提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法

提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法

技术领域

本发明属于植物化学和植物生理生态学研究领域，具体涉及一种促进喜树种子内10-甲氧基喜树碱生成的方法。

背景技术

喜树（Camptotheca acuminata Dence）为国家Ⅱ级重点保护野生植物，其全株均含有一类吲哚类生物碱—喜树碱及其衍生物（Thomas et al., 2004）。喜树碱类衍生物具有显著抗肿瘤活性（Azrak et al., 2011；Orzechowska et al., 2012），全球对喜树碱类抗肿瘤药品的需求逐年增加，目前市场份额已超过10亿美元（生物医药网，2012）。10-甲氧基喜树碱是喜树种子中存在的天然喜树碱衍生物，研究发现，其活性比喜树碱大、毒性喜树碱小（杨士平，2009），但由于其在喜树种子内的含量低，没有工业利用价值。如果能通过适当方法，提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量，则可使喜树种子用于10-甲氧基喜树碱的工业提取成为可能。到目前未止，尚未见提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法。因此本发明旨在提供一种提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法。

发明内容

本发明提供的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其特征在于，按如下步骤操作：

（1）将3层滤纸放在培养皿里，培养皿中加水使滤纸充分吸湿，沥去多余水分，把喜树种子直接放在水润湿的滤纸上，盖上培养皿盖，放进发芽箱进行发芽；

（2）发芽的第5～7天，将南方红豆杉枝叶水提取液添加到步骤（1）所述的水润湿的滤纸上；

（3）在添加南方红豆杉枝叶水提取液后的第6～8小时，喜树种子终止发芽。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的南方红豆杉枝叶水提取液通过如下流程得到：将南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到粉末Ⅰ，水与粉末Ⅰ按质量比100：1～1000：1混合、回流提取1～3小时，过滤得到的滤液即为南方红豆杉枝叶水提取液。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的添加，其特征在于，南方红豆杉枝叶水提取液与发芽喜树种子质量比为1：10～1：8。

与未处理的喜树种子相比，本发明提供的方法获得的发芽喜树种子中10-甲氧基喜树碱的含量可提高25倍以上。此时发芽的喜树种子可用于10-甲氧基喜树碱的工业提取。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行进一步描述。

实施例1

本实施例提供的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，按如下步骤操作：

（1）将3层滤纸放在培养皿里，培养皿中加水使滤纸充分吸湿，沥去多余水分，把喜树种子直接放在水润湿的滤纸上，盖上培养皿盖，放进发芽箱进行发芽；

（2）发芽的第7天，将南方红豆杉枝叶水提取液添加到步骤（1）所述的水润湿的滤纸上；

（3）在添加南方红豆杉枝叶水提取液后的第6小时，喜树种子终止发芽。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的南方红豆杉枝叶水提取液通过如下流程得到：将南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到粉末Ⅰ，水与粉末Ⅰ按质量比1000：1混合、回流提取2小时，过滤得到的滤液即为南方红豆杉枝叶水提取液。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的添加，其特征在于，南方红豆杉枝叶水提取液与发芽喜树种子质量比为1：8。

与未处理的喜树种子相比，本发明提供的方法获得的发芽喜树种子中10-甲氧基喜树碱的含量提高了25.3倍。

实施例2

本实施例提供的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，按如下步骤操作：

（1）将3层滤纸放在培养皿里，培养皿中加水使滤纸充分吸湿，沥去多余水分，把喜树种子直接放在水润湿的滤纸上，盖上培养皿盖，放进发芽箱进行发芽；

（2）发芽的第5天，将南方红豆杉枝叶水提取液添加到步骤（1）所述的水润湿的滤纸上；

（3）在添加南方红豆杉枝叶水提取液后的第8小时，喜树种子终止发芽。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的南方红豆杉枝叶水提取液通过如下流程得到：将南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到粉末Ⅰ，水与粉末Ⅰ按质量比500：1混合、回流提取3小时，过滤得到的滤液即为南方红豆杉枝叶水提取液。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的添加，其特征在于，南方红豆杉枝叶水提取液与发芽喜树种子质量比为1：9。

与未处理的喜树种子相比，本发明提供的方法获得的发芽喜树种子中10-甲氧基喜树碱的含量提高了27.8倍。

实施例3

本实施例提供的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，按如下步骤操作：

（1）将3层滤纸放在培养皿里，培养皿中加水使滤纸充分吸湿，沥去多余水分，把喜树种子直接放在水润湿的滤纸上，盖上培养皿盖，放进发芽箱进行发芽；

（2）发芽的第6天，将南方红豆杉枝叶水提取液添加到步骤（1）所述的水润湿的滤纸上；

（3）在添加南方红豆杉枝叶水提取液后的第7小时，喜树种子终止发芽。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的南方红豆杉枝叶水提取液通过如下流程得到：将南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到粉末Ⅰ，水与粉末Ⅰ按质量比100：1混合、回流提取1小时，过滤得到的滤液即为南方红豆杉枝叶水提取液。

所述的提高喜树种子中10-甲氧基喜树碱含量的方法，其中步骤（2）所述的添加，其特征在于，南方红豆杉枝叶水提取液与发芽喜树种子质量比为1：10。

与未处理的喜树种子相比，本发明提供的方法获得的发芽喜树种子中10-甲氧基喜树碱的含量提高了33.6倍。