白血病 (PCL)；和轻链淀粉样变性(AL)。目前对多发性骨髓瘤没有真正有效的治 疗，因此，任何目前的多发性骨髓瘤也不提供对多发性骨髓瘤相关障碍 如PC、PCL和AL的有效。实际上，目前的对多发性骨髓瘤相关障碍 的依赖于仅障碍的症状(例如，使用止痛剂)，而不多发性骨 髓瘤相关障碍本身。

本发明提供了用于多发性骨髓瘤相关障碍的方法。

在第一个方面中，本发明提供了：

一种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对 ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生 物，或其所述变体或衍生物的融合体，其用于多发性骨髓瘤相关障碍， 所述包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融 合体或衍生物以多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。

在第二个方面中，本发明提供了：

一种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对 ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生 物，或其所述变体或衍生物的融合体在制备用于多发性骨髓瘤相关障碍 的药物中的用途，所述包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结 合片段、变体、融合体或衍生物以多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。

在第三个方面中，本发明提供了：

一种用于患者中的多发性骨髓瘤相关障碍的方法，所述方法包括 给予需要其的患者有效量的以下物质的步骤：

对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，

或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合 体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体，

其中所述抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物的量对多 发性骨髓瘤相关障碍是有效的。

ICAM-1在恶性和非恶性细胞上高度表达并且通常作为二聚体存在于细 胞表面上。认为ICAM-1涉及细胞粘附到骨髓间质，并且认为在恶性细胞中 与耐药性的形成、血管生成和逃逸免疫监视相关。

WO2007/068485涉及能够结合在细胞表面上的ICAM-1并且诱导细胞 死亡的抗体(例如，通过诱导ADCC或细胞凋亡)。

如在所附实施例中所讨论的，本发明人现在惊讶地发现存在于患有多发 性骨髓瘤相关疾病的患者中的浆细胞表达ICAM-1。该意外的发现导致本发 明的发展，其涉及使用对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段 患者中的多发性骨髓瘤相关障碍。

如本领域技术人员将理解的，使用抗体可以提供在其靶向癌细胞并 且避开周围组织的能力内具有低毒性的优势。利用生理机制如自然杀伤 (NK)细胞介导的细胞死亡或直接诱导细胞凋亡而不是肿瘤细胞坏死，耐受 性可以反映免疫球蛋白的动力作用。

由于非癌性(即健康的)浆细胞还表达ICAM-1，靶向该分子也将降低 非癌性浆细胞在个体中的数量。这样的细胞可以再次由天然B细胞产生，所 述天然B细胞成熟和分化以代替已经被破坏的任何健康浆细胞。相反地，用 于多发性骨髓瘤的许多其他方法(如利妥昔单抗)杀死所有的CD20⁺细胞，导致个体中使健康浆细胞再生所需的天然B细胞的杀死。

因此，本发明提供了具有最小副反应的，因此提供了患有多发 性骨髓瘤相关障碍的个体的实用方式。

对于“多发性骨髓瘤相关障碍”，我们包括在其临床表现及其分子和生 理基础方面与多发性骨髓瘤相关的障碍，但是其是可以与多发性骨髓瘤不同 并且可以与其区分的障碍。例如，多发性骨髓瘤相关障碍可以由克隆浆细胞 障碍引起，或其特征为克隆浆细胞障碍，并且患有这样的障碍的患者可以显 示已知在多发性骨髓瘤中出现的一种或多种症状。多发性骨髓瘤相关障碍可 以独立地由多发性骨髓瘤引起，或可以与多发性骨髓瘤同时存在(并在多发 性骨髓瘤形成之前或之后形成)。因此，患者可以与多发性骨髓瘤同时或与 多发性骨髓瘤无关地患有这样的多发性骨髓瘤相关障碍。

如医药和肿瘤学领域的技术人员所熟知的，多发性骨髓瘤是源自转化 的浆细胞的恶性克隆疾病。疾病的明显特征是恶性细胞分泌IgG-或IgA-型 (少见IgD或IgE)，或仅有轻链(κ或λ)，或两者形式的单克隆免疫球蛋白 (Ig)。然而，单克隆免疫球蛋白(血液或尿液中)的发现不是强制性的，并 在小百分比的病例中，骨髓瘤被分类为“非分泌的”。

近年来，在理解多发性骨髓瘤的发病机理和分子机制方面已经取得了实 质性的进步。基因研究已显示通常带有预后相关性的大量不同的染体变化 的出现与该疾病相关。简言之，这些染体易位通常涉及免疫球蛋白(Ig) H基因座(14q32.3)，并且使多种转化基因与Ig增强子促进的片段并列，导 致异常调节表达和潜在的恶性转化(Hideshima等人.Nat Rev Cancer.2007. 7(8):585-598)。

对MM的诊断标准包括满足三个以下标准(Rajkumar(2011)American  Journal of Hematology86:57-65)：

-至少10％的克隆骨髓浆细胞

-血清和/或尿液单克隆蛋白的存在(除了在患有真非分泌性多发性骨髓 瘤的患者中)

-可以归因于潜在的浆细胞障碍的终末器官损伤的迹象(高钙血症、肾 功能不全、贫血、骨损伤)

在一个实施方案中，患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者不另外地患有多 发性骨髓瘤。

优选地，本发明提供了用途和方法，其中多发性骨髓瘤相关障碍选自包 括以下或由以下组成的组：浆细胞瘤(PC)；浆细胞白血病(PCL)；轻链 淀粉样变性(AL)。

在一个实施方案中，患者患有一种或多种选自包括以下或由以下组成的 组的多发性骨髓瘤相关障碍：浆细胞瘤(PC)；浆细胞白血病(PCL)；轻 链淀粉样变性(AL)，并且患有该障碍的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。

因此，在一个优选的实施方案中，患有浆细胞瘤的患者不另外地患有 多发性骨髓瘤。在另一个优选的实施方案中，患有浆细胞白血病的患者不另 外地患有多发性骨髓瘤。在另一个优选的实施方案中，患有轻链淀粉样变性 的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。

如本领域技术人员所熟知的，浆细胞瘤(例如，孤立性浆细胞瘤(SP)) 是有症状的障碍，其特征为单克隆浆细胞在骨或髓外软组织中增殖，但没有 明显的骨髓浆细胞浸润的迹象。骨孤立性浆细胞瘤的特征为涉及任何部分的 骨骼的独特的损伤，最常见的是脊柱，并且最通常发展成多发性骨髓瘤或另 外的孤立性或多发性浆细胞瘤(WHO,2008)。SP通常通过放疗(优选地) 或手术切除(少见)来。

浆细胞瘤的诊断标准包括满足四个以下标准(Rajkumar(2011)American  Journal of Hematology86:57-65)：

-活检证明的骨或软组织的孤立性损伤，并具有克隆浆细胞的迹象

-正常骨髓，没有克隆浆细胞的迹象

-脊柱和骨盆的正常骨骼检查和MRI(除了原发性孤立性损伤以外)

-不存在可以归因于淋巴瘤-浆细胞增生性障碍的终末器官损伤，如高钙 血症、肾功能不全、贫血或骨损伤(CRAB)

浆细胞瘤患者还通常地显示在血清和/或尿液中无M组分。然而，可以 有时出现小量的M组分(小于30g/l)(“Myelom utredning och behandling, nationella riktlinjer,diagnosgruppen for plasmacellssjukdomar”(“Myeloma  Diagnosis and Treatment,National Guidelines and Diagnosis Group for Plasma  Cell Disorders”),于2010年2月28日出版于瑞典，于2011年2月28日修订, 可得自SvenskHematologi(Swedish Society of Hematology, www.sfhem.se),例如，可得自 www.sfhem.se/content/download/3182/52091/file/Myelom％20riktlinjer％20versi  on％2020100228.pdf，自2011年9月起)。

M组分是包含一个或多个抗体链(如重链或轻链，或两者)的蛋白， 并且由浆细胞产生并分泌。用于检测M组分在个体中存在的方法为本领域 技术人员熟知，并且包括血清和/或尿液电泳法或免疫固定法(或相关的免疫 化学方法)。用于检测M组分的示例性的方法描述于：National Comprehensive  Cancer Network(NCCN)Clinical Practice Guidelines in Oncology:Multiple  Myeloma.V.1.2008,National Comprehensive Cancer Network,Inc.2005/2006。

如本领域技术人员所熟知的，浆细胞白血病(PCL)是一种罕见的然而 侵略性的浆细胞肿瘤，其特征为高水平的浆细胞在外周血中循环。PCL可以 从头(de novo)起源(称为“原发性PCL”)或作为多发性骨髓瘤的继发性 白血病转化(称为“继发性PCL”)。呈现的体征和症状与在多发性骨髓瘤中 所见的那些相似，如肾功能不全、高钙血症、溶解性骨损伤、贫血和血小板 减少，但是还可以包括肝肿大(肝增大)和脾肿大(脾增大)。

疑似患有PCL的患者的诊断评价应包括外周血涂片的检查、骨髓抽吸 和活检、具有免疫固定的血清蛋白电泳(SPEP)和来自24h尿液收集的等分 蛋白电泳(UPEP)。当PC的单克隆体以超过2000/μL的绝对PC计数存 在于外周血中，并且PC包含20％或更多的外周血白细胞时，可以作出诊断。 PCL的预后较差，中位生存期为7到11个月。

通常，使用诱导疗法，接着在对该方法适合的候选者中进行造血细胞移 植(HCT)患者。对PCL的最佳诱导方案不是已知的，并且在临床实 践中具有较大的可变性。加入针对多发性骨髓瘤的前线和挽救疗法中的更新 的药剂已显示在PCL中的活性，如免疫调节剂和不同组合的硼替佐米的使 用。

如本领域技术人员所熟知的，轻链淀粉样变性(AL)是克隆性但非增 生性浆细胞障碍，其中Ig轻链的片段沉积在组织中。临床特征取决于所涉 及的器官但是可以包括限制性心肌病、肾病综合症、肝衰竭和外周/自主神经 病变。AL是由免疫球蛋白轻链的纤维状聚集物的病理性沉积引起的重度的 并通常致命的病症。淀粉样变性通常显示在器官如肾脏、心脏、皮肤、神经 系统中和软组织(如舌)中(Merlini和Belotti,2003,NEJM,349:583-596)， 并且可以导致器官衰竭。器官衰竭通常涉及心脏和肾脏，分别导致重度的心 律失常或心力衰竭和肾病综合症。

使用刚果红染显示具有苹果绿双折射的淀粉样蛋白沉积物的组织活 检是诊断所需的。不需要侵入性器官活检，因为在85％的患者中，可以在骨 髓活检或皮下脂肪抽吸物中发现淀粉样蛋白沉积物。N-末端脑钠肽前体和血 清肌钙蛋白T值用于将患者分成大小大致相等的三组；中位生存期分别为 26.4、10.5和3.5个月。

AL的诊断标准包括满足四个以下标准(Rajkumar(2011)American  Journal of Hematology86:57-65)：

-淀粉样蛋白相关的全身性症状的存在(如涉及肾脏、肝脏、心脏、胃 肠道或外周神经)

-在任何组织中通过刚果红的阳性淀粉样蛋白染(例如，脂肪抽吸、 骨髓或器官活检)

-通过直接检查淀粉样蛋白建立的淀粉样蛋白为轻链相关的证据(可能 使用基于质谱的蛋白质组学分析，或免疫电子显微镜)

-单克隆浆细胞增生性障碍的证据(在骨髓中的血清或M蛋白、异常游 离轻链比或克隆浆细胞)，(2-3％的患有AL的患者将无法满足该要求，因此 必须谨慎诊断)。

对于淀粉样变性，已使用标准骨髓瘤疗法(如在Comenzo,Blood.2009. 114,3147-3157中讨论的)，但结果不如在骨髓瘤患者中的结果，这被认为是 由于淀粉样变性的器官功能受损。心脏的淀粉样变性是该病症的最可怕的现 象，除了选择心脏移植的极少病例外，其一直被认为是无法挽回的致命疾病 (<1年)。

如以上所讨论的，目前还没有针对多发性骨髓瘤相关障碍真正有效的治 疗，并且目前的依赖于仅障碍的症状(例如，使用止痛药)，而不 多发性骨髓瘤相关障碍本身。因此，存在对涉及患有多发性骨髓瘤相关 障碍如PC、PCL和AL的个体的新的明确需要。该需要是通过本发明 解决的，其提供了对多发性骨髓瘤相关障碍本身的，而没有与目前的治 疗相关的副作用。

PC、PCL和AL的临床和生化特征的细节，和用于确定PC、PCL和AL 以及用于确定那些障碍的特征标准的适合的测试和分析是医学领域中的技 术人员已知的，并如上所述和在例如Rajkumar(2011)American Journal of  Hematology86:57-65和Albarracin and Fonseca(2011)Blood Reviews25: 107-112中描述。

在一个实施方案中，本发明提供了抗体、用途或方法，其中患有多发性 骨髓瘤相关障碍的患者另外地患有多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者选自包括以下或 由以下组成的组：浆细胞瘤；浆细胞白血病；轻链淀粉样变性，并且该患 者另外地患有多发性骨髓瘤。

对于“另外地患有多发性骨髓瘤”，我们包括患有多发性骨髓瘤相关障 碍的患者另外地患有(即，遭受)多发性骨髓瘤的情况。由于除了多发性骨 髓瘤外，他们另外地患有(即，遭受)多发性骨髓瘤相关障碍，因此这样的 患者代表多发性骨髓瘤患者的亚组。

在一个优选的实施方案中，患者患有浆细胞瘤和多发性骨髓瘤。

在一个进一步优选的实施方案中，患者患有浆细胞白血病和多发性骨髓 瘤。

在一个进一步优选的实施方案中，患者患有轻链淀粉样变性和多发性骨 髓瘤。

如以上所讨论的，由于多发性骨髓瘤相关障碍的症状和临床表现可以区 分于多发性骨髓瘤，因此本领域技术人员将能够鉴定患有多发性骨髓瘤相关 障碍(如一种或多种浆细胞瘤、浆细胞白血病和轻链淀粉样变性)和多发性 骨髓瘤本身两者的患者。

但应当理解，患有多发性骨髓瘤和多发性骨髓瘤相关障碍两者的患者的 亚组具有特别严重和晚期的医学病症和不良预后。

例如，虽然单独的浆细胞白血病的预后较差(具有7至11个月的中位 存活时间，如以上所讨论的)，但是当浆细胞白血病发生在多发性骨髓瘤的 情况下时，患者的存活期更短(2至7个月)。因此，患有浆细胞白血病和多 发性骨髓瘤两者的患者代表患有特别侵略性的浆细胞障碍的患者亚组，其与 比仅存在多发性骨髓瘤的患者更差的预后和更短的存活时间相关(参见，例 如，Albarracin和Fonseca(2011)Blood Reviews25:107-112)。

同样地，轻链淀粉样变性见于10-15％的患有多发性骨髓瘤的患者，并 且该亚组的患者(即患有轻链淀粉样变性和多发性骨髓瘤两者的患者)被认 为与多发性骨髓瘤的晚期形式一致(“Myelom utredning och behandling, nationella riktlinjer,diagnosgruppen for plasmacellssjukdomar”2010,2011年修 订，如以上所讨论的)。

浆细胞瘤是一种由非典型浆细胞组成的肿瘤块。与多发性骨髓瘤相关的 浆细胞瘤的发病在诊断时为7％到17％，并且在疾病的过程中为6％至20％。 在这两种情况下，髓外疾病的发生与较差的预后始终相关。髓外复发或进展 发生在各种临床情况和环境中，因此需要的个体化(“Multiple myeloma  with extramedullary disease”,Oriol A.(2011)Adv.Ther.,增刊7:1-6)。

本发明是特别有利的，因为其提供了适用于以上所讨论的患有特别严重 的和侵略性的疾病形式的患者亚组的。如所附实施例所讨论的，发明人 惊讶地发现存在于患有多发性骨髓瘤相关疾病(如浆细胞瘤、浆细胞白血病 和轻链淀粉样变性)的患者中的浆细胞表达ICAM-1，这提供了用于这 些障碍的方法。

先前的方法已经了这样的患者亚组所产生的症状，但未潜在的 障碍本身，导致了非常差的预后和短的生存期。事实上，在一些情况下，这 样的患者亚组已经可以被视作患有已经被认为不值得使用常规疗法的 这样的重度疾病。

对于“”，我们包括受试者/患者的性和预防性。术语“预 防性”用于包括本文所述的抗体、药物或组合物的用途，其防止或降低个体 中的病症或障碍(如多发性骨髓瘤相关障碍)的发生或发展的可能性。

对于“抗体”，我们包括基本上完整的抗体分子，以及嵌合抗体、人源 化抗体、人抗体(其中至少一个氨基酸相对于天然存在的人抗体发生突变)、 单链抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同源 二聚体和异源二聚体和抗原结合片段及其衍生物。

术语“抗体”还包括所有类型的抗体，包括IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 因此，该抗体可以是IgG分子，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4分子。优选地， 本发明的抗体是IgG分子或抗原结合片段或其变体、融合体或衍生物。

本发明的方法和用途包括所限定抗体及其抗原结合片段的变体、融合体 和衍生物，以及所述变体或衍生物的融合体，只要这样的变体、融合体和衍 生物对ICAM-1具有结合特异性。

由于抗体及其抗原结合片段包括一种或多种多肽组分、如本文所定义的 抗体及其抗原结合片段的变体、融合体和衍生物可以使用重组多核苷酸，使 用本领域熟知的蛋白质工程和位点定向诱变的方法来制备(参见例如， Molecular Cloning:a Laboratory Manual,3rd edition,Sambrook&Russell, 2001,Cold Spring Harbor Laboratory Press,将其引入本文作为参考)。

因此，如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的变体、融合体和衍生物， 可以基于抗体或其抗原结合片段的多肽组分来制备。

对于“融合体”，我们包括融合到任何其它多肽的所述多肽。例如，所 述多肽可以被融合到多肽，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或蛋白A，以便促 进纯化所述多肽。这样的融合体的实例是本领域技术人员熟知的。类似地， 所述多肽可以被融合到一个寡组氨酸标签如His6或融合到由抗体识别的表 位，如熟知的Myc-标签的表位。融合到所述多肽的任何变体或衍生物也包 括在本发明的范围内。将理解的是，优选保留了希望的性质的融合体(或变 体或其衍生物)，如对ICAM-1具有结合特异性的融合体。

融合体可以包括另外的部分或由另外的部分组成，所述另外的部分赋予 所述多肽希望的特征，例如，该部分可以在检测或分离多肽，或促进多肽的 细胞吸收中是有用的。所述部分可以为例如生物素部分、放射性部分、荧光 部分，例如，如本领域技术人员熟知的小的荧光团或绿荧光蛋白(GFP) 荧光团，。该部分可以是免疫原性标签，例如Myc-标签，如本领域技术人员 已知的，或可以是亲脂性分子或多肽结构域，其能够促进多肽的细胞吸收， 如本领域技术人员已知的。

对于所述多肽的“变体”，我们包括保守的或非保守的插入、缺失和替 换。特别地，我们包括多肽的变体，其中这样的变化基本上不改变所述多肽 的活性。特别地，我们包括多肽的变体，其中这样的变化基本上不改变对 ICAM-1的结合特异性。

多肽变体的氨基酸序列可以与以上给出的一个或多个氨基酸序列具有 至少75％的同一性，例如与以上指定的一个或多个氨基酸序列具有至少 80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％ 的同一性。

两个多肽之间的百分比序列同一性可以使用适合的计算机程序，例如威 斯康辛大学遗传计算组(University of Wisconsin Genetic Computing Group) 的GAP程序来确定，并且可以理解，百分比同一性的计算与其序列已被最 佳地比对的多肽相关。

比对可以供选择地使用Clustal W程序进行(如在Thompson等人的1994, Nucl.Acid Res.22:4673-4680种所述，将其引入本文作为参考)。

使用的参数可以如下所示：

-快速成对比对参数：K-元组(字)大小；1，窗口大小；5，空位罚分； 3，顶级对角线数量；5，评分方法：百分之x。

-多重比对参数：空位开放罚分；10，空位延伸罚分；0.05。

-评分矩阵：BLOSUM。

供选择地，BESTFIT程序可用于确定局部序列比对。

用于本发明的方法或用途的抗体、抗原结合片段、变体、融合体或衍生 物可以包括经修饰或衍生化的一个或多个氨基酸或由经修饰或衍生化的一 个或多个氨基酸组成。

一个或多个氨基酸的化学衍生物可通过与官能侧基反应来实现。这样衍 生化的分子包括，例如其中游离氨基已被衍生化以形成胺盐酸盐，对甲苯磺 酰基、羧基苄氧基(carboxybenzoxy group)、叔丁氧羰基、氯乙酰基或甲酰 基的那些分子。游离羧基可以被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其它类型的 酯和酰肼。游离羟基可以被衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。还作为 化学衍生物包括的是那些肽，其含有20种标准氨基酸的天然存在的氨基酸 的衍生物。例如：4-羟基脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟赖氨酸可以取代赖氨 酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸和鸟氨酸可以 取代赖氨酸。衍生物还包括含有一种或多种添加或缺失的肽，只要所需的活 性被维持即可。其它包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如，乙酰化或 巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如与氨或甲胺)等末端修饰。

本领域技术人员将进一步理解的是，模拟肽化合物(peptidomimetic  compound)也可以是有用的。因此，对于“多肽”，我们包括能够结合ICAM-1 的拟肽化合物。术语“模拟肽”是指模拟作为剂的特定的肽的构象和希 望的特征的化合物。

例如，所述多肽不仅包括其中氨基酸残基被肽(-CO-NH-)键连接的分 子，还包括其中肽键反转的分子。这样的逆反模拟肽可以使用本领域中已知 的方法制备，例如在Meziere等人的(1997)J.Immunol.159,3230-3237中描述 的那些，将其引入本文作为参考。该方法涉及使伪肽含有涉及主链的变化， 而不是侧链的定向。含有NH-CO键代替CO-NH肽键的逆反肽对蛋白水解 抗性更强。供选择地，所述多肽可以是模拟肽化合物，其中一个或多个氨基 酸残基是由-y(CH₂NH)-键代替常规的酰胺键连接的。

在另一个供选择的方案中，肽键可以完全免去，只要使用在氨基酸残基 的碳原子之间保留间隔的合适的接头部分；其可能对接头部分是有利的，以 具有与肽键基本相同的电荷分布和基本相同的平面性。

将理解的是，所述多肽可以方便地在其N-或C-末端封闭，从而有助于 降低对外切蛋白水解消化的敏感性。

各种未编码的或修饰的氨基酸，如D-氨基酸和N-甲基氨基酸也已被用 来修饰哺乳动物的肽。另外，推定的生物活性构象可通过共价修饰例如环化 来稳定，或通过加入内酰胺或其它类型的桥来稳定，例如参见Veber等人， 1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA75:2636和Thursell等人，1983,Biochem. Biophys.Res.Comm.111:166，将其引入本文作为参考。

在众多的合成策略中的一个共同主题已经是将一些环部分引入基于肽 的框架中。环部分限制肽结构的构象空间，这经常导致肽对特定生物受体的 特异性增加。该策略的一个附加的优点在于，将环部分引入肽还可以导致产 生对细胞肽酶具有减弱的敏感性的肽。

因此，在本发明的方法和用途中有用的示例性的多肽包括末端半胱氨酸 氨基酸或由末端半胱氨酸氨基酸组成。这样的多肽可以通过在末端半胱氨酸 氨基酸中的硫醇基的二硫键形成以杂环形式存在，或通过在末端氨基酸之间 的酰胺肽键形成以均环形式存在。如上所示，通过N-和C-末端半胱氨酸之 间的二硫键或酰胺键来环化小肽可以通过减少蛋白水解并且还增加结构的 刚性来规避有时在线性肽中观察到的特异性和半衰期问题，这可以产生更高 特异性的化合物。通过二硫键环化的多肽具有游离氨基和羧基末端，其仍然 容易发生蛋白水解降解，而通过在N-末端氨基和C-末端羧基之间形成酰胺 键而环化的肽因此不再含有游离的氨基或羧基末端。因此，该肽可以通过 C-N键合或二硫化物键合。

本发明不以任何方式受限于肽的环化方法，而是包括其环状结构可以通 过任何合适的合成方法来实现的肽。因此，杂键可包括但不限于通过二硫化 物、亚烷基或硫化物桥形成。均环肽和杂环肽，包括二硫化物、硫化物和亚 烷基桥的合成方法公开于US5,643,872，将其引入本文作为参考。环化方法 的其他实例讨论并公开于US6,008,058，将其引入本文作为参考。

合成环稳定化模拟肽化合物的另外的方法是闭环复分解(RCM)。该方 法涉及合成肽前体并使其与RCM催化剂接触以产生构象限制的肽的步骤。 适合的肽前体可以包含两个或多个不饱和的C-C键。该方法可以采用固相肽 合成技术来进行。在该实施方案中，被固定到固体支持物的前体与RCM催 化剂接触，然后将产物从固体支持物上裂解以产生构象限制的肽。

由D.H.Rich在Protease Inhibitors,Barrett and Selveson,eds.,Elsevier (1986)中公开的另一种方法已经通过在酶抑制剂设计中的过渡态类似物概念 的应用来设计肽模拟物(peptide mimic)，将其引入本文作为参考。例如，已 知辛伐他汀(staline)的仲醇模拟胃蛋白酶底物的易断裂的酰胺键的四面体 过渡态。

总之，如所熟知的，末端修饰在降低对蛋白酶消化的易感性方面是有用 的，因此在延长肽在溶液中特别是在蛋白酶可能存在的生物流体中的半衰期 方面是有用的。多肽环化也是有用的修饰，这是因为通过环化所形成的稳定 结构并鉴于观察到的环肽的生物活性。

因此，在一个实施方案中，所述多肽是环状的。然而，在供选择的实施 方案中，所述多肽是线性的。

对于“对ICAM-1的结合特异性”，我们是指能够选择性地结合到ICAM-1 的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物。对于“能够选择性 地结合”，我们包括这样的抗体衍生的结合部分，其对ICAM-1的结合比对 另外的蛋白的结合强至少10倍；例如强至少50倍，或强至少100倍。结合 部分可以能够在生理条件下如在体内选择性地结合到ICAM-1。

这样的结合特异性可以通过本领域熟知的方法，如酶联免疫吸附试验 (ELISA)、免疫组化、免疫沉淀、蛋白质印迹和流式细胞术，使用表达ICAM-1 的转染的细胞来确定。用于测量相对结合强度的适合的方法包括免疫分析， 例如其中所述结合部分是抗体(参见Harlow和Lane，“Antibodies:A  Laboratory Manual”,Cold Spring Habor Laboratory Press,New York，将其引入 本文作为参考)。供选择地，结合可以使用竞争性分析或使用分析 (Biacore International AB,Sweden)进行评估。

在另一个实施方案中，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍 生物仅结合到ICAM-1。

本领域技术人员将理解，抗体或其抗原结合片段的结合特异性是由构成 重链和轻链的可变区中的互补决定区(CDR)的存在赋予的。如以下讨论的， 在一个特别优选的本文所定义的抗体和其抗原结合片段、变体、融合体和衍 生物的实施方案中，对ICAM-1的结合特异性是由本文被鉴定为SEQ ID  NOS:1至6的6个CDR中的一个或多个的存在赋予的。

在一个优选的实施方案中，本文定义的抗体或其抗原结合片段、或抗体 的变体、融合体或衍生物保留了原始抗体对ICAM-1的结合特异性。对于“保 留了结合特异性”，我们是指如本文定义的抗体或其抗原结合片段、或变体、 融合体或衍生物能够与本发明的示例性抗体(称为BI-AB，参见所附的实施 例)竞争结合于ICAM-1。例如，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体 或衍生物可以与包括CDR或由CDR组成的抗体结合于ICAM-1上的相同表 位，所述CDR鉴定为SEQ ID NOS:1至6。

对于“表位”，在本文中意图是指抗体结合的分子位点，即抗原的分子区 域。表位可以是由例如抗原的氨基酸序列(即一级结构)确定的线性表位， 或由抗原的二级结构(例如肽链折叠成β折叠或α螺旋)或由抗原的三级结 构(例如螺旋或折叠被折叠或排列以得到三维结构的方式)限定的三维表位。

用于确定测试抗体是否能够与第二抗体竞争结合的方法在本领域是熟 知的(例如，夹心ELISA或反向夹心ELISA技术)并且描述于，例如， Antibodies:A Laboratory Manual,Harlow&Lane(1988,CSHL,NY,ISBN 0-87969-314-2)，将其引入本文作为参考。

对ICAM-1具有结合特异性的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合 体或衍生物也可以保留与原始抗体(如示例性抗体，BI-AB)相同的一种或 多种生物学性质。

细胞间粘附分子-1(“ICAM-1”，也称为CD54)是一种80-114kDa的糖 基化的细胞表面的跨膜蛋白，其由五个免疫球蛋白结构域、一个跨膜结构域 和一个短的胞质结构域组成。

ICAM-1充当白细胞功能相关抗原-1(CD11a/C418)的配体，并且还另 外地结合Mac-1(CD11b/CD18)、CD43、MUC-1、鼻病毒和纤维蛋白原。 ICAM-1的主要功能是将白细胞向炎症部位募集，而ICAM-1还参与了其它 的细胞-细胞粘附和细胞活化、细胞信号传导、细胞迁移和细胞侵袭(Rosette 等人，Carcinogenesis26,943-950(2005)；Gho等人，Cancer Res59,5128-5132 (1999)；Gho等人，Cancer Res61,4253-4257(2001)；Chirathaworn等人，J Immunol168,5530-5537(2002)；Berg等人，J Immunol155,1694-1702(1995)； Martz,Hum Immunol18,3-37(1987)；Poudrier和Owens，J.Exp.Med.179, 1417-1427(1994)；Sun等人，J Cancer Res Clin Oncol125,28-34(1999)； Springer,Cell76,301-314(1994)；Siu等人，J Immunol143,3813-3820(1989)； Dang等人，J Immunol144,4082-4091(1990)；Damle等人，J Immunol151, 2368-2379(1993)；Lane等人，J Immunol147,4103-4108(1991)；Ybarrondo 等人，J Exp Med179,359-363(1994))。

ICAM-1在这些过程中的重要性是复杂的，并已成为大量研究的主题。 最常见的ICAM-1缺陷，无论是遗传消融、siRNA给予还是功能阻断抗体赋 予的，已显示通过以不同的程度降低或延缓细胞迁移和活化来干扰白细胞外 渗和募集到炎症位点(Reilly等人.J Immunol155,529-532(1995)；Kim等人.J  Immunother(1997)30,727-739(2007)；Smallshaw等人,J Immunother27, 419-424(2004)；Coleman等人,J Immunother29,489-498(2006)；Kawano等 人.Br J Haematol79,583-588(1991))。

ICAM-1在细胞表面上作为二聚体存在，而且还可以以W-形、环形或长 链的形式多聚(Springer,Cell76,301-314(1994)；Siu等人,J Immunol143, 3813-3820(1989))。因此，对于“ICAM-1”，我们包括分子的单体形式，和 ICAM-1单体的二聚体和多聚体，包括以W-形、环形或长链的形式的多聚体。

本领域技术人员将理解，ICAM-1可衍生自人类或非人类动物。在一个 实施方案中，ICAM-1是人类的。

如本文使用的“有效量”或“有效量”或“有效的”是指对给定的病 症和给药方案提供效果的量。这是经计算的活性物质用于产生与所需的 添加剂和稀释剂，即载体或给药溶媒相关的希望的效果的预定量。另外， 它意图是指足以减少或防止宿主的活动、功能和反应的临床上的显著缺陷的 量。供选择地，有效量足以引起在宿主中的临床显著病症的改善。

本发明的药剂(即抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物)、 药物和药物组合物可以使用可注射的缓释药物递送系统递送。这些是专门设 计的以降低注射频率。这样的系统的一个实例是Nutropin Depot，其将重组 人生长激素(rhGH)封装在生物可降解的微球中，所述微球一注射，其便在 持续的时期缓慢释放rhGH。优选地，递送在肌内(i.m.)和/或皮下(s.c.) 和/或静脉内(i.v.)进行。

本发明的药剂、药物和药物组合物可通过外科手术植入的装置给予，所 述装置直接将药物释放到所需部位。例如，Vitrasert将更昔洛韦直接释放到 眼部以CMV视网膜炎。直接将这种毒剂应用到疾病的部位可实现有效 的，而没有药物的显著的全身副作用。

优选地，本发明的药物和/或药物组合物是含有活性成分的每日剂量或单 位、每日亚剂量或其适当部分的单位剂量。

本发明的药剂、药物和药物组合物将通常以包含活性成分的药物组合物 的形式，任选地以无毒的有机或无机酸或碱、加成盐的形式，以药学上可接 受的剂型，通过非肠道途径给药。根据待的障碍和患者以及给药途径， 组合物可以以不同的剂量给药。

在人类中，本发明的药剂、药物和药物组合物可以单独给药，但通 常将与关于预期的给药途径和标准药物规范选择的合适的药物赋形剂、稀释 剂或载体混合给药。

本发明的药剂、药物和药物组合物可以肠胃外给药，例如，静脉内、动 脉内、腹膜内、鞘内、肌内或皮下给药，或它们可以通过输注技术给药。它 们最好以无菌水溶液的形式使用，在其中可以含有其他物质，例如足够的盐 或葡萄糖以使溶液与血液等渗。如果需要，水溶液应该进行适当的缓冲(优 选pH为3至9)。在无菌条件下制备合适的肠胃外制剂通过本领域技术人员 熟知的标准制药技术容易地实现。

适用于肠胃外给药的药物和药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶 液，所述注射液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使制剂与预 期接受者的血液等渗；以及水性和非水性无菌混悬剂，所述混悬剂可以包括 助悬剂和增稠剂。药物和药物组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中， 例如密封的安瓿和小瓶，并且可以存储在冷冻干燥的(冻干)条件下，其仅 需要在使用前加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬剂可 以由先前描述的无菌粉末、颗粒和片剂制备。

对于向人类患者肠胃外给药，本发明的药剂、药物和药物组合物的每日 剂量水平将通常是单次或分次剂量给予1μg至10mg每成人每天。在任何情 况下，医生将决定实际剂量，该剂量将是最适合任何个体患者的，并且会随 着具体患者的年龄、体重和反应变化。上述剂量是一般情况的范例。当然， 可以有其中应更高或更低的剂量范围的个别情况，这些都在本发明范围内。

通常地，本发明的药物和药物组合物将包含本发明的药剂，其浓度为约 2mg/ml至150mg/ml或约2mg/ml至200mg/ml。在一个优选的实施方案中， 本发明的药物和药物组合物将包含本发明的药剂，其浓度为10mg/ml。

通常，在人类中，本发明的药剂、药物和药物组合物的口服或胃肠外给 药是优选的途径，是最方便的。

对于兽药用途，本发明的药剂、药物和药物组合物是按照正常兽医规范 作为适合的可接受的制剂给药的，并且兽医将确定最适合于特定动物的给药 方案和给药途径。

因此，本发明提供了药物制剂，其包含有效各种病症的一定量的本 发明的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物(如以上和以下 进一步描述)。

优选地，药物组合物适合于通过选自以下的途径递送：静脉内；肌内； 皮下。

本发明还包括含有本发明的多肽结合部分的药学上可接受的酸或碱加 成盐的药物组合物。用于制备在本发明中有用的上述碱性化合物的药学上可 接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒的酸加成盐，即含有药理学上可接受的 阴离子的那些，其中所述盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸 盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠 檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸 盐、糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和 双羟萘酸盐[即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3萘甲酸盐)]。

药学上可接受的碱加成盐也可以用于制备根据本发明的药剂的药学上 可接受的盐的形式。

可以用作试剂以制备性质为酸性的本发明药剂的药学上可接受的碱盐 的化学碱是与这样的化合物形成无毒的碱盐的那些。其中，这样的无毒碱盐 包括但不限于衍生自这样的药理学上可接受的阳离子的那些，其中所述阳离 子如碱金属阳离子(例如钾和钠)和碱土金属阳离子(例如钙和镁)；铵或 水溶性胺加成盐，如N-甲葡糖胺(葡甲胺)；以及低级链烷醇铵和药学上可 接受的有机胺的其他碱盐。

本发明的药剂和/或多肽结合部分可以冻干用于储存并且在使用前复溶 (reconstituted)于合适的载体。可以采用任何合适的冻干方法(例如，喷雾 干燥法，粉块干燥(cake drying))和/或复溶技术(reconstitution technique)。 本领域技术人员将认识到冻干和复溶可以导致不同程度的抗体活性损失(例 如对于常规免疫球蛋白，IgM抗体倾向于具有比IgG抗体更大的活性损失)， 并且使用水平可能必须上调以补偿。在一个实施方案中，当重新水合时，(在 冷冻干燥前)冻干的(冷冻干燥的)多肽结合部分损失不超过其活性的约20 ％，或不超过约25％，或不超过约30％，或不超过约35％，或不超过约40 ％，或不超过约45％，或不超过约50％。

优选地，本发明提供了抗体、用途或方法，其中有效量的抗体、其抗原 结合片段、变体、融合体或衍生物为约0,0001mg/kg至50mg/kg的抗体、 其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物。

如由本领域技术人员所理解的，化合物的精确量可根据其比活度 (specific activity)而变化。合适的剂量可以含有经计算用于产生与需要的稀 释剂相关的希望的效果的预定量的活性组合物。在用于制备本发明的组 合物的方法和用途中，提供了有效量的活性成分。有效量可以由普 通熟练的医学或兽医工作者根据患者特征，如年龄、体重、性别、病症、并 发症、其它疾病等来确定，如本领域中已知的。

在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体 或衍生物结合的ICAM-1位于浆细胞的表面上。

对于“浆细胞”，我们包括衍生自分化的B细胞的克隆扩增并能够合成抗 体分子的细胞。

ICAM-1以较低水平组成性表达在血管内皮、上皮细胞、成纤维细胞、 角质细胞、白细胞以及常规的抗原呈递细胞(APC)上(综述于Roebuck和 Finnegan,J Leukoc Biol,66,876-888(1999))。细胞表面ICAM-1表达可以通 过几种细胞因子和促炎剂，如IFN-γ、TNF-α、脂多糖(LPS)、氧自由基或 缺氧诱导(Roebuck和Finnegan,J Leukoc Biol66,876-888(1999))。ICAM-1 可以另外地根据细胞类型通过蛋白水解或通过供选择的剪接从细胞中流出 (Dang等人,J Immunol144,4082-4091(1990)；Damle等人.J Immunol151, 2368-2379(1993)；Lane等人,J Immunol147,4103-4108(1991)；Ybarrondo等 人,J Exp Med179,359-363(1994))。

优选的是，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特 异性结合位于细胞表面上的ICAM-1，并抑制和/或防止该细胞的增殖。

对于“增殖”，我们包括单个细胞的生长和其分化为子细胞。用于测试 细胞增殖的合适分析(在体外和体内两者)是本领域已知的。

在一个实施方案中，所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或 衍生物能够特异性结合位于细胞表面上的ICAM-1，并诱导该细胞的凋亡。 认为细胞凋亡是由抗体结合于并交联位于细胞表面上的ICAM-1而引发的。

如所熟知的，细胞凋亡是细胞死亡的一种形式，其中事件的程序化顺序 导致细胞的消除而不将有害物质释放到周围环境中。在个体的正常运转过程 中，细胞凋亡在通过消除旧的、不必要的和/或不健康的细胞来发展并维持健 康中起着至关重要的作用。因此，对于细胞的“诱导凋亡”，我们是指该细胞 是通过细胞凋亡的诱导消除的。用于测量细胞凋亡的合适分析(在体外或体 内两者)是本领域已知的。

在本发明中，与多发性骨髓瘤相关障碍相关的或是多发性骨髓瘤相关障 碍的原因的浆细胞的凋亡将防止该障碍的持续。

在另一个实施方案中，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍 生物能够特异性结合于位于细胞表面上的ICAM-1，并诱导针对该细胞的抗 体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。

如所熟知的，ADCC是一种免疫应答，其中抗体结合到靶细胞，导致该 靶细胞被免疫系统消除。用于测量ADCC的合适分析(在体外和体内两者) 是本领域已知的。在本发明中，与多发性骨髓瘤相关障碍相关的或是多发性 骨髓瘤相关障碍的原因的ADCC介导的浆细胞的消除将防止该障碍的持续。

优选地，抗体或其抗原结合片段在多发性骨髓瘤相关障碍的中具有 功效。

优选地，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物包含完整抗 体或由完整抗体组成。供选择地，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合 体或衍生物可以基本上由完整抗体组成。对于“基本上由……组成”，我们是 指抗体或其抗原结合片段、变体、融合或衍生物由足以显示对ICAM-1的结 合特异性的一部分完整抗体组成。

在本发明的用途和方法的一个实施方案中，抗体是非天然存在的抗体。 当然，当抗体是天然存在的抗体时，它是以分离的形式(即，与其在自然界 中发现的不同)提供的。

在一个供选择的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段、或变体、融 合体或衍生物包含选自以下的抗原结合片段或由选自以下的抗原结合片段 组成：Fv片段；Fab片段；Fab样片段。

抗体的重链可变(V_H)和轻链可变(V_L)区参与抗原识别，这一事实首 先由早期的蛋白酶消化实验确认。进一步的确认由啮齿动物抗体的“人源化” 发现。啮齿动物来源的可变区可以融合到人来源的恒定区，使得产生的抗体 保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad. Sci.USA81,6851-6855)。

抗原特异性由可变区赋予并且独立于恒定区，如由涉及抗体片段的细菌 表达的实验已知的，所述抗体片段均含有一个或多个可变区。这些分子包括 Fab样分子(Better等人(1988)Science240,1041)；Fv分子(Skerra等人(1988) Science240,1038)；单链Fv(ScFv)分子，其中V_H和V_L伴侣区通过柔性寡 肽连接(Bird等人(1988)Science242,423；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad. Sci.USA85,5879)和包含分离的V区或由分离的V区组成的单域抗体(dAb) (Ward等人(1989)Nature341,544)。在保留其特异结合位点的抗体片段的合 成中涉及的技术的一般性综述见于Winter&Milstein(1991)Nature349, 293-299。

因此，对于“抗原结合片段”，我们包括能够结合于ICAM-1的抗体的 功能性片段。

示例性的抗原结合片段可以选自Fv片段(例如单链Fv和二硫化物键合 的Fv)，和Fab样片段(例如Fab片段、Fab'片段和F(ab)₂片段)。

在本发明的用途和方法的一个实施方案中，抗原结合片段是scFv。

使用抗体片段而非完整抗体的优点是多方面的。片段的较小尺寸可以导 致改善的药理学性质，如更好的固体组织的渗透。此外，抗原结合片段，如 Fab、Fv、ScFv和dAb抗体片段可以在大肠杆菌(E.coli)中表达并由大肠 杆菌分泌，因此允许容易地产生大量的所述片段。

本发明的范围还包括经修饰形式的抗体及其抗原结合片段版本，例如由 聚乙二醇或其它合适的聚合物的共价连接修饰的。

特别优选的是，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物是重 组分子。

生成抗体和抗体片段的方法是本领域熟知的。例如，抗体可通过数种方 法中的任一种生成，所述方法采用诱导体内抗体分子的产生、筛选免疫球蛋 白库(Orlandi等人,1989.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:3833-3837；Winter 等人,1991,Nature349:293-299)或通过在培养物中的细胞系生成单克隆抗体 分子。这些包括但不限于，杂交瘤技术、人B-细胞杂交瘤技术和EB病毒 (EBV)杂交瘤技术(Kohler等人,1975.Nature256:4950497；Kozbor等人, 1985.J.Immunol.Methods81:31-42；Cote等人,1983.Proc.Natl.Acad.Sci. USA80:2026-2030；Cole等人,1984.Mol.Cell.Biol.62:109-120)。

便利地，本发明提供了抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生 物，其中所述抗体是重组抗体(即，其中它是通过重组方法制备的)。

在一个特别优选的实施方案中，本发明提供了一种抗体、用途或方法， 其中所述抗体是单克隆抗体。

选择的抗原的合适的单克隆抗体可以通过已知技术制备，例如在 “Monoclonal Antibodies:A manual of techniques”,H Zola(CRC Press,1988)和 在“Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniques and Applications”,J G R  Hurrell(CRC Press,1982)中公开的那些，将其引入本文作为参考。

抗体片段也可以使用本领域熟知的方法获得(参见，例如，Harlow和 Lane,1988,“Antibodies:A Laboratory Manual”,Cold Spring Harbor  Laboratory，将其引入本文作为参考)。例如，用于本发明的方法和用途中的 抗体片段可以通过抗体的蛋白水解或通过编码该片段的DNA在E.coli或哺 乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其它蛋白表达系统)中的表达 来制备。供选择地，抗体片段可以通过常规方法通过完整抗体的胃蛋白酶或 木瓜蛋白酶消化而获得。

优选地，抗体或其抗原结合片段是人抗体或人源化抗体。

优选地，本发明提供了抗体、用途或方法，其中所述抗体或其抗原结合 片段是人抗体或人源化抗体。

本领域的技术人员将理解的是，对于人的或诊断，可以使用人源化 抗体。非人(例如鼠类)抗体的人源化形式是具有衍生自非人抗体的最小部 分的遗传工程改造的嵌合抗体或抗体片段。人源化抗体包括其中人抗体(受 体抗体)的互补决定区被来自具有希望的功能的非人类物种(供体抗体)诸 如小鼠、大鼠或兔的互补决定区的残基替代的抗体。在一些情况下，人抗体 的Fv框架残基被相应的非人残基替代。人源化抗体还可以包含那些发现既 不在受体抗体中也不在输入的互补决定区或框架序列中的残基。一般地，人 源化抗体将包含基本上所有的至少一个，通常两个可变区，其中所有或基本 上所有的互补决定区对应于非人抗体的互补决定区，并且所有或基本上所有 框架区对应于相关的人共有序列的框架区。人源化抗体任选地还包括至少一 部分抗体恒定区，例如Fc区，通常衍生自人抗体(参见，例如，Jones等人, 1986.Nature321:522-525；Riechmann等人,1988,Nature332:323-329；Presta, 1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596，将其引用本文作为参考)。

用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。一般地，人源化抗体具有 从非人来源引入到其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基，通 常被称为输入的残基，它们通常取自输入的可变区。人源化基本上可以如所 述地(参见例如，Jones等人,1986,Nature321:522-525；Reichmann等人,1988. Nature332:323-327；Verhoeyen等人,1988,Science239:1534-1536l；US 4,816,567,将引入本文作为参考)，通过将人的互补决定区用相应的啮齿动物 互补决定区取代来进行。因此，这样的人源化抗体是嵌合抗体，其中基本上 小于完整的人可变区已经被来自非人物种的相应序列取代。在实践中，人源 化抗体通常可以是其中一些互补决定区残基和可能的一些框架残基被来自 啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的人抗体。

人抗体还可以使用本领域中已知的多种技术，包括噬菌体展示文库来鉴 别(参见，例如，Hoogenboom和Winter,1991,J.Mol.Biol.227:381；Marks 等人,1991,J.Mol.Biol.222:581；Cole等人,1985,在:Monoclonal antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,pp.77；Boerner等人,1991.J.Immunol. 147:86-95,Soderlind等人,2000,Nat Biotechnol18:852-6和WO98/32845，将 其引入本文作为参考)。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的氨基酸序列中的 一个或多个或由以下的氨基酸序列中的一个或多个组成：

将理解的是，SEQ ID NO:1至6的氨基酸序列代表抗体的互补决定区 (CDR)。

如本文所使用，术语“氨基酸”包括标准的20个基因编码的氨基酸及 其相应的“D”形式的立体异构体中(相对于天然的“L”形式)、ω-氨基酸、 其它天然存在的氨基酸、非常规的氨基酸(例如，α,α-二取代的氨基酸、N- 烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸(参见以下)。

当氨基酸被具体列举时，如“丙氨酸”或“Ala”或“A”，该术语是指 L-丙氨酸和D-丙氨酸两者，除非另有明确说明。其它非常规氨基酸也可以是 用于本发明的多肽的适合的组分，只要多肽保留了希望的功能性质。对于所 示的肽，在适当情况下，每一个编码的氨基酸残基由单字母名称来表示，对 应于常规氨基酸的俗名。

在一个实施方案中，如本文所定义的多肽包含L-氨基酸或由L-氨基酸 组成。

优选地，抗体、片段、变体、融合体或衍生物的重链可变区包含以下 CDR或由以下CDR组成：

FSNAWMSWVRQAPG           [SEQ ID NO:1]；和

AFIWYDGSNKYYADSVKGR    [SEQ ID NO:2]；和

ARYSGWYFDY             [SEQ ID NO:3]。

在一个实施方案中，抗体、片段、变体、融合体或衍生物的重链可变区 包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLE WVAFIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYY CARYSGWYFDYWGQGTLVTVSS

                                 [SEQ ID NO:7]。

优选地，抗体、片段、变体、融合体或衍生物的轻链可变区包含以下的 CDR或由以下的CDR组成：

CTGSSSNIGAGYDVH         [SEQ ID NO:4]；和

DNNNRPS                 [SEQ ID NO:5]；和

CQSYDSSLSAWL            [SEQ ID NO:6]。

在一个实施方案中，抗体、片段、变体、融合体或衍生物的轻链可变区 包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成：

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPK LLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQSYDSSLS AWLFGGGTKLTVLG

                                 [SEQ ID NO:8]。

在一个特别优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段、变体、融合体 或衍生物包含如本文所定义的重链可变区和如本文所定义的轻链可变区或 由如本文所定义的重链可变区和如本文所定义的轻链可变区组成。

例如，抗体或抗原结合片段、变体、融合体或衍生物可以包括重链可变 区和轻链可变区或由重链可变区和轻链可变区组成，所述重链可变区包含 SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成，所述轻链 可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组 成。

如以上所讨论的，在一个优选的实施方案中，抗体、或其抗原结合片段、 或变体、融合体或衍生物能够与本发明的示例性抗体竞争结合于ICAM-1(称 为BI-AB；参见所附实施例)。例如，抗体、或其抗原结合片段、或变体、 融合体或衍生物可以结合于与包含鉴定为SEQ ID NOS:1至6的CDR或由 鉴定为SEQ ID NOS:1至6的CDR组成的抗体相同的ICAM-1上的表位。 用于测定测试抗体是否能够与第二抗体竞争结合的方法是本领域熟知的并 且在上面已经讨论过。

在一个实施方案中，本发明提供了如本文定义的抗体、用途或方法，其 中所述抗体或其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物能够与以下竞争结合 于ICAM-1：包含重链可变区和轻链可变区或由重链可变区和轻链可变区组 成的抗体或其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物，所述重链可变区包含 SEQ ID NO:1-3的CDR或由SEQ ID NO:1-3的CDR组成，所述轻链可变区 包含SEQ ID NO:4-6的CDR或由SEQ ID NO:4-6的CDR组成；或包含重链 可变区和轻链可变区或由重链可变区和轻链可变区组成的抗体或其抗原结 合片段、变体、融合体或衍生物，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基 酸序列或由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成，所述轻链可变区包含SEQ ID  NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成。

在一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段衍生自抗体库。 该库在(BioInvent International AB的)WO98/32845中进一步描述，并将其 引入本文作为参考。

一旦获得适合的抗体，便可以例如通过ELISA、免疫组化、流式细胞术、 免疫沉淀、蛋白质印迹等测试它们的活性，如抗体的结合特异性或生物活性。 生物活性可以在具有用于该特定特征的读出器的不同分析中测试。

在另一个方面中，本发明提供了包含如本文定义的药剂和药物组合物的 试剂盒。因此，可以提供用于性本文所定义的病症的试剂盒。

供选择地，所述试剂盒可以包含适用于诊断的、根据本发明的可检测的 抗体或其抗原结合片段或衍生物。这样的诊断试剂盒可以包括对至少一种分 析足量的诊断试剂作为单独包装的试剂。通常还包括用于使用包装试剂的说 明书。该说明书通常包括有形的表述，其描述了试剂浓度和/或至少一种分析 方法参数，如待混合的试剂和样品的相对量、试剂/样品混合物的维持时期、 温度、缓冲条件等。

如本文所使用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”以及“该(the)” 包括多个所指物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一种抗体” 包括多个这样的抗体，并且提及“剂量”包括提及本领域技术人员已知的一 个或多个剂量及其等同形式等。

优选的，现在将参考以下附图来描述体现本发明的某些方面的非限制性 实例：

图1：在Lund University Hospital,Sweden连续分析的患有浆细胞障碍的 患者队列中的BI-AB表位表达。

Pat no(患者编号)；M(男性)；F(女性)；Ig(M组分的免疫球蛋白 类别)；M comp(血清中的单克隆Ig组分)；Skel.destr(如通过X-射线测量 的骨骼破坏的数量)；n/a(不可用)；MM-细胞(来自多发性骨髓瘤相关障 碍的细胞，计数为骨髓涂片中所有有核细胞的％)；ISS(MM的国际分期系 统)；T(在BI-AB分析之前的不同MM方案的数量)；诊断；AL(淀 粉样轻链淀粉样变性)；PCL(浆细胞白血病)；PC(浆细胞瘤)；表达水平 (通过FACS对来自多发性骨髓瘤相关障碍的细胞测量的BI-AB表位表达水 平：+++(非常高度阳性)，++(高度阳性)；+(阳性)或–(阴性)；阳性 MM细胞(通过FACS测量的来自多发性骨髓瘤相关障碍的BI-AB表位阳性 细胞)。

图2：ICAM-1的结构(细胞间粘附分子-1)。

实施例

实施例1：实验数据

ICAM-1和BI-AB表位在多发性骨髓瘤相关障碍种强烈表达

我们通过流式细胞术评价了患有多发性骨髓瘤相关障碍(浆细胞瘤、浆 细胞白血病和轻链淀粉样变性)的患者中的骨髓细胞上的BI-AB表位的表达 (图1)。

根据对MM中的多参数流式细胞术的欧洲骨髓瘤网络指导(Rawstron 等人,2008)，使用针对以下表面抗原CD38、CD138、CD45和CD56的荧光 抗体鉴定来自多发性骨髓瘤相关障碍的细胞，并且使用λ和κ轻链的细胞内 染证实来自多发性骨髓瘤相关障碍的细胞。

所有患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者在来自多发性骨髓瘤相关障碍 的大多数细胞上表达BI-AB表位(图1)。BI-AB表位一般在这些细胞上非 常高度地表达，并且中位数表达水平比来自相同患者的正常B细胞上的中位 数表达水平高10倍。我们推断ICAM-1在来自多发性骨髓瘤相关障碍的浆 细胞的表面上强烈表达。

BI-AB抗体已经如前所述，例如在WO2007/112110中，并分别包括如 本文所定义的SEQ ID NO:7和8的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列(即， 其包含本文所定义的SEQ ID NO:1-6的CDR氨基酸序列)。

实施例2：示例性的药物制剂

虽然本发明的抗体可以单独给药，但优选将其作为药物或药物制剂与一 种或多种可接受的载体一起给药。载体(或多种载体)在与本发明的药剂相 容并且对其受体无害的意义上必须是“可接受的”。通常，载体将为水或盐 水，其将是无菌的并且无热原的。

以下实施例说明了根据本发明的药物和药物组合物，其中的活性成分是 本发明的抗体。

优选地，提供的本发明的抗体的量为每次给予0.1μg至1g。可以理解的 是，可以制备以下的示例性的药物和药物组合物，其含有的抗体的量为0.1μg 到1g。例如，抗体可以以第10或第100或第200或第500个所示的量存在 于以下的示例性的药物和药物组合物中，其余成分的量相应地变化。

实例A：注射制剂

活性成分          1mg

无菌、无热原的磷酸盐缓冲液(pH7.0)至10ml

将活性成分溶解在大部分磷酸盐缓冲液中(35-40℃)，然后补足体积并 通过无菌微孔过滤器过滤到无菌的10ml琥珀玻璃小瓶(1型)中，并用 无菌塞和顶封密封。

实施例B：肌内注射剂

将活性成分溶解在四氢呋喃聚乙二醇醚中。随后加入苯甲醇并溶解，加 水至3ml。然后将混合物通过无菌微孔过滤器过滤，并密封于无菌的3ml 玻璃小瓶(类型1)中。

实施例3-使用本发明的抗体、药物或药物组合物个体中的多发性 骨髓瘤相关障碍

将选择患有多发性骨髓瘤相关障碍的个体使用包含如本文所定义的抗 体的本发明的药物来，所述抗体优选地为示例性的抗体BI-AB。

将优选的是，药物选自在所附实施例中限定的那些。

本发明的药物的给药将通过肠胃外给药途径进行，剂量为约0.02mg/ml 至5mg/ml的抗体。

将以如下频率重复给药：每三星期一次至隔天一次，直到如将由本领域 的医生所认可的，多发性骨髓瘤相关障碍的症状得到缓解。