一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法

一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法

(一)技术领域：

本发明涉及一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法。属于微生物发酵领域。

(二)背景技术：

我国是养鸡古国，农业科技史表明，我国养鸡的历史至少已有8000多年了。我国又是养鸡大国，饲养量和禽蛋产量已经连续多年居世界第一位。

我国的养鸡业只要有两种形式：笼养和放牧养殖。

笼养条件下，鸡只能进行本能的采食、饮水、产蛋和睡觉。长期笼养使鸡处于一种烦躁、无奈甚至痛苦的状态，抗应激能力下降，疾病增多，无论是蛋鸡还是肉鸡，产品质量都差。

放牧养殖虽然有活动空间大、饲养密度小、空气环境好，鸡体质健壮、抵抗力强、产品质量高、风味佳等特点，但放牧养殖对土地面积、养殖环境有着比较高的要求，缺乏普遍推广的意义。

鸡粪是养鸡场的主要废弃物，随着我国规模化养鸡的兴起，无论是笼养还是放牧养殖，鸡粪的处理成为困扰养殖户和有关管理部门的大问题。鸡粪散发的氨和硫化氢等恶臭气体，使产蛋鸡患有呼吸道疾病，产蛋率大幅下降，若有其它鸡疾病蔓延，死亡率提高，都严重影响了鸡场的经济效益。目前普遍采用的畜禽粪便处理利用方式有干燥法、发酵法、产沼法和堆肥还田法，而鸡粪也因商品价值较低、含水量高、粘度大、杂质多、气味大等特点，很难从根本上实现处理的无害化和资源化。

我国的养鸡业，必需走生态、环保发展的道路，才能保护环境、节约资源，才能可持续发展，才能摆脱疫病药残的困扰，才能从根本上提高禽产品的安全，生产出绿有机食品。

以现代化微生物发酵技术为核心的微生物发酵床养鸡法，利用有益微生物菌将鸡粪充分分解、转化，臭味消失，从源头上解决了鸡粪的排放问题，同时垫料中大量生长繁殖的微生物又为鸡提供了有益菌、无机物和菌体蛋白质，不仅给鸡提供了舒适和相对大的活动空间，还能够提高鸡的免疫力、抗病力及饲料的利用率。微生物发酵床养鸡将生态环保和经济效益完美融合，利用了全新的自然农业理念和微生物发酵技术，实现了集约化养殖条件下的无抗、无污染、无臭气、零排放，彻底解决养鸡场的环境污染问题，是当前依靠科技、促进节能减排、提高经济效益的重要技术。

本发明的复合微生物菌剂，根据鸡粪分解原理、微生态平衡原理，选择安全可靠、高产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、抗菌素和菌体蛋白的有益菌种组合，菌种间共生互利、不拮抗。本发明的复合微生物菌剂采用液体发酵工艺制成，成品活菌含量高、生物活性高，易于稀释直接使用。

(三)发明内容：

本发明提供一种能够充分分解、转化鸡粪，避免臭味，并能产生大量的有益菌菌体蛋白质的复合微生物菌剂。本发明还提供一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂的制备方法。

本发明的技术方案是：

一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂，其体积百分比组成分别为康宁木霉15～30％，白地霉10～25％，产朊假丝酵母10～25％，植物乳杆菌10～30％，枯草芽孢杆菌10～25％，纳豆芽孢杆菌5～15％。采用液体发酵工艺制成，成品中发酵活菌总数为2～5×10⁹cfu/ml。

作为优选，其体积百分比组成分别为康宁木霉20％，白地霉15％，产朊假丝酵母15％，植物乳杆菌20％，枯草芽孢杆菌20％，纳豆芽孢杆菌10％。

本发明还提供一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂的制备方法，具体步骤如下：

1、冻干粉的活化：

分别量取0.9％的生理盐水10ml于6支试管内，经121℃灭菌20min后冷却至30℃，将6株菌安瓿瓶内的冻干粉末在无菌状态下分别倒入上述6支试管内，震荡使其溶解，在30℃恒温箱内静止活化30min，备用。

2、斜面菌种的制备：

在无菌条件下，将活化液接种于相应的试管斜面培养基中，康宁木霉28℃培养48h，白地霉28℃培养24h，产朊假丝酵母28℃培养48h，枯草芽孢杆菌30℃培养24h，植物乳杆菌37℃培养24h，纳豆芽孢杆菌30℃培养24h。制成试管斜面菌种，4～5℃冰箱冷藏保存备用。

3、种子液的制备：

(1)康宁木霉种子液的制备：将200ml浓度为5Brix的麦芽汁培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，28℃培养24h。

(2)白地霉种子液的制备：将200ml浓度为5Brix的麦芽汁培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，28℃培养24h。

(3)产朊假丝酵母种子液的制备：将200ml浓度为5Brix的麦芽汁培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，28℃培养24h。

(4)枯草芽孢杆菌种子液的制备：将200ml CM培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，30℃培养24h。

(5)植物乳杆菌种子液的制备：将200ml MRS培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，37℃培养24h。

(6)纳豆芽孢杆菌种子液的制备：将200ml CM培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，30℃培养24h。

4、发酵液的制备：

(1)康宁木霉发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁培养基30～50L，将康宁木霉种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养20～36h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(2)白地霉发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁培养基30～50L，将白地霉种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(3)产朊假丝酵母发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁培养基30～50L，将产朊假丝酵母种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(4)枯草芽孢杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入CM培养基30～50L，将枯草芽孢杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.3～0.8V/V·min，转速160～180rpm/min，30℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(5)植物乳杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入MRS培养基30～50L，将植物乳杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，37℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(6)纳豆芽孢杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入CM培养基30～50L，将纳豆芽孢杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.3～0.8V/V·min，转速160～180rpm/min，30℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

5、复合微生物菌剂的制备：

将步骤4得到的6株有益菌的发酵液，按体积百分比组成分别为康宁木霉15～30％，白地霉10～25％，产朊假丝酵母10～25％，植物乳杆菌10～30％，枯草芽孢杆菌10～25％，纳豆芽孢杆菌5～15％，混合既得本发明的一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂。

6、在步骤2～步骤4中所述的培养基配方分别为：

(1)康宁木霉、白地霉、产朊假丝酵母用培养基：浓度为5Brix的麦芽汁培养基，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

(2)枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌用CM培养基：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，调PH值7.0～7.2，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

(3)植物乳杆菌用MRS培养基：酪蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，葡萄糖0.5％，吐温800.1％(ml)，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.02％，硫酸锰0.005％，碳酸钙2％，调PH值6.5～6.8，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

(四)具体实施方式：

通过以下具体实施方式和具体实验例对本发明作详细说明，但本发明并不局限于此。

1、实施用培养及配方：

(1)康宁木霉、白地霉、产朊假丝酵母用培养基：浓度为5Brix的麦芽汁培养基，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

(2)枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌用CM培养基：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，调PH值7.0～7.2，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

(3)植物乳杆菌用MRS培养基：酪蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，葡萄糖0.5％，吐温800.1％(ml)，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.02％，硫酸锰0.005％，碳酸钙2％，调PH值6.5～6.8，如制成试管斜面需再加入15～20％的琼脂。

2、冻干粉的活化：

分别量取0.9％的生理盐水10ml于6支试管内，经121℃灭菌20min后冷却至30℃，将6株菌安瓿瓶内的冻干粉末在无菌状态下分别倒入上述6支试管内，震荡使其溶解，在30℃恒温箱内静止活化30min，备用。

3、斜面菌种的制备：

在无菌条件下，将活化液接种于相应的试管斜面培养基中，康宁木霉、产朊假丝酵母28℃培养48h，白地霉28℃培养24h，枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌30℃培养24h，植物乳杆菌37℃培养24h。制成试管斜面菌种，4～5℃冰箱冷藏保存备用。

4、种子液的制备：

(1)康宁木霉、白地霉、产朊假丝酵母种子液的制备：将200ml浓度为5Brix的麦芽汁培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作分别接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，28℃培养24h。

(2)枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌种子液的制备方法相同：将200ml CM培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作分别接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，30℃培养24h。

(3)植物乳杆菌种子液的制备：将200ml MRS培养基装入500ml三角瓶中，封口，经121℃灭菌20min后冷却。取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于三角瓶中，转速120～150rpm/min，37℃培养24h。

5、发酵液的制备：

(1)康宁木霉发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁培养基30～50L，将康宁木霉种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养20～36h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(2)白地霉发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁培养基30～50L，将白地霉种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(3)产朊假丝酵母发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入浓度为5Brix的麦芽汁 培养基30～50L，将产朊假丝酵母种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，28℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(4)枯草芽孢杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入CM培养基30～50L，将枯草芽孢杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.3～0.8V/V·min，转速160～180rpm/min，30℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(5)植物乳杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入MRS培养基30～50L，将植物乳杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.2～0.3V/V·min，转速120～150rpm/min，37℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

(6)纳豆芽孢杆菌发酵液的制备：在50L的发酵罐中装入CM培养基30～50L，将纳豆芽孢杆菌种子液按10％接种量接种，通气量为0.3～0.8V/V·min，转速160～180rpm/min，30℃培养12～24h，检测活菌数≥5×10⁸cfu/ml，视为发酵成熟，若活菌数≤5×10⁸cfu/ml，则继续培养至测活菌数≥5×10⁸cfu/ml。

6、复合微生物菌剂的制备：

(1)实施例一：将步骤5得到的6株有益菌的发酵液，按体积百分比组成分别为康宁木霉15～20％，白地霉10～18％，产朊假丝酵母10～15％，植物乳杆菌10～20％，枯草芽孢杆菌10～20％，纳豆芽孢杆菌5～10％，混合既得本发明的一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂，成品中发酵活菌总数为2～5×10⁹cfu/ml。

(2)实施例二：将步骤5得到的6株有益菌的发酵液，按体积百分比组成分别为康宁木霉20～30％，白地霉18～25％，产朊假丝酵母15～25％，植物乳杆菌15～30％，枯草芽孢杆菌20～25％，纳豆芽孢杆菌10～25％，混合既得本发明的一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂，成品中发酵活菌总数为2～5×10⁹cfu/ml。

(3)实施例三：将步骤5得到的6株有益菌的发酵液，按体积百分比组成分别为康宁木霉18～22％，白地霉13～16％，产朊假丝酵母13～16％，植物乳杆菌18～20％，枯草芽孢杆菌17～21％，纳豆芽孢杆菌9～12％，混合既得本发明的一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂，成品中发酵活菌总数为2～5×10⁹cfu/ml。

(4)实施例四：将步骤5得到的6株有益菌的发酵液，按体积百分比组成分别为康宁木霉20％，白地霉15％，产朊假丝酵母15％，植物乳杆菌20％，枯草芽孢杆菌20％，纳豆芽孢杆菌10％，混合既得本发明的一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂，成品中发酵活菌总数为2～5-×10⁹cfu/ml，此种配比比例作为优选。

7、具体实验效果例：

以下实验例中复合微生物菌剂均采用优选配比比例进行，即按体积百分比组成分别为康宁木霉20％，白地霉15％，产朊假丝酵母15％，植物乳杆菌20％，枯草芽孢杆菌20％，纳豆芽孢杆菌10％，混合，成品复合微生物菌剂中发酵活菌总数为2～5×10⁹cfu/ml。

(1)实验用鸡舍发酵床的制作：

对照组为普通笼养鸡舍，实验组提前五天制作发酵床。

发酵床制作方法：

①将秸秆切成3公分左右的段，铺30cm左右的厚度，撒上已铺秸秆用量5％的无污染的土，0.3％的盐，按用量为1L/m³喷撒复合微生物菌剂。

②将锯末铺10cm左右的厚度，撒水，至湿度为25～30％，具体可用手抓垫料来判断：垫料用手捏紧后松开，感觉蓬松且迎风有水气，说明湿度适宜-。

③将稻壳铺10cm左右的厚度，撒水，至湿度为25～30％，判断方法同上。再将锯末铺10cm左右的厚度，按用量为1L/m³喷撒复合微生物菌剂。

④用塑料薄膜覆盖铺好的垫料3天后，垫料会下沉10～20cm，检查10cm处垫料无臭味、异味，且有发热，去掉塑料薄膜，透气一天后，可用。

(2)实验操作：

①实验由专人负责。

②实验用鸡均为肉鸡，每组1000只鸡，对照组和实验组使用相同饲料。鸡自由采食、饮水。

③以组为单位，在第35日称重。

④以组为单位，在第7日、第14日、第21日、第28日、第35日上午10时在离鸡舍1m远处嗅闻气味，并在鸡舍内用肉眼观察鸡舍环境、鸡羽毛泽、光洁度。

(3)各项指标对照如下表：

与对照组比较，实验组的圈舍干净、无臭味、无蚊蝇，说明本发明复合微生物菌剂 能迅速有效地将鸡粪分解，真正达到了无污染、零排放的目的。实验组的平均只增重高于对照组18.54％，节约用药费用67.65％，说明本发明复合微生物菌剂能有效地将鸡粪和垫料转化，为鸡提供有益菌、无机物和菌体蛋白，促进营养吸收的同时，还能够提高鸡的免疫力、抗病力。