野生资源白九股牛愈伤组织快速扩繁的一种方法

野生资源白九股牛愈伤组织快速扩繁的一种方法

技术领域

本发明属于组织培养技术领域，具体涉及白九股牛（中药名），又名：黑果土当归、丛枝土当归、牛角七、蜜油参、黑果土当归，为伞形目五加科楤木属植物丛林楤木Aralia melanocarpa(Lévl.)Lauener，本发明指通过组织培养技术快速得到此物种愈伤组织的方法。

背景技术

白九股牛。多年生草本，地下有长根茎。地上茎高达1.5米。叶为一至二回羽状复叶，长约15-20厘米；叶柄长4厘米，无毛；托叶和叶柄基部合生，半圆形，长约4毫米，边缘有纤毛；羽片有小叶3-5；小叶片膜质，阔心形，长2-4厘米，宽2-4.5厘米，先端长渐尖，基部心形，沿脉疏生白刺毛，边缘有重锯齿，齿有刺尖，侧脉5-7对，两面明显，网脉不明显；小叶柄长0.8-2厘米，顶生者长达4.5厘米。圆锥花序顶生，稀疏，长15-25厘米，主轴下部常有腋生的单伞形花序；伞形花序约有花12-18朵；总花梗长2.5厘米，有短柔毛；苞片披针形，长约5毫米；花梗长至7毫米；小苞片锥形，长约1毫米；萼无毛，边缘有5个三角形小齿；花瓣5，卵形；雄蕊5；子房5室；花柱5，离生。果实球形，黑，直径约7毫米。花期7月。主产于贵州（威宁）和云南。具有托毒外出，补中益气之功效。常用于气虚头晕，耳鸣，淋巴腺炎，疖，痈，慢性化脓性骨髓炎。目前还未见此资源的大量栽种及相关组织培养报道，有限的野生资源难以满足大量药用市场的需求，发明人参加了全国第四次中药资源普查宣威队的普查工作得到本物种野生资源后，马上展开本物种的组织培养快繁体系的探索研究，通过试验探索及分析结果的验证，得到野生白九股牛资源愈伤组织快速扩繁的一种组织培养方法。

愈伤组织的获得，不单对研究此物种的生长发育及分化机制、遗传变异规律奠定基础，对遗传育种具有特殊意义，同时可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。愈伤组织的培养，不仅是植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径。

发明内容

为了快速得到“白九股牛”的愈伤组织，发明人通过探索实验结果验证后提供了培养配方，该方法可在短时间内获得质量较好的“白九股牛”愈伤组织。

本发明提供的野生资源白九股牛愈伤组织快速扩繁的一种方法，步骤如下：

（1）取材：选择健壮植株（无病虫害），于晴天9:00～16:00时间段摘取幼嫩茎或叶。

（2）消毒：流水冲洗20分种后，75%酒精消毒30秒，0.1%消毒8～15分种，用无菌水冲洗3～5次备用。

（3）初期诱导培养：将消毒处理过的茎或叶接种于含1.0mg/L 6-BA和2.0mg/L 2,4-D的MS培养基中，于温度为25±2℃，无光照的黑暗状态诱导培养20～30天。

（4） 光照适应培养：将诱导出的愈伤组织再次转接于含1.0mg/L 6-BA和2.0mg/L2,4-D的MS培养基中，于温度为25±2℃，室内散射光（400～1000Lx）下培养20～30天。

（5）快速增殖培养：经光照适应培养的愈伤组织再次转接于含1.0mg/L 6-BA和2.0mg/L 2,4-D的MS培养基中，于温度为25±2℃，光照强度（400～1000Lx）下培养20～30天。

作为优选，步骤（1）中，取材应于春季较佳。

作为优选，步骤（2）中，流水冲洗加入适当洗洁精，消毒处理应在超净工作台上完成，并适当给予紫外灯照射。

作为优选，步骤（3）中，接种材料选择叶片时，切取大小为1.0cm×1.0cm且带叶脉，叶背紧贴培养基，接种材料选择茎段时，切取长度为0.5～1.0cm。

作为优选，步骤（3）、（4）、（5）中，培养基还含有30g/L蔗糖和6g琼脂，PH调整为5.8。

作为优选，步骤（4）、（5）中，避免阳光直射。

附图说明

图1：“表1 MS培养基母液配方”内容为MS母液配制所包含的元素及用量。

图2：“表2 实验数据统计表”C2行数据是通过实验验证所获得的培养结果。

图3：是以琼脂为凝固基质通过培养后得到的愈伤组织照片。