C07D491/052 A61K31/4162 A61P15/08
1.通式I所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，式中：
X是O、S、SO、SO 2、或NR；
Y是O、S、或NR；
Z是O、S、SO、SO 2、或N；其中当Z是O、S、SO、或SO 2时，p是0；
每个R独立地是氢，C 1–6脂族基团，C 3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独 立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子 的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；或
在同一个原子上的两个R与它们所连接的原子一起形成C 3–10芳基，3-8元饱和或部分不 饱和碳环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地 选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
环A是稠合的C 3–10芳基，稠合的3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自氮、 氧或硫的杂原子的稠合的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的稠 合的5-6元单环杂芳环；
R 1是–OR、–SR、–CN、–NO 2、-SO 2R、-SOR、-C(O)R、-CO 2R、-C(O)N(R) 2、-NRC(O)R、-NRC(O)N (R) 2、-NRSO 2R、或–N(R) 2；
R 2是–R、卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO 2、-SO 2R、-SOR、-C(O)R、-CO 2R、-C(O)N(R) 2、- NRC(O)R、-NRC(O)N(R) 2、-NRSO 2R、或–N(R) 2；
R 3是氢，C 1–6脂族基团，C 3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元 单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
每个R 4独立地是–R、卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO 2、-SO 2R、-SOR、-C(O)R、-CO 2R、-C (O)N(R) 2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R) 2、-NRSO 2R、或–N(R) 2；
R 5是C 1–6脂族基团，C 3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自氮、 氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环 杂芳环；上述每个基团任选经取代；
R 6是氢，C 1–6脂族基团，C 3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元 单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
或者R 5和R 6与它们各自所连接的原子一起形成具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原 子的3-8元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元杂芳环；上述每个 基团任选经取代；
n是0、1、或2；以及
p是0或1。
2.如权利要求1所述的化合物，其中X是O。
3.如权利要求1所述的化合物，其中Y是O。
4.如权利要求1所述的化合物，其中Z是N。
5.如权利要求1所述的化合物，其中环A是苯基。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R 1是–OR且R是C 1–6脂族基团。
7.如权利要求1所述的化合物，其中R 2是氢、Br、CN、
8.如权利要求1所述的化合物，其中R 3是
9.如权利要求1所述的化合物，其中R 5是甲基、叔丁基、-CD 3、
10.如权利要求1所述的化合物，其中Z是N且由Z、R 5和R 6形成的环是
11.如权利要求1所述的化合物，其中R 6是氢、甲基、叔丁基、或-CD 3.
12.如权利要求1所述的化合物，具有以下结构式I-f：
或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1所述的化合物，具有以下结构式I-h：
或其药学上可接受的盐.
14.如权利要求1所述的化合物，选自表1中列出的那些。
15.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1所述的化合物以及药学上可接 受的佐剂、载体或媒介质。
16.一种调节病人或生物样品中的FSHR或其突变体的活性的方法，所述方法包括如下 步骤：向所述病人给予权利要求1所述的化合物或其生理学上可接受的盐，或者使所述生物 样品与权利要求1所述的化合物或其生理学上可接受的盐接触。
17.一种有需要的病人中由FSHR介导的疾病的方法，包括如下步骤：向所述病人给 予如权利要求1所述的化合物。
18.一种受试者的生育障碍的方法，包括如下步骤：向所述受试者给予如权利要求 1所述的化合物和/或其生理学上可接受的盐。
19.如权利要求1所述的化合物和/或其生理学上可接受的盐在制备用于预防性或 性由FSHR介导的疾病的药物中的用途。
20.一种制备如权利要求1所述的通式I化合物的方法，包括以下步骤：
将通式(II)化合物，
式中，X、Y、R 1、R 3、R 4和n具有权利要求1指明的含义，且LG是离去基团；
与通式ZH(R 5)(R 6) p所示的化合物，其中Z、R 5、R 6和p具有权利要求1指明的含义；进行反 应，得到通式I所示化合物：
式中，X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、n和p具有如权利要求1指明的含义。
用作卵泡刺激素受体调节剂的吡唑化合物及其用途
相关申请
本专利申请要求于2013年6月24日提交的的美国临时专利申请第61/838,460号和 于2013年11月1日提交的的美国临时专利申请第61/898,608号的优先权，其全部内容纳入 作为参考。
技术领域
本发明涉及用作卵泡刺激素受体(FSHR)激动剂的吡唑化合物。本发明也提供包含 本发明化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述组合物各种疾病的方法。
发明背景
促性腺激素在许多身体功能包括代谢、温度调节和生殖过程上起着重要作用。促 性腺激素作用于特定类型性腺细胞，以启动卵巢和睪丸分化和生成类固醇。促性腺激素FSH (卵泡刺激素)在促性腺激素释放激素和□激素的影响下由垂体前叶释放出来，以及在怀孕 期间由胎盘释放出来。FSH是一种异二聚体糖蛋白激素，与黄体生成素(LH)和促甲状腺激素 (TSH)以及绒毛膜促性腺激素(CG)具有相似的结构，其中LH和TSH在脑下垂体中产生，而CG 在胎盘中产生。女性的FSH在刺激卵泡发育和成熟发挥中枢作用，此外，它也是调节□激素 分泌的主要激素，而LH诱导排卵。男性的FSH负责细精管的完整性并作用于塞尔托利细胞以 支持配子生成。
激素相对地较大(28-38kDa)，由与不同β-亚基以非共价方式连接的共同α-亚基组 成，所述β-亚基赋予受体结合特异性。这些激素的结胞受体在睪丸的塞尔托利细胞和卵巢 的颗粒细胞上表达。FSH受体已知是与G-蛋白质结合的一类膜结合受体的成员，当被激活 时，会刺激腺嘌呤基环化酶的活性增大。这会导致胞内第二信使3',5'-一磷酸腺苷(cAMP) 的水平增加，这继而引致类固醇合成和分泌增加。这些受体的氨基酸序列的亲水性分析曲 线显示三个一般性结构域：亲水氨基末端区域，该区域被认为是氨基末端胞外结构域；跨膜 长度的7个疏水片段，它们被认为是跨膜结构域；以及羧基末端区域，该区域含有潜在的磷 酸化位点(丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基)，被认为是羧基末端胞内或细胞质结构域。糖蛋白 激素受体家族与其他结合G蛋白质的受体(例如β-2-肾上腺素受体、视紫质受体、和物质K受 体)的不同在于，参与激素结合的亲水氨基末端结构域的尺寸较大。
每年，美国有2.4百万对夫妇患有不育症，需要接受。专业人员将提取自尿的 FSH或由重组DNA技术生产的FSH所制成的蛋白质产品经肠胃外施加以诱导排卵和控制卵巢 过度刺激。而诱导排卵是实现单个卵泡排卵，控制卵巢过度刺激是获取多个卵母细胞以用 于各种体外辅助生殖技术，例如体外受精(IVF)。FSH在临床上也被用于男性性腺功能 减退症和男性不育，例如某类无法生产精子的病症。
FSHR在卵泡生长过程中是具有高度特异性的靶，仅在卵巢中表达。然而，FSH的使 用由于以下原因而受到限制：价钱高昂、缺乏口服剂型和需要由专门的医生作紧密的监测。 因此，希望能够研发和鉴定一种替换FSH的能供口服的非肽小分子。具有激动剂性能的低分 子量FSH模拟物已经在国际专利申请WO2002/09706和WO2010/136438以及美国专利US6， 653,338中公开了。但仍然需要一些能够选择性激活FSHR的低分子量激素模拟物。
发明内容
业已发现，本发明的化合物及其药学上可接受的组合物是有效的FSHR调节剂。所 述化合物以通式I表示：
或其药学上可接受的盐，其中环A、X、Y、Z、R1、R2、R3、R4、R5、R6、n和p具有此处实施例 中所限定和描述的意义。
本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于与由卵泡刺激素事件触 发的异常细胞反应相关的各种疾病、障碍或病征。这些疾病、障碍或病征包括本文所描述的 那些。
某些实施例的详细描述
1.本发明化合物的一般定义
在某些实施方案中，本发明提供促卵泡激素受体(FSHR)的调节剂。在某些实施方 案中，本发明提供FSHR的正变构调节剂。在一些实施方案中，这样的化合物包括以本文描述 的通式表示的那些或其药学上可接受的盐，其中定义和描述了各变量。
2.化合物和定义
本发明的化合物包括上文所概述的化合物，且按本文所揭示的类别、子类和种类 进一步加以说明。除非另外指示，否则如本文所用的以下定义应适用。就本发明来说，化学 元素是根据元素周期表(thePeriodicTableoftheElements)(化学文摘社版本(CAS version)，化学与物理手册(HandbookofChemistryandPhysics)，第75版)来识别。另 外，有机化学的一般原理描述于“有机化学(OrganicChemistry)”(托马斯·索瑞尔 (ThomasSorrell)，大学自然科学图书公司(UniversityScienceBooks)，索萨利托 (Sausalito)：1999)和“马奇高等有机化学(March′sAdvancedOrganicChemistry)”(第5 版，编辑：史密斯(Smith，M.B.)和马奇(March，J.)，约翰威立父子出版公司(JohnWiley& Sons)，纽约(NewYork)：2001)中，这些书籍的全部内容都以引用的方式并入本文中。
本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”是指完全饱和或含有一个或一个以上不饱 和单元的经取代或未经取代的直链(即无支链)或支链烃链，或完全饱和或含有一个或一个 以上不饱和单元但不为芳香族的单环烃或双环烃，其具有单个连接点与分子的其余部分相 连接。除非另外说明，否则脂肪族基含有1-6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基含 有1-5个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基含有1-4个脂肪族碳原子。在一些实施例 中，脂肪族基含有1-3个脂肪族碳原子，并且在一些实施例中，脂肪族基含有1-2个脂肪族碳 原子。在一些实施例中，“环脂肪族基”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或 一个以上不饱和单元但非芳香族的单环C3-C6烃，其具有单个连接点与分子的其余部分相连 接。示例性脂族基团是直链或支链的取代的或未取代的C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基及 其杂化物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语“低级烷基”是指C1-4直链或支链烷基。示例性低级烷基是甲基、乙基、丙基、异 丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低级卤代烷基”指的是含有一个或多个卤素原子的C1-4直链或支链烷基。
术语“杂原子”是指一个或一个以上氧、硫、氮、或磷(包括氮、硫、或磷的任何氧化 形式；任何碱性氮的季铵化形式；杂环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基)、NH (如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
本文所用的术语“不饱和”是指具有一个或更多个不饱和单元的部分。
本文所用的术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和的直链或支链烃链”是指二价亚 烷基、亚烯基、亚炔基链，它们是此处定义的直链或支链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即-(CH2)n-，其中n为正整 数，优选为1到6、1到4、1到3、1到2或者2到3。经取代的亚烷基链是一个或一个以上亚甲基氢 原子经取代基置换的聚亚甲基。合适的取代基包括下文关于经取代的脂肪族基所描述的取 代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基。取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基， 其中一个或多个氢原子被取代基置换。合适的取代基包括下文描述有关取代的脂族基团的 那些。
术语“卤素”指F、Cl、Br或I。
单独使用或作为较大部分如“芳烷基”、“芳羟基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的 术语“芳基”指单环和双环系统，所述系统共具有5至14个环成员，其中系统中至少一个环是 芳族，并且其中系统中各环含有3至7个环成员。术语“芳基”与术语“芳基环”互换使用。在本 发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳香环系统。示例性芳基是苯基、联苯基、萘基、蒽基 等，其任选地包括一个或多个取代基。。如本文中所用，术语“芳基”的范围内也包括芳环与 一个或一个以上非芳环稠合而成的基团，例如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基 (naphthimidyl)、菲啶基或四氢萘基等。
单独使用或作为例如“杂芳烷基”或“杂芳羟基”等较大部分的一部分使用的术语 “杂芳基”和“杂芳-”是指如下基团，其具有5到10个环原子，优选5、6或9个环原子；环系 (cyclicarray)中共享6、10或14个π电子；并且除碳原子外，还具有1到5个杂原子。术语“杂 原子”是指氮、氧或硫，并包括氮或硫的任何氧化形式和碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基 包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑 基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌 呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文所用的术语“杂芳基”和“杂芳-”也包括杂芳环与一个或一个 以上芳环、环脂肪族环或杂环稠合而成的基团，其中连接基团或连接点在杂芳环上。非限制 性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑 基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑 基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1, 4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可为单环或双环的。术语“杂芳基”与术语“杂芳环”或“杂芳香族 基”可互换使用，任一术语都包括任选经取代的环。术语“杂芳烷基”是指经杂芳基取代的烷 基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选经取代。
本文所用的术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环状环”可互换使用，并且是 指饱和或部分不饱和并且除碳原子外还具有一个或一个以上、优选1到4个如上文所定义的 杂原子的稳定的5到7元单环或7-10元双环杂环部分。当关于杂环的环原子而使用时，术语 “氮”包括经取代的氮。举例来说，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱 和环中，氮可能是N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或+NR(如N-取代的吡咯 烷基中)。
杂环可在任何杂原子或碳原子上连接到其侧基，从而形成稳定结构，并且任何环 原子都可以任选经取代。这些饱和或部分不饱和杂环基的实例包括(但不限于)四氢呋喃 基、四氢噻吩基、吡咯烷基、基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁 唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂卓基、氧氮杂卓基、硫氮杂卓基、吗啉基和奎 宁环基。术语“杂环”、“杂环基”和“杂环部分”在本文中可互换使用，并且也包括杂环与一个 或一个以上芳环、杂芳环或环脂肪族环稠合而成的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、满 基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接基团或连接点在杂环上。杂环基可为单环或双环的。术 语“杂环基烷基”是指经杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地任选经取代。
如本文所用的术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。术语 “部分不饱和”打算涵盖具有多个不饱和位点的环，但不打算包括如本文中所定义的芳基或 杂芳基部分。
如本文所述，本发明的某些化合物可含有“任选经取代”的部分。一般来说，术语“经取代”之前无论是否存在术语“任选”，都意指指定部分的一个或一个以上氢经合适的取代基置换。“取代的”适用于结构上明确的或暗示的一个或多个氢原子(例如，至少指以及至少指除非另外指示，否则“任选经取代”的基团可能在此基团的各可取代位置上都具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的一个以上位置可经一个以上选自规定基团的取代基取代时，每个位置上的取代基可能相同或不同。本发明所预想的取代基组合优选是会形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。如本文所用的术语“稳定”是指化合物在经受允许其制造、检测和在某些实施例中允许其回收、纯化以及用于达成一个或一个以上本文中所揭示的目的的条件时实质上不发生改变。
“任选经取代”的基团的可取代碳原子上的合适单价取代基独立地为氘；卤素；– (CH2)0–4R°；–(CH2)0–4OR°；-O(CH2)0-4R°，–O–(CH2)0–4C(O)OR°；–(CH2)0–4CH(OR°)2；–(CH2)0–4SR°；–(CH2)0–4Ph，其可经R°取代；–(CH2)0–4O(CH2)0–1Ph，其可经R°取代；–CH＝CHPh，其可经 R°取代；–(CH2)0–4O(CH2)0–1-吡啶基，其可经R°取代；–NO2；–CN；–N3；-(CH2)0–4N(R°)2；– (CH2)0–4N(R°)C(O)R°；–N(R°)C(S)R°；–(CH2)0–4N(R°)C(O)NR°2；-N(R°)C(S)NR°2；–(CH2)0–4N (R°)C(O)OR°；–N(R°)N(R°)C(O)R°；-N(R°)N(R°)C(O)NR°2；-N(R°)N(R°)C(O)OR°；–(CH2)0–4C (O)R°；–C(S)R°；–(CH2)0–4C(O)OR°；–(CH2)0–4C(O)SR°；-(CH2)0–4C(O)OSiR°3；–(CH2)0–4OC(O) R°；–OC(O)(CH2)0–4SR°，SC(S)SR°；–(CH2)0–4SC(O)R°；–(CH2)0–4C(O)NR°2；–C(S)NR°2；–C(S) SR°；–SC(S)SR°，-(CH2)0–4OC(O)NR°2；-C(O)N(OR°)R°；–C(O)C(O)R°；–C(O)CH2C(O)R°；–C (NOR°)R°；-(CH2)0–4SSR°；–(CH2)0–4S(O)2R°；–(CH2)0–4S(O)2OR°；–(CH2)0–4OS(O)2R°；–S(O) 2NR°2；-(CH2)0–4S(O)R°；-N(R°)S(O)2NR°2；–N(R°)S(O)2R°；–N(OR°)R°；–C(NH)NR°2；–P(O) 2R°；-P(O)R°2；-OP(O)R°2；–OP(O)(OR°)2；SiR°3；–(C1–4直链或支链亚烷基)O–N(R°)2；或(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)O–N(R°)2，其中各R°可如下文所定义经取代并且独立地为氢、C1-6脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)、或具有0-4个独立地选自氮、氧或 硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环，或不管以上定义，两个独立存在的R°连 同插入其间的原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分 不饱和或芳基单环或多环，此环可如下文所定义经取代。
R°(或由两个独立存在的R°连同插入其间的原子一起形成的环)上的合适单价取 代基独立地为氘、卤素、–(CH2)0–2R●、–(卤代R●)、–(CH2)0–2OH、–(CH2)0–2OR●、–(CH2)0–2CH(OR ●)2、-O(卤代R●)、–CN、–N3、–(CH2)0–2C(O)R●、–(CH2)0–2C(O)OH、–(CH2)0–2C(O)OR●、–(CH2)0–2SR ●、–(CH2)0–2SH、–(CH2)0–2NH2、–(CH2)0–2NHR●、–(CH2)0–2NR●2、–NO2、–SiR●3、–OSiR●3、-C(O)SR ●、–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)OR●、或–SSR●，其中各R●未经取代或在前面有“卤代”的情 况下仅经一个或一个以上卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、或 具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环。R°的饱和 碳原子上的合适二价取代基包括＝O和＝S。
“任选经取代”的基团的饱和碳原子上的合适二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝ NNR*2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、–O(C(R*2))2–3O–、或–S(C (R*2))2–3S–，其中各独立存在的R*是选自氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基或具有 0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环。与 “任选经取代”的基团的邻位可取代碳结合的合适二价取代基包括：–O(CR*2)2–3O–，其中各独 立存在的R*是选自氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基或具有0-4个独立地选自氮、 氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环。
R*的脂肪族基上的合适取代基包括卤素、–R●、-(卤代R●)、-OH、–OR●、–O(卤代R ●)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR●、–NH2、–NHR●、–NR●2、或–NO2，其中各R●未经取代或在前面有“卤 代”的情况下仅经一个或一个以上卤素取代，并且独立地为C1-4脂肪族基、–CH2Ph，–O(CH2)0–1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环。
“任选经取代”的基团的可取代氮上的合适取代基包括其中各独立地为氢、可如下文所定义经取代的C1-6脂肪族基、未经取代的-OPh或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环，或不管以上定义，两个独立存在的连同插入其间的原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
的脂肪族基上的合适取代基独立地为卤素、–R●、-(卤代R●)、–OH、–OR●、–O(卤代R●)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR●、–NH2、–NHR●、–NR●2、或-NO2，其中各R●未经取代或在前面有“卤代”的情况下仅经一个或一个以上卤素取代，并且独立地为C1-4脂肪族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳环。
在某些实施方案中，术语“任选经取代的”，“任选经取代的烷基”，“任选经取代的 烯基”，“任选经取代的炔基”，“任选经取代的碳环”，“任选经取代的芳基”，“任选经取代的 杂芳基”，“任选经取代的杂环”，以及本文中所使用的任何其它任选经取代的基团，是指未 被取代的基团或者被取代的基团，其中由典型的取代基独立地置换该基团上一个、两个、三 个或更多个氢原子，所述典型的取代基不限于：
-F、-Cl、-Br、-I、氘，
-OH、保护的羟基、烷氧基、氧代、硫代氧代，
-NO2、-CN、CF3、N3，
-NH2、保护的氨基、-NH烷基、-NH烯基、-NH链炔基、-NH环烷基、-NH-芳基、-NH-杂芳 基、-NH-杂环基、-二烷基氨基、-二芳基氨基、-二杂芳基氨基，
-O-烷基、-O-烯基、-O-炔基、-O-环烷基、-O-芳基、-O-杂芳基、-O-杂环基，
-C(O)-烷基、-C(O)-烯基、-C(O)-炔基、-C(O)-碳环基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳 基、-C(O)-杂环基，
-CONH2、-CONH-烷基、-CONH-烯基、-CONH-炔基、-CONH-碳环基、-CONH-芳基、- CONH-杂芳基、-CONH-杂环基，
-OCO2-烷基、-OCO2-烯基、-OCO2-炔基、-OCO2-碳环基、-OCO2-芳基、-OCO2-杂芳基、- OCO2-杂环基、-OCONH2、-OCONH-烷基、-OCONH-烯基、-OCONH-炔基、-OCONH-碳环基、-OCONH- 芳基、-OCONH-杂芳基、-OCONH-杂环基，
-NHC(O)-烷基、-NHC(O)-烯基、-NHC(O)-炔基、-NHC(O)-碳环基、-NHC(O)-芳基、- NHC(O)-杂芳基、-NHC(O)-杂环基、-NHCO2-烷基、-NHCO2-烯基、-NHCO2-炔基、-NHCO2-碳环 基、-NHCO2-芳基、-NHCO2-杂芳基、-NHCO2-杂环基、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(O) NH-烯基、-NHC(O)NH-烯基、-NHC(O)NH-碳环基、-NHC(O)NH-芳基、-NHC(O)NH-杂芳基、-NHC (O)NH-杂环基、NHC(S)NH2、-NHC(S)NH-烷基、-NHC(S)NH-烯基、-NHC(S)NH-炔基、-NHC(S) NH-碳环基、-NHC(S)NH-芳基、-NHC(S)NH-杂芳基、-NHC(S)NH-杂环基、-NHC(NH)NH2、-NHC (NH)NH-烷基、-NHC(NH)NH--烯基、-NHC(NH)NH-烯基、-NHC(NH)NH-碳环基、-NHC(NH)NH-芳 基、-NHC(NH)NH-杂芳基、-NHC(NH)NH-杂环基、-NHC(NH)-烷基、-NHC(NH)-烯基、-NHC(NH)- 烯基、-NHC(NH)-碳环基、-NHC(NH)-芳基、-NHC(NH)-杂芳基、-NHC(NH)-杂环基，
-C(NH)NH-烷基、-C(NH)NH-烯基、-C(NH)NH-炔基、-C(NH)NH-碳环基、-C(NH)NH-芳 基、-C(NH)NH-杂芳基、-C(NH)NH-杂环基，
-S(O)-烷基、-S(O)-烯基、-S(O)-炔基、-S(O)-碳环基、-S(O)-芳基、-S(O)-杂芳 基、-S(O)-杂环基-SO2NH2、-SO2NH-烷基、-SO2NH-烯基、-SO2NH-炔基、-SO2NH-碳环基、- SO2NH-芳基、-SO2NH-杂芳基、-SO2NH-杂环基，
-NHSO2-烷基、-NHSO2-烯基、-NHSO2-炔基、-NHSO2-碳环基、-NHSO2-芳基、-NHSO2-杂 芳基、-NHSO2-杂环基，
-CH2NH2、-CH2SO2CH3，
-一-、二-、或三-烷基甲硅烷基，
-烷基、-烯基、-炔基、-芳基、-芳基烷基、-杂芳基、-杂芳基烷基、-杂环烷基、-环烷 基、-碳环基、-杂环基、聚烷氧基烷基、聚烷氧基、-甲氧基甲氧基、-甲氧基乙氧基、-SH、-S- 烷基、-S-烯基、-S-炔基、-S-碳环基、-S-芳基、-S-杂芳基、-S-杂环基、或者甲基硫代甲基。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”用以指在可靠医学判断的范围内，适于与人 类和低等动物的组织接触使用而没有过多毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，并且 与合理的效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是公知的现有技术。例如，SM Berge等人在J.PharmaceuticalSciences，第1977年，66，1-19，详细描述了药学上可接受 的盐，纳入其内容作为参考。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括从适合的无机酸和 碱以及有机酸和碱衍生而来的那些盐。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是氨基与无 机酸如盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸和高氯酸，或者与有机酸如乙酸，草酸，马来酸、酒石酸，柠 檬酸，琥珀酸或丙二酸形成的盐，或者通过使用诸如离子交换等本领域的其他方法形成的 盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯 甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、葡糖酸 盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半 硫酸盐、庚酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、 马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑 酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、 硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
从适当的碱衍生的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1–4烷基)4盐。代表性的碱或 碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其它药学可接受的盐包括使用诸如卤化物、氢氧化物、 羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成的合适的无毒的铵盐， 季铵盐和胺阳离子。
除非另有说明，本文所描述的结构也意味着包括结构的所有异构形式(例如，对映 体、非对映体、和几何(或构象)异构体)；例如，每一不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构 体、以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的混合物的单个立体化学异构体以及对映 体、非对映体、和几何(或构象)异构体的混合物在本发明的范围之内。除非另有说明，本发 明的化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围之内。
另外，除非另有说明，本文所述的结构包括这样的化合物：其区别仅在于存在一个 或多个同位素富集的原子。例如，具有本发明结构的化合物包括由氘或氚替换氢、或由一 个13C-或14C-富集碳置换碳，这些化合物都本发明的范围之内。在一些实施方案中，基团包 含一个或多个氘原子。
具有通式I的化合物还应包括其同位素标记形式。具有通式I的化合物的同位素标 记形式与所述化合物的区别仅在于所述化合物的一个或多个原子被原子量或质量数与通 常是天然存在的原子的原子量或质量数不同的一个或多个原子取代。市场上容易买到且可 通过已知方法被结合到具有通式I的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和 氯，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36CI。含有一或多个上述同位素 和/或其他原子的同位素的通式I化合物、其前药或它们中任一个的药学上可接受的盐都应 理解为本发明的一部分。可以多种有利的方式使用同位素标记的通式I化合物。例如，结合 了诸如3H或14C的放射性同位素的同位素标记的通式1化合物可用于药物和/或底物组织分 布试验。由于其制备简单及可检测性良好而尤其优选这两种放射性同位素，即氚(3H)和碳- 14(14C)。由于诸如氘(2H)的较重的同位素具有较高的代谢稳定性，将这种同位素标记化合 物结合到通式I化合物中在上是有好处的。较高的代谢稳定性直接导致体内半衰期延 长或剂量减少，这在多数情况下代表了本发明的优选实施例。通常可通过进行本文本的实 施例部分和制备部分中的合成方案和相关描述中公开的步骤来制备同位素标记的通式I化 合物，用容易得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物。
为了通过一级动力学同位素效应控制化合物的氧化代谢，可将氘(2H)结合到所述 化合物中。一级动力学同位素效应是由于同位素核的替换而导致化学反应速率发生变化， 这是由于所述同位素替换之后形成共价键所需的基态能量的变化而引起的。较重的同位素 的替换通常导致化学键的基态能量降低，从而引起速率限制的键断裂反应的速率降低。如 果键断裂发生在沿着多产物反应的坐标的鞍点区中或其附近，产物分布比率可被显著改 变。解释如下：如果氘被键合到碳原子的非可替换位置上，通常速率差异km/kd＝2-7。如果该 速率差异被成功地应用于易于氧化的通式I化合物，则该化合物在体内的性质可被显著地 改变，从而改善药物动力学特性。
在发现和开发剂时，本领域技术人员尝试在保持有利的体外特性的同时优化 药物动力学参数。可以合理地认为，许多药物动力学性质差的化合物易于被氧化代谢。现有 的体外肝微粒体试验提供了关于这种类型的氧化代谢过程的有价值的信息，这些信息使得 可以合理地设计具有通式I的含氘化合物，使其由于抗氧化代谢而提高稳定性。因此，通式I 化合物的药物动力学性质显著地改善了，这种改善可用体内半衰期(t/2)的延长、疗效最好 的浓度(Cmax)、剂量响应曲线下的面积(AUC)以及F来定量地表示，也可用降低的清除率、剂 量和材料成本来定量地表示。
以下阐述用于说明上述内容：把通式I化合物制备成一系列类似物，其中所述通式 I化合物具有多个氧化代谢可能攻击的位点，例如苯甲基氢原子和与氮原子键合的氢原子， 在所述类似物中各种组合的氢原子被氘原子取代，因此所述氢原子中的一部分、大多数或 全部被氘原子取代。半衰期的确定使得可以有利地及准确地确定对氧化代谢的抵抗能力提 高的程度。通过这种方式确定了，由于这种类型的氘-氢替换，母化合物的半衰期可被提高 高达100％。
通式I化合物中的氘-氢替换也可被用来有利地改变起始化合物的代谢物谱，以减 少或消除不良有毒代谢物。例如，如果通过氧化性碳-氢(C-H)键断裂产生了有毒代谢物，可 以合理地认为，含氘类似物将会显著地减少或消除不良代谢物的产生，即使该具体的氧化 反应并不是速率决定步骤。更多现有技术中关于氘-氢替换的信息可参见例如Hanzlik等， J.Org.Chem.55，3992-3997，1990，Reider等，J.Org.Chem.52,3326-3334，1987，Foster， Adv.DrugRes.14，1-40，1985，Gillette等，Biochemistry33(10)2927-2937，1994，and Jarman等Carcinogenesis16(4)，683-688，1993。
本文所使用的术语“调节剂”被定义为以可测量的亲和力结合和/或抑制靶的化合 物。在某些实施方案中，调节剂的IC50和/或结合常数约小于50μM，约小于1μM，约小于500nM， 约小于100nM，或小于约10nM。
本文所使用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”是指在含有本发明化合 物或其组合物和FSHR的样本与包含FSHR但不含有本发明化合物或其组合物的等效样品之 间的FSHR活性发生可测量的变化。
本发明预想的取代基和变量的组合仅为形成稳定化合物的那些。本文所用的术语 “稳定”是指具有的稳定性足以允许制造，并且能保持化合物的完整性足够长的时间以用于 本文详述的各种目的(例如，向受试者性或预防性给药)。
本文的变量的任何定义中化学基团列表的记载包括该变量作为任何单个基团或 列出基团的组合的定义。本文的变量的实施方案的记载包括该实施方案作为任何单个实施 方案或与任何其他实施方案结合。
3.实施例化合物的描述
本发明的一方面提供通式I所示的化合物，
或药学上可接受的盐，式中：
X是O、S、SO、SO2、或NR；
Y是O、S、或NR；
Z是O、S、SO、SO2、或N；其中当Z是O、S、SO、或SO2时，p是0；
每个R独立地是氢，C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1- 4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的 杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；或
在同一个原子上的两个R与它们所连接的原子一起形成C3–10芳基，3-8元饱和或部 分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独 立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
环A是稠合C3–10芳基，稠合3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的稠合3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的稠 合5-6元单环杂芳环；
R1是–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC (O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2；
R2是–R、卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N (R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2；
R3是氢，C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地 选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5- 6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
每个R4独立地是–R、卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、- CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2；
R5是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元 单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
R6是氢，C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地 选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5- 6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代；
或者R5和R6与它们各自所连接的原子一起形成具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的 杂原子的3-8元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元杂芳环；上述 每个基团任选经取代；
n是0、1、或2；以及
p是0或1。
在某些实施例中，X是O。在某些实施例中，X是S。在某些实施例中，X是SO或SO2。在 某些实施例中，X是NR。
在某些实施例中，Y是O。在某些实施例中，Y是S。在某些实施例中，Y是NR。
在某些实施例中，Z是O。在某些实施例中，Z是S。在某些实施例中，Z是SO或SO2。在 某些实施例中，Z是N。
在某些实施例中，环A是稠合C3–10芳基。在某些实施例中，环A是稠合的3-8元饱和 或部分不饱和碳环。在某些实施例中，环A是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的稠 合的3-7元杂环。在某些实施例中，环A是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的稠合 的5-6元单环杂芳环。
在某些实施例中，环A是苯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、呋喃基、呋 咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、异噁唑基、吗啉基、噁 二唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑基；1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑 基、噁唑烷基、嘧啶基、哌嗪基、基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑 基、哒嗪基、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、 噻唑基、噻吩基、苯硫基、氧杂环丁烷基、或氮杂环丁烷基。
在某些实施例中，环A是苯基。
在某些实施例中，R1是–OR、–SR、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O) R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2。在某些实施例中，R1是–OR、–SR、-SO2R、或–SOR.在某些 实施例中、R1是-C(O)R、-CO2R、或-C(O)N(R)2。在某些实施例中，R1是-NRC(O)R、-NRC(O)N (R)2、-NRSO2R、或–N(R)2。
在某些实施例中，R1是–OR，并且R是氢。
在某些实施例中，R1是–OR，并且R是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱 和碳环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选 自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R1是–OR，并且R是C1–6脂族基团。在某些实施例中，R是甲基、乙 基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、直链或支链戊基、或直链或支链己基；上述每个基 团任选经取代。
在某些实施例中，R1是–OR，并且R是C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有 1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫 的杂原子的5-6元单环杂芳环。在某些实施例中，R是苯基，萘基，环丙基，环丁基，环戊基，环 己基，环庚基，金刚烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环壬烷基，[4.4.0]双环癸 烷基，[2.2.2]双环辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基(acridinyl)，吖辛因基 (azocinyl)，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基(benzothiofuranyl)，苯并苯硫基，苯并 噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑基，苯并四唑基，苯并异噁唑基，苯并异噻唑基，苯并咪唑啉 基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基，满基，烯基，噌啉基，十氢喹啉基，2H,6H-1,5,2-二噻嗪 基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，1H-吲唑 基，吲哚烯基(indolenyl)，二氢吲哚基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲哚，异吲哚 烯基(isoindolenyl)，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉 基，异噻唑基，异噁唑基，吗啉基，萘啶基，八氢异喹啉基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2, 4-噁二唑基；1,2,5-噁二唑基，1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶 基，菲咯啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯并氧硫杂环己二烯基(phenoxathiinyl)，吩噁嗪基，酞 嗪基，哌嗪基，基，蝶啶基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪 基，吡啶并噁唑，吡啶并咪唑，吡啶并噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基， 2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋喃基，四氢 异喹啉基，四氢喹啉基，6H-1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻 二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻蒽基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基(thienothiazolyl)，噻吩 并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1,2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基， 1,3,4-三唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环丁烷基，或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R2是氢。
在某些实施例中，R2是C1–6脂族基团。在某些实施例中，R2是C1–6脂族基团，其中脂族 基团是C1–6烷基。在某些实施例中，R2是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、直 链或支链戊基、或直链或支链己基；上述每个基团任选经取代。在某些实施例中，R2是C1–6脂 族基，其中脂族基团是C1–6烯基。
在某些实施例中，R2是C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地 选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5- 6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R2是苯基，萘基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚 烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环壬烷基，[4.4.0]双环癸烷基，[2.2.2]双环 辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基，吖辛因基(azocinyl)，苯并咪唑基，苯并呋喃基， 苯并噻吩基(benzothiofuranyl)，苯并苯硫基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑基，苯并 四唑基，苯并异噁唑基，苯并异噻唑基，苯并咪唑啉基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基，满基， 烯基，噌啉基，十氢喹啉基，2H,6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基，呋 喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，1H-吲唑基，吲哚烯基(indolenyl)，二氢吲哚 基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲哚，异吲哚烯基(isoindolenyl)，异苯并呋喃 基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉基，异噻唑基，异噁唑基，吗啉基，萘 啶基，八氢异喹啉基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑基；1,2,5-噁二唑基，1,3, 4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶基，菲咯啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯 并氧硫杂环己二烯基(phenoxathiinyl)，吩噁嗪基，酞嗪基，哌嗪基，基，蝶啶基，嘌呤 基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪基，吡啶并噁唑，吡啶并咪唑，吡啶并 噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基，2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基， 4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，6H-1,2,5-噻二 嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻蒽基，噻唑 基，噻吩基，噻吩并噻唑基(thienothiazolyl)，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三 嗪基，1,2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环 丁烷基，或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R2是卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、- CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2。
在某些实施例中，R2是F、Cl、Br、I、或卤代烷基。
在某些实施例中，R2是–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、-SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N (R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2。在某些实施例中，R是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂 环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选 经取代。在某些实施例中，R是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、直链或支链 戊基、或直链或支链己基；上述每个基团任选经取代。在其他实施例中，R是苯基，萘基，环丙 基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环 壬烷基，[4.4.0]双环癸烷基，[2.2.2]双环辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基，吖辛因 基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，苯并苯硫基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑 基，苯并四唑基，苯并异噁唑基，苯并异噻唑基，苯并咪唑啉基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基， 满基，烯基，噌啉基，十氢喹啉基，2H,6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋 喃基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，1H-吲唑基，吲哚烯基，二氢吲哚基，中 氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲哚，异吲哚烯基，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基， 异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉基，异噻唑基，异噁唑基，吗啉基，萘啶基，八氢异喹啉基，噁 二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑基；1,2,5-噁二唑基，1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基， 噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶基，菲咯啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯并氧硫杂环己二烯基， 吩噁嗪基，酞嗪基，哌嗪基，基，蝶啶基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基， 吡唑基，哒嗪基，吡啶并噁唑，吡啶并咪唑，吡啶并噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基， 吡咯啉基，2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋 喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，6H-1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基， 1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻蒽基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基， 噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1,2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三 唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环丁烷基，或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R2是氢、Br、CN、
在某些实施例中，R2是
在某些实施例中，R2是
在某些实施例中，R2是
在某些实施例中，R3是氢。
在某些实施例中，R3是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有 1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫 的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R3是任选经取代的C1–6脂族基团。在某些实施例中，R3是任选经取 代的C3–10芳基。某些实施例中，R3是任选经取代的3-8元饱和或部分不饱和碳环。在某些实施 例中，R3是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环。在某些实 施例中，R3是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环。
在某些实施例中，是R3是苯基，萘基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金 刚烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环壬烷基，[4.4.0]双环癸烷基，[2.2.2]双 环辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基，吖辛因基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩 基，苯并苯硫基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑基，苯并四唑基，苯并异噁唑基，苯并异 噻唑基，苯并咪唑啉基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基，满基，烯基，噌啉基，十氢喹啉基， 2H,6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑 啉基，咪唑基，1H-吲唑基，吲哚烯基，二氢吲哚基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲 哚，异吲哚烯基，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉基，异 噻唑基，异噁唑基，吗啉基，萘啶基，八氢异喹啉基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二 唑基；1,2,5-噁二唑基，1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶基，菲 咯啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯并氧硫杂环己二烯基，吩噁嗪基，酞嗪基，哌嗪基，基，蝶 啶基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪基，吡啶并噁唑，吡啶并咪 唑，吡啶并噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基，2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉 基，喹啉基，4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，6H- 1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻 蒽基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1, 2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环丁烷基， 或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，是R3是二氢呋喃[2,3-b]四氢呋喃，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基， 咪唑烷基，咪唑基，1H-吲唑基，吲唑烯基，二氢吲哚基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二 氢吲哚基，异吲哚烯基，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚基，异吲哚基，异喹 啉基，异噻唑基，异噁唑基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑基；1,2,5-噁二唑基， 1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉 基，吡唑基，哒嗪基，吡咯烷基，吡咯啉基，2H吡咯基，吡咯基，四氢呋喃基，6H-1,2,5-噻二嗪 基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻蒽基，噻唑基， 噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1,2,3-三唑基，1, 2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三唑基，或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R3是
在某些实施例中，每个R4独立地是氢。
在某些实施例中，每个R4独立地是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱 和碳环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选 自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，每个R4独立地是任选经取代的C1–6脂族基团。在某些实施例中， 每个R4独立地是任选经取代的C3–10芳基。某些实施例中，每个R4独立地是任选经取代的3-8 元饱和或部分不饱和碳环。在某些实施例中，每个R4独立地是任选经取代的具有1-4个独立 地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环。在某些实施例中，每个R4独立地是任选经取代的 具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环。
在某些实施例中，每个R4独立地是卤素、-卤代烷基、–OR、–SR、–CN、–NO2、-SO2R、- SOR、-C(O)R、-CO2R、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2R、或–N(R)2。
在某些实施例中，R5是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有 1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫 的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R5是任选经取代的C1–6脂族基团。在某些实施例中，R5是任选经取 代的C3–10芳基。某些实施例中，R5是任选经取代的3-8元饱和或部分不饱和碳环。在某些实施 例中，R5是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环。在某些实 施例中，R5是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环。
在某些实施例中，R5是C1–6脂族基团。在某些实施例中，R5是甲基、乙基、丙基、异丙 基、丁基、仲丁基、叔丁基、直链或支链戊基、或直链或支链己基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R5是苯基，萘基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚 烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环壬烷基，[4.4.0]双环癸烷基，[2.2.2]双环 辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基，吖辛因基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基， 苯并苯硫基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑基，苯并四唑基，苯并异噁唑基，苯并异噻 唑基，苯并咪唑啉基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基，满基，烯基，噌啉基，十氢喹啉基，2H, 6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉 基，咪唑基，1H-吲唑基，吲哚烯基，二氢吲哚基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲哚， 异吲哚烯基，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉基，异噻唑 基，异噁唑基，吗啉基，萘啶基，八氢异喹啉基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑 基；1,2,5-噁二唑基，1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶基，菲咯 啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯并氧硫杂环己二烯基，吩噁嗪基，酞嗪基，哌嗪基，基，蝶啶 基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪基，吡啶并噁唑，吡啶并咪 唑，吡啶并噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基，2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉 基，喹啉基，4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，6H- 1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻 蒽基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1, 2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环丁烷基， 或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R5和R6与它们各自所连接的原子一起形成具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-8元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元 杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R5是甲基、叔丁基、或-CD3。
在某些实施例中，R5是
在某些实施例中，Z是N，由Z、R5和R6形成的环是
在某些实施例中，R6是氢。
在某些实施例中，R6是C1–6脂族基团，C3–10芳基，3-8元饱和或部分不饱和碳环，具有 1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环，或者具有1-4个独立地选自氮、氧或硫 的杂原子的5-6元单环杂芳环；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R6是任选经取代C1–6脂族基团。在某些实施例中，R6是任选经取代 的C3–10芳基。某些实施例中，R6是任选经取代的3-8元饱和或部分不饱和碳环。在某些实施例 中，R6是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-7元杂环。在某些实施 例中，R6是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环。
在某些实施例中，R6是C1–6脂族基团。在某些实施例中，R6是甲基、乙基、丙基、异丙 基、丁基、仲丁基、叔丁基、直链或支链戊基、或直链或支链己基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R6是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、直链或支 链戊基、或直链或支链己基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R6是苯基，萘基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚 烷基，环辛基，[3.3.0]双环辛烷基，[4.3.0]双环壬烷基，[4.4.0]双环癸烷基，[2.2.2]双环 辛烷基，芴基，茚满基，四氢萘基，吖啶基，吖辛因基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基， 苯并苯硫基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并三唑基，苯并四唑基，苯并异噁唑基，苯并异噻 唑基，苯并咪唑啉基，咔唑基，NH-咔唑基，咔啉基，满基，烯基，噌啉基，十氢喹啉基，2H, 6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉 基，咪唑基，1H-吲唑基，吲哚烯基，二氢吲哚基，中氮茚基，吲哚基，3H-吲哚基，异二氢吲哚， 异吲哚烯基，异苯并呋喃基，异满基，异吲唑基，异二氢吲哚，异吲哚基，异喹啉基，异噻唑 基，异噁唑基，吗啉基，萘啶基，八氢异喹啉基，噁二唑基，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑 基；1,2,5-噁二唑基，1,3,4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，噁唑烷基，嘧啶基，菲啶基，菲咯 啉基，吩嗪基，吩噻嗪基，苯并氧硫杂环己二烯基，吩噁嗪基，酞嗪基，哌嗪基，基，蝶啶 基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪基，吡啶并噁唑，吡啶并咪 唑，吡啶并噻唑，吡啶基，吡啶基，嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基，2H-吡咯基，吡咯基，喹唑啉 基，喹啉基，4H-喹嗪基，喹喔啉基，奎宁环基，四氢呋喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，6H- 1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基，1,2,4-噻二唑基，1,2,5-噻二唑基，1,3,4-噻二唑基，噻 蒽基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，硫代苯基，三嗪基，1, 2,3-三唑基，1,2,4-三唑基，1,2,5-三唑基，1,3,4-三唑基，氧杂环丁烷基，氮杂环丁烷基， 或呫吨基；上述每个基团任选经取代。
在某些实施例中，R6是氢。
在某些实施例中，R6是甲基、叔丁基、或-CD3。
在某些实施例中，n是0。在某些实施例中，n是1。在某些实施例中，n是2。
在某些实施例中，p是0。在某些实施例中，p是1。
在某些实施例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、X、Y、Z、n、和p各自的定义如上所述，且按实施 例、类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-a所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X、Y、Z、和p各自的定义如上所述， 且按实施例、类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-b所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、Y、Z、n、和p各自的定义如上所述， 且按实施例、类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述
在某些实施例中，本发明提供通式I-c所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R5、R6、Z、和p各自的定义如上所述，且按实 施例、类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-d所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R5、和R6各自的定义如上所述，且按实施例、 类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-e所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、和R5各自的定义如上所述，且按实施例、 类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在其他实施例中，本发明提供通式I-f所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R5、和R6各自的定义如上所述，且按实施例、类 别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在其他实施例中，本发明提供通式I-g所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、和R5各自的定义如上所述，且按实施例、类别、 子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-h所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R5、R6、Z、和p各自的定义如上所述，且按实施 例、类别、子类和本文单独或结合进一步加以描述。
在某些实施例中，本发明提供通式I-f所示的化合物，其中R2是具有1-4个独立地 选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；R3是任选经取代的具有1-4个独立地选自氮、 氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环；且Z是N。
在某些实施例中，R5是任选经取代的C1–6脂族基团。
在某些实施例中，R5和R6与它们各自所连接的原子一起形成具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-8元杂环，所述杂环是任选经取代。
在某些实施例中，R6是任选经取代的C1–6脂族基团。
在某些实施例中，本发明提供通式I-h所示的化合物，其中R1是–OR，且R是C1–6脂族 基团；R2是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳基，所述杂环是任选 经取代；且Z是N。
在某些实施例中，R5是任选经取代的C1–6脂族基团。
在某些实施例中，R5和R6与它们各自所连接的原子一起形成具有1-4个独立地选自 氮、氧或硫的杂原子的3-8元杂环，所述杂环是任选经取代。
在某些实施例中，R6是任选经取代的C1–6脂族基团。
在某些实施例中，本发明提供表1中给出的化合物。
表1
在一些实施例中，本发明提供选自上文描述的化合物或其药学上可接受的盐。
各种结构示式可以显示杂原子，没有与其连接的基团、根、电荷或反离子。本领域普通技术人员会明白这样的示式意指杂原子与氢连接(例如，应理解为)。
在某些实施例中，按照以下流程A-C合成本发明的化合物。利用流程A-C制备化合 物的更具体实例在下面的实施例中提供。
流程A
流程B
流程C
4.用途、制剂和给药
药学上可接受的组合物
根据另一个实施方案中，本发明提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍 生物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的组合物。在本发明的组合物中化合物的量要 能在生物样品或病人中有效地可测量调节FSHR或其变体。在某些实施例中，在本发明的组 合物中化合物的量要能在生物样品或病人中有效地可测量调节FSHR或其变体在某些实施 例中，本发明的组合物被配制用于施用至有需要该组合物的病人。
本文所用的术语“病人”或“受试者”指动物，优选哺乳动物，最佳是人。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”指的是无毒的载体、佐剂、或媒介物， 它们不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性。用在本发明的组合物中的药学上可接 受的载体、佐剂或媒介物包括，但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白 (如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏 甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶 体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙基烯乙二醇、羧甲基纤维 素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙基烯乙二醇和羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”是指任何无毒性的盐、酯、酯的盐或本发明的化合物的 其它衍生物，它们被施加于接受者后能够直接或间接地提供本发明的化合物或具有抑制活 性的代谢物或残余物。
本发明的组合物通过口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、口腔、阴道或植入 容器给予。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘 内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选的是，组合物是经口服、腹膜内或静脉内给 予。本发明的组合物的无菌可注射形式包括水性或油性悬浮液。这些悬浮液按照在本领域 中已知的技术使用适合的分散或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂也可以是用无毒的 肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(例如在1,3-丁二醇中的溶液)制成的无菌可注射溶液或悬 浮液。所使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌 不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。
为此，任何可用的温和的固定油包括合成的单-或二-甘油酯。诸如油酸及其甘油 酯衍生物的脂肪酸可用于制备注射剂，如同天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻 油，尤其是它们的聚氧乙基化油。这些油溶液或悬浮液还含有长链醇稀释剂或分散剂，例如 羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们常用于制备药学上可接受的剂型制剂中，包括乳剂和 混悬剂。其它常用的表面活性剂，如吐温(Tweens)、司盘(Spans)和其它乳化剂或生物利用 度增强剂，它们常用于制备药学上可接受的固体、液体，或者其它剂型也可以用于配制的目 的。
本发明的药学上可接受的组合物以任何口服可接受的剂型口服给药。示例性口服 剂型是胶囊、片剂、水性混悬剂或溶液。对于口服用片剂，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。 通常也会加入润滑剂如硬脂酸镁。对于以胶囊形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和 干玉米淀粉。当需要口服水悬浮液时，活性成分与乳化剂和悬浮剂结合。如果需要的话，任 选地可加入某些甜味剂、调味剂或着剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物以直肠给药的栓剂形式给药。这些通过将 药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制成，其中所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温 度下为液体，因此将在直肠中熔融并释放出药物。这样的材料包括可可脂、蜂蜡和丙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物也可以局部给药，尤其当目标包括局部施用 容易到达的部位和器官，包括眼、皮肤或下肠道疾病。根据各个部位或器官容易制备适合的 局部制剂。
可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠剂来实现下肠道的局部施用。也可 使用局部透皮贴剂。
对于局部施用，在合适的软膏中配制药学上可接受的组合物，所述软膏含有悬浮 或溶解于一种或多种载体中的活性成分。局部施用本发明化合物的示例性载体包括矿物 油、液体凡士林、白凡士林、丙基烯二醇、聚氧乙基烯、聚氧丙基烯化合物、乳化蜡和水。可替 代地，在合适的洗液或乳膏中配制药学上可接受的组合物，所述洗液或乳膏含有悬浮或溶 解于一种或多种载体中的活性成分。合适的载体包括，但不限于，矿物油、脱水山梨醇单硬 脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、CETE芳基醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
本发明的药学上可接受的组合物任选地通过鼻气雾剂或吸入给药。这种组合物根 据药物制剂领域中公知的技术制备，可制成在盐水中的溶液，采用苯甲醇或其他合适的防 腐剂、吸收促进剂以提高生物利用度，也可采用碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散 剂。
最优选地，本发明的药学上可接受的组合物配制用于口服给药。这类制剂可与或 不与食物施用。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在 其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物施用。
本发明的化合物任选地与载体材料组合以产生单一剂型的组合物，所述化合物的 量将取决于所的宿主、具体的给药模式。优选地，提供的组合物应配制成0.01-100mg/ kg体重/化合物之间的剂量，可以每天给予病人接受这些组合物。
还应当理解，对于任何特定病人的具体剂量和方案将取决于多种因素，包括 采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食状况、给药时间、排泄速 率、药物组合、以及医师的判断和具体疾病的严重程度。在组合物中本发明化合物的量 还将取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
在某些实施例中，本发明提供了在病人或生物样品中以正变构方式激动FSHR或其 突变体的方法，所述方法包括向所述病人给予本发明的化合物或者使所述生物样品与本发 明的化合物接触。
在某些实施例中，本发明涉及本发明的化合物和/或其生理学上可接受的盐在调 节FSH受体(特别是FSH存在下)中的用途。术语“调节”表示基于特定的本发明化合物的作用 而使FSHR介导的信号转导发生任何的变化，本发明化合物能够与FSHR靶相互作用，使得识 别、结合和激活成为可能。化合物的特征是具有与FSHR高的亲和力，确保可靠的结合，较佳 是对FSHR作正变构调节。在某些实施例中，物质是单特异性的，以保证对单个FSHR靶的唯一 和直接识别。在本发明的上下文中，术语“识别”–非限制性地-涉及在特定化合物和靶之间 的任何类别的相互作用，特别是共价或非共价结合或缔合，例如共价键、亲水/疏水相互作 用、范德华力、离子对、氢键、配体-受体相互作用等等。这样的缔合也可以包含其他分子(例 如肽、蛋白质或核苷酸序列)的存在。本发明的受体/配体相互作用的特征是高亲和力、高选 择性以及与其他靶分子有极小的甚至没有交叉反应，从而排除了对受试者产生不健康 的和有害的作用。
在某些实施例中，本发明涉及调节FSH受体的方法，较佳地以正变构方式调节，其 中能够表达FSH受体的系统在FSH存在下与本发明的至少一种通式I所示的化合物和/或生 理学上可接受的盐在调节所述FSH受体的条件下接触。在某些实施例中，所述系统是细胞系 统。在其他实施例中，所述系统是体外翻译系统，所述翻译系统基于蛋白质合成，不需要活 细胞。细胞系统定义为任何受试者，只要该受试者包含细胞。因此，细胞系统可以选自单细 胞、细胞培养基、组织、器官和动物。在某些实施例中，调节FSH受体的方法在体外进行。本说 明书上文有关通式I化合物(包括其任何优选实施例)的教导是有效的和适用的，当在用调 节FSHR的方法中不限于通式I化合物及其盐。
在某些实施例中，本发明的化合物表现出有利的生物活性，该生物活性容易在细 胞培养基分析试验中得到证明，例如在本说明书或现有技术(参见例如WO2002/09706，其 内容纳入此处作为参考)中描述的那些分析试验。在所述分析试验中，本发明的化合物优选 地表出并引起激动剂效应。在某些实施例中，本发明的化合物具有FSHR激动剂活性，以EC50标准表示，EC50小于5μM。在某些实施例中，EC50小于1μM。在某些实施例中，EC50小于0.5μM。在 某些实施例中，EC50小于0.1μM。“EC50”是化合物达到FSH最大应答一半时的有效浓度。
如本文中所讨论的，这些信号传导途径与各种疾病相关，包括生育障碍。通过本发 明的方法的病症/疾病包括但不限于：性腺机能减退、隔离特发性性腺机能减退、卡尔 曼综合征、特发性性腺机能减退、颅咽管瘤、结合垂体激素缺乏症、能生育的无睾综合征、异 常的LH的β亚基、异常的FSH的β亚基、肿块、垂体腺瘤、囊肿、转移至鞍的转移性癌症(妇女的 乳腺、男性的肺和前列腺)、浸润性病变、血素沉着症、结节病、组织细胞增多症、淋巴瘤、 淋巴细胞性垂体炎、感染、脑膜炎、垂体卒中、高泌乳素血症、甲状腺功能低下、故意(医源 性)继发性性腺功能减退、空蝶鞍、垂体梗死、席汉综合征、神经性厌食症、先天性肾上腺皮 质增生症、以及与GnRH缺乏相关的病症。因此，使本发明的化合物通过与一或多个所述信号 转导通路相互作用来预防和/或依赖于所述信号转导通路的疾病。因此，本发明涉及根 据本发明的化合物用作本说明书描述的信号转导通路(优选FSHR介导的信号转导通路)的 调节剂，较佳是激动剂，更好是正变构调节剂。一般认为，本发明的化合物能够与胞内受体 结构域结合，与FSH没有竞争性相互作用，但它们作为FSH的正变构增强剂作用在其受体。非 竞争性相互作用指本发明的化合物表现出的激动剂活性性质，其中化合物激活FSHR而不会 显著地减少FSH与FSHR的结合力度。
在某些实施例中，本发明针对刺激卵泡发育、排卵诱导、控制卵巢过度刺激、辅助 生殖技术(包括体外受精)、男性性腺功能减退和男性不育，包括某类无法生产精子的病症。
本发明的另一个目的是提供由FSHR活性引致、介导和/或蔓延的疾病的方法， 其中向有需要这种的哺乳动物给予本发明的至少一种通式I化合物和/或生理上可接 受的盐。在某些实施例中，本发明提供用于生育障碍的方法，其中向有需要这种的 哺乳动物给予本发明的至少一种通式I化合物和/或生理上可接受的盐。在某些实施例中， 给予如上所述的有效量的化合物。在某些实施例中，是口服给药。
在某些实施例中，方法在于达到诱导排卵和/或控制性超排卵。在又一优选方 面，方法是构成体外受精方法的基础，该方法包括以下步骤：(a)用上述方法 哺乳动物，(b)收集所述哺乳动物的卵子，(c)使所述卵子受精，以及d)将所述受精卵在宿主 哺乳动物内着床。所述宿主哺乳动物可以是接受的哺乳动物(即病人)或者者。有 关本发明及其实施方式的教导是有效的和适用的，如果看起来合理，可不限于本发明的治 疗方法。
本发明的方法可以在体外或体内进行。可在研究和临床应用的过程中用体外试验 测定对用本发明化合物具体细胞的敏感性。通常混合培育细胞培养物与各种浓度的本 发明化合物足够时间，其时间使活物得以调节FSHR活性，培养时间常介于1小时与1周 之间。可用活检样品或细胞系的培养细胞进行体外处理。在本发明的一个优选方面，刺激卵 泡细胞成熟。然后计数和进一步处理后存留的活细胞。
宿主或病人可属于哺乳动物，如灵长类动物，具体是人；啮齿动物，包括小鼠、大鼠 和仓鼠；兔、马、牛、狗、猫等。供实验研究的感兴趣动物模型可提供人类疾病的模型。
为了鉴定信号转导通路和检测各种信号转导通路之间的相互作用，许多科学家开 发了适当的模型或模型系统，例如细胞培养模型和转基因动物模型。为了检测信号转导级 联反应所处的某些阶段，可采用相互作用的化合物来调节信号。可将本发明化合物用作试 剂来检测动物模型和/或细胞培养模型或本申请书中所提及临床疾病中的FSHR依赖性信号 转导通路状况。
本说明书上述段落描述的用途可在体外或体内模型中进行。通过本说明书上下文 描述的技术监测所述调节。在某些实施例中，体外用途用在患有生育障碍的人样本。通过测 试多种特异性化合物和/或其衍生物就能选择出最适合人病人的活性成分。所选衍生 物的体内剂量率宜与对FSHR的易感性和/或考虑到体外(试验)数据而定的病人疾病的严重 程度相匹配，从而显著提高效果。此外，本说明书以下涉及通式(1)化合物及其衍生物 在制备预防、或和/或控制疾病进程的药物上的用途的教导是有效的和适用的，如果看 起来合理，可不限于本发明化合物调节FSHR活性的用途。
本发明还涉及通式I所示的化合物和/或其生理学上可接受的盐在预防性或 性和/或监测由FSHR活性引致、介导和/或蔓延的疾病中的用途。此外，本发明涉及通式 I所示的化合物和/或其生理学上可接受的盐在制备用于预防性或性和/或监测由 FSHR活性引致、介导和/或蔓延的疾病的药物中的用途。在某些实施例中，本发明提供了通 式I所示的化合物和/或其生理学上可接受的盐在制备用于预防性或性由FSHR介 导的疾病的药物中的用途。
此外，通式I所示的化合物和/或其生理上可接受的盐可以用作制备其他药物活性 成分的中间体。药物优选地以非化学方法制备，例如通过将活性成分与至少一种固体、液体 和/或半液体载体或赋形剂结合，任选地在合适的剂型中掺合一或多种其他活性物质。
本发明的另一个目的是本发明的通式I所示的化合物和/或其生理上可接受的盐 用于预防性或性和/或监测由FSHR活性引致、介导和/或蔓延的疾病。本发明的另 一个优选目的涉及本发明的通式I所示的化合物和/或其生理上可接受的盐用于预防性或 性和/或监测生育障碍。此外，本说明书有关通式(1)所示的化合物(包括其任何优 选实施例)的教导是有效的和适用的，可不限于通式(1)所示的化合物及其盐用于预防性或 性和/或监测生育障碍。
本发明通式I所示的化合物可在发病前或后给予一次或多次作为。本发明的 上述化合物和医学产品特别用于性。相关作用指某程度上解除一种或多种疾 病症状，或部分或完全地将与疾病或病理相关的或导致疾病或病理改变的一种或多种生理 或生化参数逆转成正常状态。假如化合物以不同的时间间隔给予，监测可被认为是一种治 疗，以增强应答和完全根除疾病病原体和/或症状。可以施加同一种或不同种化合物。也可 以使用药物来减低发展疾病或者甚至预先防止与FSHR活性相关的病症出现，或者出现 的或持续有的病症。本发明涉及的疾病或病症较佳地是生育障碍。
在本发明的意义中，如果受试者拥有上述生理或病理状况的前置条件，例如家族 性倾向、基因缺陷、或者曾经有过病史，给予预防性是可取的。
本发明也涉及含有至少一种本发明化合物和/或其药学上可用的衍生物、盐、溶剂 化物和立体异构体，包括它们的各种比例混合物的药物。在某些实施例中，本发明还涉及包 含至少一种本发明化合物和/或其生理学上可接受的盐的药物。
本发明意义的“药物”是药物领域的任何药剂，包括一或多种通式I化合物或其制 剂(例如药物组合物或药物制剂)，可用于预防、、跟进或后调养患有与FSHR活性相 关的疾病的病人，所述病人至少暂时地显示整体病况或病人机体个别部分的病理改变。
在各个实施例中，活性成分可以单独给予或者与其他一起联用。在药物组合 物中使用根据本发明的一或多□化合物可取得增效作用，即通式I化合物与作为活性成分 的至少一种其他药剂联用，该其他药剂可以是通式I的另一种化合物或者具有不同结构骨 架的化合物。该些活性成分可以同时或依次使用。本发明的化合物适合于与已知的生育诱 导剂联用。优选地，另外的活剂选自以下组内：FSH、α-FSH(GonalF)、β-FSH、LH、hMG和 2-(4-(2-氯-1,2-二苯基乙烯基)-苯氧基)-N,N-二乙基-柠檬酸乙胺(柠檬酸氯米芬)。其他 排卵添加剂已为本领域技术人员所知(参见例如WO2002/09706，其内容纳入此处作为参 考)，可与本发明的化合物一起使用。
本发明的另一方面提供药盒，其由分开包装的有效量的本发明化合物和/或其药 学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物和立体异构体，包括它们的各种比例混合物，以及任选 地有效量的其他活性成分所组成。该药盒包含合适的容器，例如，盒子、各种瓶子、袋子或安 瓿。例如，该药盒可包含分置的安瓿，每个安瓿装有溶解形式或冻干形式的有效量本发明化 合物和/或其药学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物和立体异构体，包括它们的各种比例混 合物，和有效量的其他活性化合物。
本文所用的术语“”指逆转、减缓、延迟此处描述的疾病或病症或者一或多种 症状的出现或抑制此处描述的疾病或病症或者一或多种症状的发展。在一些实施方案中， 在一或多种症状已经出现后给予。在其他实施方案中，是在没有症状的情况下给 予。例如，在易感个体的症状发作之前给予(例如，基于症状历史和/或遗传或其它感受 因素)。在症状消失后可继续，例如防止或延迟其复发。
根据本发明的方法采用任何能有效地或减轻上述病症的严重程度的给药量 和给药途径给予化合物和组合物。所需要的确切量视乎不同受试者会有所不同，取决于人 种、年龄和受试者的一般状况、感染的严重程度、特定药物、给药方式等。本发明的化合物优 选配制成剂量单元形式，易于给药和保持剂量均一。如本文中所使用的术语“单位剂型”指 在物理上分开的单位，适于给待的病人单一剂量使用。然而，可以理解的是，本发明的 化合物与组合物的每日总用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任一具体病人 或生物的特定剂量水平取决于多种因素，包括，需要的具体病情及其严重程度、所选用 具体化合物的活性、所使用的具体组合物、年龄、体重、健康状况、性别、饮食状态、给药时间 和途径、具体化合物的排泄率、的持续时间、与所述用具体化合物联用或共享的药物等 等本领域内公知的因素。
本发明的药学上可接受的组合物可经口服、直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜 内、局部(如通过粉剂、软膏、或滴剂)、颊内、口用或鼻用喷雾剂等等途径施用于人和其他动 物，这取决于感染的严重程度。在某些实施例中，本发明的化合物以剂量水平约0.01mg/kg 受试者体重至100mg/kg受试者体重，优选约1mg/kg受试者体重至50mg/kg受试者体重经口 服或肠胃外给药，每天一次或更多次，以获得所需的效果。
适合口服给药的液体剂型包括，但不限于，药学上可接受的乳剂、微乳液、溶液、悬 浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物外，液体剂型任选地含有本领域中常用的惰性稀释剂 (例如水或其他溶剂)，增溶剂和乳化剂(例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲 酸苄酯、丙基烯二醇、1,3-丁基烯二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、 胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨醇的脂肪酸酯、以 及它们的混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括助剂如润湿剂、乳化剂和悬浮 剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
注射制剂，例如无菌可注射的水性或油性悬浮液，是按照已知技术使用适合的分 散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是用无毒性的肠胃外可接受的稀释 剂或溶剂(例如在1,3-丁二醇中的溶液)配制成无菌注射溶液、悬浮液或乳液。可采用的可 接受的载体和溶剂中有水、林格氏溶液、U.S.P和等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌的不 挥发性作为油溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的单甘油酯或 二甘油酯。此外，制备注射剂可使用脂肪酸例如油酸。
在使用之前，通过细菌截留过滤器进行灭菌，或以灭菌固体组合物的形式掺入灭 菌剂，所述组合物可溶解或分散在灭菌水或其它灭菌可注射介质中，以将注射用制剂灭菌。
为了延长本发明化合物的作用，一般会减慢化合物经皮下或肌肉注射的吸收。这 可通过使用水溶性差的结晶或非晶态物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率取决于 它的溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和结晶形式而变化的。或者，通过将化合物溶 解或悬浮在油类载体中，延迟肠胃外给药的化合物的吸收。在可生物降解的聚合物(聚交 酯-聚乙醇酸交酯)中形成化合物的微胶囊基质，制备注射剂的储库形式。根据化合物与聚 合物的比例和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。其它可生物降解的聚 合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。将化合物包埋在与机体组织相容的脂质体或微乳 液中，也可制备贮库式可注射制剂。
用于直肠或阴道给药的组合物优选地是栓剂，所述栓剂可通过将本发明的化合物 与合适的无刺激性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡混合来制备，其中所述赋 形剂在室温下为固体，但在体温下为液体，因此将在直肠或阴道腔中熔融并释放出活性化 合物。
用于口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和粒剂。在所述固体剂型中，活性 化合物与至少一种惰性的药用可接受赋形剂或载体混合，所述药用可接受赋形剂或载体包 括柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填料或补充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖和硅 酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c) 致湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、特定的硅酸盐和 碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如十六烷 醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸 钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基磺酸钠及其混合物。在胶囊、片剂或丸剂的情况下， 剂型中还可含有缓冲剂。
相似类型的固体组合物还可以作为填料用于软或硬填充的明胶胶囊，所述胶囊使 用例如乳糖或奶糖，以及大分子量的聚乙二醇等作为赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和粒 剂的固体剂型可以采用包衣和外壳制备，例如肠溶衣和药物配制领域公知的其它包衣。它 们任选地含有不透明剂，并且成为组合物，任选地以滞后的方式，仅仅(或优选)在肠道的特 定部位释放活性成分。可使用的包埋组合物的例子包括聚合物和蜡。相似类型的固体组合 物还可以作为填料用于软或硬填充的明胶胶囊，所述胶囊使用例如乳糖或奶糖，以及大分 子量的聚乙二醇等作为赋形剂。
活性化合物也可与一种或多种赋形剂，例如上文描述的赋形剂，一起配制为微胶 囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和粒剂的固体剂型可以采用包衣和外壳制备，例如肠溶 衣、控释包衣和药物配制领域公知的其它包衣。在所述固体剂型中，活性化合物与至少一种 惰性稀释剂混合，所述稀释剂例如是蔗糖、乳糖或淀粉。正常实践中，这样的剂型也包括除 惰性稀释剂之外的压片润滑剂和其它压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂 或丸剂的情况下，剂型中还可含有缓冲剂。它们任选地含有不透明剂，并且成为组合物，任 选地以滞后的方式，仅仅(或优选)在肠道的特定部位释放活性成分。可使用的包埋组合物 的例子包括聚合物和蜡。
用于局部或经皮给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、 粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性化合物在灭菌条件下与药用可接受载体以及任何 需要的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用的制剂、滴耳剂和滴眼剂也在本发明考虑的范围 内。另外，本发明涵盖使用经皮贴片，其额外优点是能够可控地向机体递送化合物。在适当 的介质中溶解或分散化合物，可制成这种剂型。也可使用吸收增强剂，用于增加化合物通过 皮肤的通量。提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中，可以控制所述速率。
根据一个实施方案，本发明涉及一种在生物样品中以变构方式调节FSHR活性的方 法，所述方法包括使所述生物样品与本发明的化合物或包含本发明化合物的组合物接触的 步骤。
根据另一个实施方案，本发明涉及一种在生物样品中以正变构方式调节FSHR或其 突变体的活性的方法，所述方法包括使所述生物样品与本发明的化合物或包含本发明化合 物的组合物接触的步骤。
本发明的化合物是FSH受体的强选择性调节剂。它们对FSH受体的选择性是对LH受 体的选择性的3-10倍，甚至是对TSH受体的选择性的10-100倍，而对不相关的G蛋白质结合 受体(GPCR)或非GPCR靶的EC50或IC50值不超过10μM。本发明包括使用本发明的化合物来调 控和/或调节FSHR的信号传导级联反应，从而为诊断和/或由FSHR信号转导引起的任何 疾病提供研究工具。
例如，体外使用本发明的化合物作为理解FSH生物作用的独特工具，所述生物作用 包括评价许多因子，这些因子被认为影响FSH生产以及FSH与FSHR相互作用(例如FSH信号转 导/受体激活的机制)，以及被FSH生产以及FSH与FSHR相互作用所影响的许多因子。本发明 的化合物也可用在研发与FSHR相互作用的其他化合物，这是因为本发明的化合物提供了进 行这种研发的重要的结构-活性关系(SAR)信息。本发明的化合物与FSHR结合，可用作检测 活细胞上、固定细胞上、生物流体内、组织匀浆内、纯的天然材料内等等的FSHR的试剂。例 如，通过标记所述化合物，人们就能够鉴定到其表面上具FSHR的细胞。另外，由于本发明的 化合物具有能够与FSHR结合的能力，它们可用在原位染、FACS(荧光活化细胞分拣)、蛋白 质印迹、ELISA(酶联免疫吸附试验)、受体纯化中，或者用于纯化在细胞表面上或透化细胞 内表达FSHR的细胞。
本发明的化合物也可用作各种医学研究和诊断用途的商业研究试剂。这样的用途 包括但不限于：在各种功能性试验中用作定量候选FSH激动剂的活性的校准标准；在随机化 合物筛选中用作阻断剂，即在寻新的FSH受体配体家族时，可使用化合物来阻断本发明要 求保护的FSH化合物的恢复；与FSHR受体在共结晶中使用，即本发明的化合物允许化合物与 FSHR结合形成晶体，从而通过X射线晶体照相术来确定受体/化合物的结构；用于其他研究 和诊断应用，其中FSHR较佳地被激活，或这样的激活相对于已知量的FSH激动剂能方便地进 行校准；用在分析试验中作为探针来确定细胞表面上FSHR的表达；以及用于研发分析试验 中检测FSHR结合配体所在的位点的化合物。
可施加本发明的化合物或者将本发明的化合物与物理手段结合来诊断效果。 含有所述化合物的药物组合物以及所述化合物用于FSHR介导的病症是有前景的一种 新方法，可应用在各种不同的中，能直接和实时改善人或动物的健康状况。其效果对有 效地不育症特别有利，不论是单独使用或与其他诱导生育的方案一起使用。特别 地，本发明的化合物在诱导排卵和辅助生殖技术中加强了天然FSH作用。本发明的口服生物 利用度和新的活性化学物质更加方便了病人和医生的顺从性。
本发明化合物在初筛是有活性的(CHO细胞在有或无FSHR情况下)、在次筛(对TSHR 和LHR没有活性或活性低)是有选择性的、在颗粒细胞雌二醇酶分析试验是有效力的。体外 没有观察到hERG或任何毒性作用。
在某些实施例中，本发明提供一种体外受精的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)按照上述方法哺乳动物，
(b)收集所述哺乳动物的卵子，
(c)使所述卵子受精，以及
(d)将所述受精卵在宿主哺乳动物内着床。
通式I化合物及其盐、异构体、互变异构体、对映体形式、非对映体、外消旋体、衍生 物、前药和/或代谢物的特征是高特异性和稳定性、低制造成本和方便处理。这些特征构成 能重复再现作用的基础，其中包括没有交叉反应，并且可靠安全地与靶结构相互作用。
本文所用的术语“生物样品”包括，但不限于，细胞培养物或其提取物、从哺乳动物 或其提取物获得的活组织检查材料、以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或者其他体液 或其提取物。
调节生物样品中的FSHR或其突变体的活性可用于各种本领域技术人员已知的各 种目的。这类目的的实例包括，但不限于，输血、器官移植、生物试样储存和生物试验。
具体实施方式
如在下面的实施例所描述那样，在某些示例性实施方案中按照以下一般程序制备 化合物。应当理解，尽管一般方法描述了本发明某些化合物的合成，但下面的一般方法以及 本领域普通技术人员所公知的其他方法的也适用于合成本文描述的所有化合物及每个化 合物的子类和种类。
以下实施例使用的化合物编号对应于上文的化合物编号。
1HNMR(核磁共振)在Bruker400MHz光谱仪上记录1HNMR，用氘代溶剂的残留信号 作为内标。相对于四甲基硅烷记录化学位移，以在每百万份(ppm)表示。1HNMR数据记录如 下：化学位移(多重性、耦合常数和氢的数目)。多重性表示如下：s(单峰)，d(双峰)，t(三重 峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(宽)。
在以下条件下进行LCMS-分析：
方法A：0.1％TFA水溶液，B：0.1％TFA在ACN中的溶液
运行时间：6.5min
流速：1.0mL/min
梯度：5-95％B，4.5min，波长：254和215nM.
柱：WatersSunfireC18，3.0x50mm，3.5um正向模式
质量扫描：100-900Da
流程1：
实施例1
7-甲氧基-8-(1H-吡唑-4-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(1)
步骤1：3-溴-1-(2,4-二羟基苯基)丙-1-酮
0℃和氮气气氛下边搅拌边向间苯二酚(25g，0.22mol)和3-溴丙酸(38.3g， 0.25mol)滴加入三氟甲磺酸(75mL，0.84mol)。加入完成后，反应混合物在80℃加热30分钟。 反应混合物冷却至室温，加入冰水淬灭(200mL)，用DCM(500mL)萃取。水相再用DCM (2x100mL)萃取；有机相合并，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到所希望的化合物(40g，72％)， 为橙固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.2(bs，1H)，10.6(bs，1H)，7.77-7.75(d，J＝8Hz，1H)， 6.38-6.35(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，6.26-6.26(d，J＝4.0Hz，1H)，3.74(t，J＝6.8Hz，2H)， 3.61-3.57(dd，J＝6.0，11.2Hz，2H)。
步骤2：7-羟基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
在30分钟内向2MNaOH(92mL，2.33mol)的冰冻溶液分批加入3-溴-1-(2,4-二羟基 苯基)丙-1-酮(38g，0.155mol)。得到的悬液室温搅拌2小时。反应混合物冷却至0℃；用50％ 硫酸水溶液调pH至约2。滤出固体，室温搅拌多10分钟，过滤，高真空干燥，得到所希望的化 合物(16g，63％)，为褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.52(bs，1H)，7.61-7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，6.48-6.45 (dd，J＝4.0，12.0Hz，1H)，6.29-6.20(d，J＝4.0Hz，1H)，4.44(t，J＝4.0Hz，2H)，2.65(t，J＝ 4.0Hz，2H)。
步骤3：7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
在室温和氮气气氛下边搅拌边向7-羟基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮(27g， 0.16mol)在丙酮(700mL)中的溶液分批加入干K2CO3(45.6g，0.32mol)。反应混合物室温搅拌 10分钟，然后室温滴加入(65.4g，0.46mol)。反应混合物室温搅拌4小时。滤出反应混 合物，真空浓缩。粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(100mL)、盐水(50mL)洗涤，硫酸钠干燥， 真空浓缩，得到所希望的化合物(15g，89％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.85-7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，6.60-6.57(dd，J＝4.0， 12.0Hz，1H)，6.41-6.41(d，J＝4.0Hz，1H)，4.52(t，J＝8.0Hz，2H)，3.77(s，3H)，2.76(t，J＝ 4.0Hz，2H)。
步骤4：6-溴-7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
在室温和氮气气氛下向7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮(30g，0.16mol)在 乙腈：二乙醚混合物(100：300mL)中的溶液分批加入硅胶60-120目(1.5g)和NBS(33g， 0.18mol)。反应混合物室温搅拌14小时。滤出反应混合物，真空浓缩。粗产物经柱谱法纯 化，采用石油醚/乙酸乙酯(9：1)为洗脱剂，得到所希望的化合物(10g，72％)，为浅褐固 体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.82(s，1H)，6.73(s，1H)，4.53(t，J＝8.0Hz，2H)，3.89 (s，3H)，2.72(t，J＝8.0Hz，2H)。
步骤5：(6-溴-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3(4H)-亚基)(羟基)乙酸乙酯
在室温和氮气气氛下将二异丙胺(7mL，0.3958mol)溶解在干THF(50mL)中。反应混 合物冷却至-78℃，在30分钟内滴加入正丁基锂(1.6M在己烷中的溶液，29.2mL，0.04mol)。 滴加完成后，在同一温度下搅拌反应混合物，然后缓慢地升温至-10℃，搅拌多30分钟。反应 混合物再次冷却至-78℃，在30分钟内滴加入6-溴-7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮 (10g，0.03mol)在THF(50mL)中的溶液，在-78℃搅拌。1小时后，-78℃滴加入草酸二乙酯 (7.8mL，0.05mol)；反应混合物缓慢地升温至0℃，搅拌1小时。反应混合物冷却至-5℃加入 1.5NHCl溶液淬灭，用乙酸乙酯(100mLx2)萃取。有机层合并，用水(100mL)、盐水(50mL) 洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，得到所希望的化合物(10g，72％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ.8.04(s，1H)，6.43(s，1H)，5.32(s，2H)，4.40-4.32(m， 2H)，3.95(s，3H)，1.42-1.37(m，3H)。
步骤6：1-(3-噻吩基)肼羧酸叔丁酯
室温和氮气气氛下向3-溴噻吩(10g，0.061mol)在DMSO(100mL)中的溶液加入肼基 羧酸叔丁酯(16.3g，0.122mol)、碳酸铯(40g，0.122mol)，然后加入CuI(1.2g，0.006mol)和 4-羟基-L-脯氨酸(1.6g，0.01mol)。反应混合物在80℃搅拌14小时。反应混合物冷却至室 温，加入水(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。有机层合并，用水(100mLx2)、盐水 (100mL)洗涤，硫酸钠干燥，真空蒸发。粗产物经柱谱法纯化，采用石油醚和乙酸乙酯(7： 3)为洗脱剂，得到标题化合物(3.5g，27％)，为褐液体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.37-7.35(dd，J＝4.0，5.2Hz，1H)，7.31-7.29(d，J＝ 8.0Hz，1H)，7.14-7.13(dd，J＝4.0，5.2Hz，1H)，5.09(bs，2H)，1.47(s，9H)。
步骤7：3-噻吩基肼盐酸盐
室温和氮气气氛下边搅拌边向1-(3-噻吩基)肼羧酸叔丁酯(3.5g，0.0163mol)在 二乙醚(10mL)中的溶液加入HCl在己烷(30mL)中的溶液。反应混合物室温搅拌8小时。减压 除去有机溶剂，得到所希望的化合物(2.4g，97％)，为浅褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.08(bs，3H)，8.20(bs，1H)，7.48-7.46(dd，J＝3.2, 5.2Hz，1H)，6.87-6.85(dd，J＝1.2,4.8Hz，1H)，6.72-6.71(dd，J＝1.6，3.2Hz，1H)。
步骤8：8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 乙酯
室温和氮气气氛下向(6-溴-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3(4H)-亚基)(羟基) 乙酸乙酯(8.0g，0.0224mol)在乙醇(200mL)和乙酸(200mL)的混合物中的溶液加入3-噻吩 基肼盐酸盐(4.4g，0.0291mol)。反应混合物在100℃搅拌4小时。反应混合物在高真空下浓 缩。残留物溶解在乙酸乙酯(40mL)中，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥，真空浓 缩。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯，得到所希望的化合物(8.5g，87％) 为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.57-7.55(dd，J＝4.0，5.2Hz，1H)，7.52-7.50(dd，J＝ 4.0，5.2Hz，1H)，7.22-7.21(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)，6.94(s，1H)，6.60(s，1H)，5.56(s，2H)， 4.47-4.41(dd，J＝8.0，12Hz.2H)，3.88(s，3H)，1.42(t，J＝8.0Hz，3H)。
步骤9：8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸
室温下向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸乙酯(3g，0.0069mol)在THF(70mL)、水(20mL)、甲醇(10mL)的混合物中的溶液加入 LiOH.H2O(0.857g，0.0207mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合物蒸发，用1.5NHCl 溶液酸化。滤出固体，干燥，得到所希望的化合物(2.8g，99％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.28(bs，1H)，8.01-8.00(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)， 7.87-7.85(dd，J＝4.0，5.2Hz，1H)，7.35-7.33(dd，J＝4.0，8.0Hz，1H)，6.83(s，1H)，6.73 (s，1H)，5.50(s，2H)，3.82(s，3H)。m/z：407[M+H]+。
步骤10：8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸叔丁基-甲基-酰胺(4)
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(2.8g，0.0069mol)在DCM(50mL)中的溶液加入正叔丁基甲胺(718mg， 0.0083mol)、HATU(3.14g，0.0083mol)和二异丙基乙胺(1.8mL，0.0103mol)。反应混合物室 温搅拌16小时。反应混合物用碳酸氢钠(10mL，10％)淬灭，DCM(2x50mL)萃取。有机层合并， 用NaHCO3溶液(1x100mL，10％溶液)、盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。真空移除溶剂； 粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的化合物(3.2g， 98％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.98-7.97(dd，J＝1.4,3.2Hz，1H)，7.80-7.85(dd，J＝ 3.2,4.7Hz，1H)，7.33-7.32(dd，J＝1.3,5.1Hz，1H)，6.83(s，1H)，6.76(s，1H)，5.37(s，2H)， 3.81(s，3H)，3.15(s，3H)，1.47(s，9H)。m/z：476[M+H]+。
步骤11：7-甲氧基-8-(1H-吡唑-4-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(1)
室温和氮气气氛下向8-溴-N-(叔丁基)-7-甲氧基-N-甲基-1-(噻吩-3-基)-1,4- 二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺(1g，0.0021mol)在二噁烷(20mL)中的溶液加入4- (4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊-2-基)-1H-吡唑(611mg，0.0031mol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(86mg，0.0001mol)和氟化铯(800mg，0.0053mol)。反应混合物脱氮气20分钟， 室温加入水。反应混合物100℃搅拌12小时。反应混合物经硅藻土过滤，DCM(20mL)洗涤。滤 液真空下浓缩；粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，硫酸钠干燥。真 空移除有机溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯，得到所希望的化合 物(0.5g，51％)为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.02-8.01(dd，J＝1.4,3.2Hz，1H)，7.89-7.87(dd，J＝ 3.2,5.1Hz，1H)，7.54(bs，2H)，7.37-7.36(dd，J＝1.4,5.1Hz，1H)，6.85(s，1H)，6.74(s， 1H)，5.35(s，2H)，3.83(s，3H)，3.16(s，3H)，1.42(s，9H)。m/z：464[M+H]+。
实施例2
7-甲氧基-8-吡啶-3-基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸叔丁基-甲基-酰胺(2)
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(实施例1，步骤10)(100mg，0.2mmol)在DME(10mL)中的溶 液加入吡啶-3-硼酸(52mg，0.4mmol)、四(三苯膦)钯(13mg，0.01mmol)和碳酸钾(90mg， 0.6mmol)。反应混合物脱氮气10分钟，加入水(1mL)。反应混合物在90℃搅拌16小时。反应混 合物经硅藻土过滤。滤液在真空下浓缩；粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(10ml)、盐水 (10mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空移除溶剂，获得粗产物。粗产物用二乙醚(5mL)处理成浆液， 过滤，干燥，得到所希望的化合物(95mg，98％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.50-8.47(m，2H)，7.67-7.64(m，1H)，7.53-7.52(dd，J＝ 1.2,3.2Hz，1H)，7.49-7.47(dd，J＝3.2,5.2Hz，1H)，7.27-7.22(m，2H)，6.77(s，1H)，6.69 (s，1H)，5.52(s，2H)，3.82(s，3H)，3.28(s，3H)，1.52(s，9H)。m/z：475[M+H]+。
实施例3
(4-环丁烷羰基-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基)-(7-甲氧基-8-吡啶-3-基-1-噻吩-3- 基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(3)
步骤1：(8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 基)-(4-环丁烷羰基-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基)-甲酮
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(实施例1，步骤9)(0.5g，0.001mol)在DCM(10mL)中的溶液加入1-(环丁基羰 基)-1,4二氮杂环庚烷(0.25g，0.001mol)、T3P(1mL，0.001mol，50％在乙酸乙酯中的溶液) 和TEA(0.2mL，0.003mol)。反应混合物室温搅拌16小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液 (10mL)淬灭，DCM(2x25mL)萃取。有机层合并，用NaHCO3溶液(1x100mL，100％)、盐水 (100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。真空除去溶剂，粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和 乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的化合物as(0.4g，57％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.51-7.48(m，2H)，7.22-7.20(m，1H)，6.99(t，J＝4.0Hz， 1H)，6.60(t，J＝2.4Hz，1H)，5.54-5.51(dd，J＝4.0，12.0Hz，2H)，4.18-4.17(m，2H)，3.86 (s，3H)，3.81-3.79(m，3H)，3.71-3.60(m，3H)，3.57-3.54(m，1H)，2.36-2.34(m，2H)，1.99- 1.95(m，2H)，1.94-1.90(m，4H)。m/z：571[M+H]+。
步骤2：(4-环丁烷羰基-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基)-(7-甲氧基-8-吡啶-3-基-1- 噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮
室温和氮气气氛下向(4-环丁烷羰基-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基)-(7-甲氧基-8- 吡啶-3-基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(250mg， 0.4mmol)在DME(10mL)中的溶液加入吡啶-3-硼酸(100mg，0.8mmol)、四(三苯膦)钯(30mg， 0.02mmol)和碳酸钾(150mg，0.001mol)。反应混合物脱氮气10分钟，加入水(2mL)。反应混合 物在90℃搅拌16小时。反应混合物经硅藻土过滤，用DCM(20mL)洗涤。真空浓缩滤液，粗产物 溶解在DCM(200mL)中，用水(10ml)、盐水(10mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空除去溶剂，粗产物用 二乙醚(10mL)处理成浆液，过滤，干燥，得到所希望的化合物(240mg，96％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.49-8.47(dd，J＝1.6，4.8Hz，2H)，7.67(t，J＝2.0Hz， 1H)，7.52-7.47(m，2H)，7.27-7.24(m，2H)，6.83-6.80(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，6.68(t，J＝ 4.0，Hz，1H)，5.59-5.56(dd，J＝1.6，10.4Hz，2H)，4.18-4.17(m，2H)，3.86(s，4H)，3.81- 3.79(m，1H)，3.71-3.60(m，2H)，3.57-3.54(m，1H)，3.36-3.34(m，1H)，2.36-2.349m，2H)， 2.12-1.99(m，6H)，0.98-0.97(m，1H)。m/z：570[M+H]+。
实施例4
8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔 丁基-甲基-酰胺(5)
步骤1：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸乙酯
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸乙酯(实施例1步骤8)(1g，0.002mol)在THF(20mL)中的溶液加入2,4,6-三- (2-甲基-丙烯基)-环三硅氧烷吡啶络合物(380mg，0.001mol)、二(三苯基膦)钯(II)二氯化 物(80mg，0.1mmol)和三磷酸钾(63mg，0.004mol)。反应混合物脱氮气10分钟，室温加入水 (2mL)。反应混合物在70℃搅拌4小时。经硅藻土过滤反应混合物，用DCM(50mL)洗涤。滤液在 真空下浓缩；粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(20ml)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空 移除有机溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯，得到所希望的产物 (0.9g，96％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(m，1H)，7.83-7.82(d，J＝3.2Hz，1H)，7.33-7.32 (dd，J＝1.6，5.2Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.56(s，1H)，6.00(s，1H)，5.56(s，2H)，4.32-4.26(m， 2H)，3.78(s，3H)，1.76(s，3H)，4.52(s，3H)，1.23-1.18(m，3H)。m/z：411.5[M+H]+。
步骤2：8-异丁基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸酯
向7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4, 3-c]吡唑-3-羧酸乙酯(步骤1)(1g，0.02mol)在甲醇和乙酸乙酯的混合物(40mL)中的溶液 加入钯/碳(10％，0.5g)。反应混合物在室温和3bar氢气压力下进行加氢反应4小时。反应混 合物经硅藻土过滤，滤液真空浓缩。残留物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯，得 到标题化合物(0.7g，70％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.97-7.96(dd，J＝1.2,3.2Hz，1H)，7.83-7.82(dd，J＝ 3.2,5.2Hz，1H)，7.31-7.30(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.37(s，1H)，5.43(s，2H)， 4.32-4.27(m，2H)，3.75(s，3H)，2.12-2.10(m，2H)，1.62-1.55(m，1H)，1.31-1.22(m，3H)， 0.85-0.83(d，J＝4.0Hz，6H)。m/z：413[M+H]+。
步骤3：8-异丁基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸
室温下向8-异丁基-7-甲氧基-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸乙酯(250mg，0.006mol)在THF(21mL)、水(6mL)和甲醇(3mL)的混合物中的溶液加 入LiOH(0.08g，0.001mol)。反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物蒸发，用1.5NHCl溶 液酸化。滤出固体，真空干燥，得到所希望的化合物(200mg，87％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(bs，1H)，7.96-7.95(dd，J＝1.6，3.2Hz，1H)， 7.83-7.81(dd，J＝3.2,5.2Hz，1H)，7.31-7.29(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.37 (s，1H)，5.42(s，2H)，3.73(s，3H)，2.12-2.11(m，2H)，1.62-1.55(m，1H)，0.72-.711(d，J＝ 4.0Hz，6H)。m/z：385[M+H]+。
步骤4：8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸叔丁基-甲基-酰胺(5)
室温和氮气气氛下向8-异丁基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸(步骤3)(180mg，0.4mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入正叔丁基甲胺 (50mg，0.5mmol)、HATU(0.22g，5mmol和二异丙基乙胺(0.2mL，0.7mmol)。反应混合物室温搅 拌16小时。反应混合物用碳酸氢钠(10mL，10％)淬灭，DCM(2x25mL)萃取。有机层合并，用 NaHCO3溶液(1x100mL，10％)、盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。真空移除有机溶剂；粗产 物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的化合物(140mg， 66％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.90(dd，J＝1.6，3.2Hz，1H)，7.80-7.85(dd，J＝ 3.2,5.2Hz，1H)，7.29-7.28(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.40(s，1H)，5.29(s，2H)， 3.73(s，3H)，3.14(s，3H)，2.13-2.11(m，2H)，1.63-1.55(m，1H)，1.41(s，9H)，0.72-.711(d， J＝4.0Hz，6H)。m/z：454[M+H]+。
实施例5
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(6)
步骤1：8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 叔丁基-甲基-酰胺(4)
向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(实 施例1，步骤9)(150.00mg；0.37mmol；1.00eq.)在DCM(0.50ml；7.80mmol；21.18eq.)中的溶 液加入N,N-二异丙胺(0.12ml；0.74mmol；2.00eq.)、O-苯并三唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟 硼酸酯(TBTU)(236.53mg；0.74mmol；2.00eq.)和正叔丁基-甲胺(48.16mg，0.55mmol， 1.5eq.)。反应混合物在室温搅拌2小时。粗产物经柱谱法(Biotage)纯化，洗脱液为乙酸 乙酯/己烷，得到所希望的化合物(120mg，68％)，为白固体。
步骤2：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(6)
向装在微波小管中的8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(50.00mg；0.10mmol；1.00eq.)(实施例5，步骤1)加入2， 4,6-三-(2-甲基-丙烯基)-环三硅氧烷吡啶(51.14mg；0.16mmol；1.50eq.)、)、[1,1'-二(二 苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二氯甲烷的络合物(1：1)(8.57mg；0.01mmol；0.10eq.)、 二噁烷(1.00ml；11.74mmol；111.82eq.)和碳酸铯(0.16ml；0.31mmol；3.00eq.，3M)。密封容 器，抽真空，让氮气回流(3次)。反应混合物在120℃下微波加热2小时。粗产物经柱谱法 (Biotage)纯化，洗脱液为乙酸乙酯/己烷，得到所希望的化合物(6.6mg，14％)，为白固 体。
1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.75(dd，J＝3.2，1.4Hz，1H)，7.69(dd，J＝5.1,3.2Hz， 1H)，7.27(dd，J＝5.1,1.4Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.63(s，1H)，6.07(s，1H)，5.33(s，2H)，3.80 (s，3H)，3.20(s，3H)，1.80(d，J＝1.3Hz，3H)，1.54(s，9H)，1.50(d，J＝1.2Hz，3H)。m/z：452 [M+H]+。
实施例6
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸(2-乙酰基氨基-乙基)-酰胺(7)
步骤1：7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃 并[4,3-c]吡唑-3-羧酸乙酯
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸乙酯(6g，0.0138mol)在THF(100mL)中的溶液加入2,4,6-三-(2-甲基-丙烯 基)-环三硅氧烷吡啶络合物(5.8g，0.018mol)、二[三(4-(十七氟辛基)苯基)膦]二氯化钯 (II)(1.0g，1.38mmol和三磷酸钾(3.8g，0.0276mol)。反应混合物脱氮气10分钟，室温加入 水(10mL)。反应混合物在80℃加热8小时。反应混合物经硅藻土过滤，DCM(50mL)洗涤。真空 浓缩滤液；粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(20ml)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空除 去有机溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯，得到所希望的化合物 (5.5g，98％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(m，1H)，7.83-7.82(d，J＝3.2Hz，1H)，7.33-7.32 (dd，J＝1.6，5.2Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.56(s，1H)，6.00(s，1H)，5.56(s，2H)，4.32-4.26(m， 2H)，3.78(s，3H)，1.76(s，3H)，4.52(s，3H)，1.23-1.18(m，3H)。m/z：411.5[M+H]+。
步骤2：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸
室温下向7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡 喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸乙酯(7g，0.0171mol)在THF(70mL)、水(20mL)和甲醇(10mL)的混 合物中的溶液加入LiOH.H2O(2.1g，0.0512mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合物蒸 发，用1.5NHCl溶液酸化。滤出固体，高真空干燥，得到所希望的化合物(5.5g，85％)为乳白 固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(bs，1H)，7.96-7.95(dd，J＝1.6，3.2Hz，1H)， 7.83-7.81(dd，J＝3.2,5.2Hz，1H)，7.31-7.29(dd，J＝1.2,5.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.37 (s，1H)，5.42(s，2H)，3.73(s，3H)，2.12-2.11(m，2H)，1.62-1.55(m，1H)，0.72-.711(d，J＝ 4.0Hz，6H)。m/z：383[M+H]+。
步骤3：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(2-乙酰基氨基-乙基)-酰胺(7)
向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸(30mg，0.08mmol)在DCM(1.00ml；15.60mmol；198.87eq.)中的溶液加入N，N-二异 丙基乙胺(0.02ml；0.09mmol；1.20eq.)、N-乙酰基乙二胺(9.61mg，0.09mmol，1.2eq.)和T3P (0.03ml；0.12mmol；1.50eq.)。反应混合物室温搅拌1.5小时。粗产物经柱谱法纯化，洗脱 液为乙酸乙酯/己烷，得到所希望的化合物(27.4mg，73％)，为白固体。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ7.74(dd，J＝3.1,1.2Hz，1H)，7.67(dd，J＝5.0，3.2Hz， 1H)，7.26(dd，J＝5.1,1.1Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.58(s，1H)，6.04(s，1H)，5.48(s，2H)，3.76 (s，3H)，3.46(t，J＝6.0Hz，2H)，3.41–3.33(m，2H)，1.94(s，3H)，1.78(s，3H)，1.48(s，3H)。 m/z：467[M+H]+。
按照实施例6描述的方法制备以下化合物。
按照实施例4描述的方法制备以下化合物：
流程2：
实施例7
8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 叔丁基-甲基-酰胺(19)
步骤1：3-氯-1-(2-羟基-4,5-二甲氧基苯基)丙-1-酮
在60℃和氮气气氛下，边搅拌边向3,4-二甲氧基苯酚(10g，0.06mol)和氯丙酰氯 (12.5g，0.12mol)的悬液滴加入乙醚(8.8mL，0.06mol)。滴加完成后，反应混合物 在70℃加热1小时。反应混合物冷却至室温，用冰水(200mL)淬灭，用DCM(500mL)萃取。用 (2x100mL)DCM重新萃取水相，有机层经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物经柱谱法纯化，洗 脱液为石油醚/乙酸乙酯(8：2)，得到所希望的化合物(12g，76％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.2(bs，1H)，7.27(s，1H)，6.55(s，1H)，4.12-4.10(m， 2H)，3.79(s，3H)，3.71(s，3H)，2.48-2.43(m，2H)。
步骤2：6,7-二甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
室温和氮气气氛下边搅拌边向3-氯-1-(2-羟基-4,5-二甲氧基苯基)丙-1-酮 (13g，0.05mol)在乙醇中的溶液加入干K2CO3(16.3g，0.10mol)。得到的悬液在室温搅拌16小 时。过滤反应混合物，真空浓缩。粗产物溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用5％碳酸氢钠(50mL)、 盐水(50mL)洗涤，硫酸钠干燥。浓缩有机溶剂；残留物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙 酸乙酯(8：2)，得到所希望的化合物(9g，81％)，为浅褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.12(s，1H)，6.59(s，1H)，4.47-4.44(m，2H)，3.80(s， 3H)，3.72(s，3H)，2.69-2.65(m，2H)。
步骤3：6,7-二羟基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
在氮气气氛下将6,7-二甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮(2.5g，0.01mol)和 吡啶盐酸盐(20g，0.20mol)的混合物在170℃加热12小时。反应混合物用DCM(100mL)配成浆 液，滤出形成的固体，真空浓缩滤液。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯 (5：5)，得到所希望的化合物(1g，50％)，为浅白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.72(bs，2H)，7.04(s，1H)，6.30(s，1H)，4.37-4.34(m， 2H)，2.60-2.57(m，2H)。
步骤4：6-羟基-7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
室温和氮气气氛下向中6,7-二羟基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮在DMF(60mL)中 的溶液加入干K2CO3(4.2g，0.0305mol)。反应混合物室温搅拌15分钟，然后室温滴加入碘甲 烷(1.3mL，0.0214mol)。反应混合物室温搅拌2小时。过滤反应混合物，滤液真空干燥。粗产 物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的化合物(4g，68％)，为 浅褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.05(bs，1H)，7.05(s，1H)，6.53(s，1H)，4.43-4.40(m， 2H)，3.80(s，3H)，2.64-2.61(m，2H)。
步骤5：6-异丙氧基-7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮
室温和氮气气氛下边搅拌边向6-羟基-7-甲氧基-2,3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮 (4.0g，0.0206mol)在DMF(80mL)中的溶液加入干K2CO3(5.7g，0.0412mol)。反应混合物室温 搅拌15分钟，然后室温滴加入2-碘丙烷(6.2mL，0.0618mol)。反应混合物在65℃搅拌8小时。 过滤反应混合物，滤液真空干燥。粗产物溶解在乙酸乙酯(2x200mL)中，用(50mL)、盐水 (50mL)洗涤，硫酸钠干燥。浓缩真空溶剂，粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙 酯(8：2)，得到所希望的化合物(4.1g，87％)，为浅褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.13(s，1H)，6.59(s，1H)，4.48-4.40(m，3H)，3.80(s， 3H)，2.68-2.65(m，2H)，1.21(s，3H)，1.20(s，3H)。
步骤6：(2Z)-羟基(6-异丙氧基-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3(4H)-亚基)乙 酸乙酯
室温和氮气气氛下将二异丙胺(6.9mL，0.0495mol)溶解在干THF(150mL)中。反应 混合物冷却至-78℃，在30分钟内滴加入正丁基锂(1.6M在己烷中的溶液，28.6mL， 0.0457mol)。加入完成后，反应混合物在同一温度下搅拌15分钟，然后慢慢地升温至-10℃， 再搅拌10分钟。反应混合物再次冷却至-78℃，在30分钟内滴加入6-异丙氧基-7-甲氧基-2, 3-二氢-4H-苯并吡喃-4-酮(9g，0.0381mol)在THF(50mL)中的溶液，在-78℃搅拌。1小时后， 在-78℃滴加入草酸二乙酯(7.8mL，0.0571mol)；把反应混合物慢慢地升至0℃，搅拌1小时。 反应混合物冷却至-5℃，用1.5NHCl淬灭，乙酸乙酯(100mLx2)萃取。有机层合并，用水 (100mL)、盐水(50mL)洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，得到所希望的化合物(10.5g，92％)，为浅黄 固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ.7.17-7.13(d，J＝16Hz，1H)，6.61-6.59(d，J＝24Hz， 1H)，5.16-5.12(m，1H)，4.47-4.24(m，1H)，4.21(s，3H)，2.97(s，3H)，2.54-5.53(m，1H)， 1.21(s，6H)。
步骤7：8-异丙氧基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸酯
室温和氮气气氛下向(2Z)-羟基(6-异丙氧基-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3 (4H)-亚基)乙酸乙酯(6.0mg，0.0223mol)在乙醇(150mL)和乙酸(150mL)的混合物中的溶液 加入3-噻吩基肼盐酸盐(2.7g，0.0223mol)。反应混合物在100℃搅拌4小时。反应混合物高 真空浓缩。残留物溶解在乙酸乙酯(20mL)中，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，硫酸干燥，真空 浓缩。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯，得到所希望的化合物(6.5g， 88％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.02-8.01(dd，J＝1.2,2.4Hz，1H)，7.86-7.83(dd，J＝ 4，16Hz，1H)，7.35-7.34(dd，J＝1.2,4Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.19(s，1H)，5.40(s，2H)，4.31- 4.26(m，2H)，3.94-3.88(m，1H)，3.72(s，3H)，1.31-1.287(m，3H)，1.07(s，6H)。
步骤8：8-异丙氧基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸
室温下向8-异丙氧基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸酯(4g，0.0108mol)在THF(70mL)、水(20mL)和甲醇(10mL)的混合物中的溶液加入 LiOH.H2O(1.4g，0.0326mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合物蒸发，用1.5NHCl溶 液酸化。滤液在高真空下干燥,得到所希望的化合物(3.3g，79％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.16(bs，1H)，8.01-8.00(dd，J＝1.2,2.4Hz，1H)， 7.85-7.83(dd，J＝4，16Hz，1H)，7.35-7.33(dd，J＝1.2,4Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.19(s，1H)， 5.39(s，2H)，3.94-3.88(m，2H)，3.72(s，3H)，1.07(s，6H)。
步骤9：8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(19)
在室温和氮气气氛下边搅拌边向8-异丙氧基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢 苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(1.1g，0.0028mol)在DCM(50mL)中的溶液加入N-叔丁基甲 胺(0.3g，0.0034mol)、HATU(1.3g，0.0034mol)和DIPEA(0.8mL，0.0043mol)。反应混合物室 温搅拌16小时。反应混合物用水淬灭(20mL)，二氯甲烷(2x100mL)萃取。有机层合并，用盐 水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。真空除去溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油 醚/乙酸乙酯(8：2)，得到所希望的化合物(1.1g，85％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.97-7.96(dd，J＝1.2,2.4Hz，1H)，7.82-7.80(dd，J＝ 4，16Hz，1H)，7.34-7.32(dd，J＝1.2,4Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.22(s，1H)，5.27(s，2H)，3.39- 3.89(m，1H)，3.72(s，3H)，3.14(s，3H)，1.41(s，9H)，1.06(s，6H)。
m/z：456[M+H]+。
按照实施例7描述的方法制备以下化合物。
按照实施例1描述的方法制备以下化合物。
实施例8
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸甲基-[2-(2-氧代-噁唑烷-3-基)-乙基]-酰胺(23)
向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸[2-(2-氧代-噁唑烷-3-基)-乙基]-酰胺(22.00mg；0.04mmol；1.00eq.)加入N，N- 二甲基-甲酰胺(0.50ml)和氢化钠(2.67mg；0.07mmol；1.50eq.)。反应混合物室温搅拌10分 钟，然后加入(0.00ml；0.05mmol；1.10eq.)(1滴)，反应混合物室温搅拌15分钟。加入 水，产物用乙酸乙酯萃取，水洗涤。有机层干燥，过滤，浓缩。残留物高真空干燥，然后冻干， 得到所希望的产物(22.5mg，99％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.56–7.42(m，2H)，7.24(d，J＝4.9Hz，1H)，6.73(d，J＝ 4.0Hz，1H)，6.57(d，J＝2.8Hz，1H)，6.12(s，1H)，5.55(s，1H)，5.51(s，1H)，4.38–4.31(m， 1H)，4.20–4.10(m，2H)，3.82(s，3H)，3.81–3.72(m，2H)，3.62–3.55(m，3H)，3.53(s，1H)， 3.46–3.38(m，1H)，3.17(s，1H)，1.85(s，3H)，1.53(d，J＝3.8Hz，3H)。m/z：509[M+H]+。
按照实施例8公开的方法制备以下化合物：
实施例9
(8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)- [4-(四氢-呋喃-2-羰基)-[1,4]二氮杂环庚烷-1-基]-甲酮(21)
步骤1：向8-异丁基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸(70.00mg；0.18mmol；1.00eq.)在DCM(1.00ml；15.60mmol；85.68eq.)中的溶液加入 N，N-二异丙基乙胺(0.04ml；0.22mmol；1.20eq.)、1-boc-六氢-1,4-二氮杂环庚烷(0.04ml； 0.22mmol；1.20eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物 (0.08ml；0.27mmol；1.50eq.)。室温搅拌2小时后，反应混合物用水和1NHCL洗涤。有机层用 硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到4-(8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羰基)-[1,4]二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(103.00mg；0.18mmol)，为白 泡沫。向4-(8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羰 基)-[1,4]二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(103.00mg；0.18mmol)在甲醇(1.00ml；24.69mmol； 135.58eq.)中的溶液加入盐酸(0.46ml；1.82mmol；10.00eq.)(4Mindioxane)。搅拌4小时 后，反应混合物浓缩至干，用水稀释。混合物冻干，得到[1,4]二氮杂环庚烷-1-基-(8-异丁 基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮，为白固体。
步骤2：向[1,4]-二氮杂环庚烷-1-基-(8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(30.00mg；0.06mmol；1.00eq.)在DCM(1.00ml； 15.60mmol；242.64eq.)中的溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.01ml；0.08mmol；1.20eq.)、四 氢-2-糠酸(0.01ml；0.13mmol；2.00eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己 烷2,4,6-三氧化物(0.03ml；0.10mmol；1.50eq.)。室温搅拌30分钟后，反应浓缩至干，经快 速谱法纯化，得到所希望的化合物(10.7mg，30％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.51–7.44(m，2H)，7.50–7.44(m，1H)，7.25–7.21(m，1H)， 6.59(d，J＝7.0Hz，1H)，6.56(d，J＝2.7Hz，1H)，5.50(dd，J＝4.9，3.5Hz，2H)，4.70–4.58(m， 1H)，4.53–4.41(m，1H)，4.41–4.22(m，1H)，4.19–4.09(m，1H)，4.08–3.82(m，4H)，3.79(s， 3H)，3.71–3.59(m，2H)，3.58–3.42(m，1H)，2.36–2.26(m，1H)，2.26–2.20(m，2H)，2.19–1.83 (m，3H)，1.78–1.60(m，2H)，0.81(d，J＝6.6Hz，6H)。m/z：565[M+H]+。
实施例10
7-甲氧基-8-(1H-吡唑-4-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸甲基酰胺(22)
步骤1：向在微波小瓶中的8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸(100.00mg；0.25mmol；1.00eq.)加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧 杂环戊-2-基)-吡唑-1-羧酸叔丁酯(108.35mg；0.37mmol；1.50eq.)、1,1'-二(二苯基 膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二氯甲烷的络合物(1：1)(20.05mg；0.02mmol；0.10eq.)和碳 酸铯(0.25ml；0.49mmol；2.00eq.)(3M水溶液)。密封容器，抽真空，让氮气回流(3次)。反应 混合物在100℃下微波加热30分钟。混合物用乙酸乙酯稀释，水和1NHCl洗涤。有机层经硫 酸钠干燥，过滤，浓缩，得到8-(1-叔丁氧基羰基-1H-吡唑-4-基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸，为粗产物。
步骤2：向8-(1-叔丁氧基羰基-1H-吡唑-4-基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(121.00mg；0.24mmol；1.00eq.)在DCM(1.50ml； 23.40mmol；95.64eq.)中的溶液加入DIPEA(0.09ml；0.49mmol；2.00eq.)、O-苯并三唑-n,n, n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯(157.13mg；0.49mmol；2.00eq.)和正叔丁基甲胺(0.06ml； 0.49mmol；2.00eq.)。室温搅拌30分钟后，混合物浓缩至干，经快速谱法纯化，得到4-[3- (叔丁基-甲基-氨甲酰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-8- 基]-吡唑-1-羧酸叔丁酯，为白固体(99mg，72％)。
步骤3：向4-[3-(叔丁基-甲基-氨甲酰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯 并吡喃并[4,3-c]吡唑-8-基]-吡唑-1-羧酸叔丁酯(99.00mg；0.18mmol)在甲醇(3.00ml； 74.06mmol；302.68eq.)中的溶液加入盐酸(0.20ml；0.80mmol；3.27eq.)(4M％在二噁烷中 的溶液)。室温搅拌1小时后，混合物浓缩，经快速谱法纯化，得到所希望的产物(33.8mg， 34％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)δ12.83(s，1H)，8.33(dd，J＝9.4,4.6Hz，1H)，8.07(dd，J＝ 3.2，1.4Hz，1H)，7.92(dd，J＝5.1,3.2Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.41(dd，J＝5.1,1.4Hz，1H)， 7.32(s，1H)，6.85(s，1H)，6.76(s，1H)，5.52(s，2H)，3.86(s，3H)，2.75(d，J＝4.7Hz，3H)。m/ z：408[M+H]+。
实施例11
[4-(氮杂环丁烷-1-羰基)-氮杂环庚烷-1-基]-(8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩- 3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(26)
向1-(8-异丙氧基-7-甲氧基-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羰基)氮杂环庚烷-4-羧酸(45.00mg；0.09mmol；1.00eq.)在DCM(2.00ml；31.20mmol； 354.72eq.)中的溶液加入DIPEA(0.02ml；0.13mmol；1.50eq.)、氮杂环丁烷(0.01ml； 0.13mmol；1.50eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物 (0.08ml；0.13mmol；1.50eq.)。室温搅拌30分钟后，反应混合物浓缩至干，经快速谱法纯 化，得到所希望的产物(24.5mg，51％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.54–7.45(m，2H)，7.24(t，J＝5.0Hz，1H)，6.61(s，1H)， 6.43(d，J＝5.8Hz，1H)，5.55–5.41(m，2H)，4.59(d，J＝14.3Hz，1H)，4.23–3.86(m，4H)，3.83 (s，3H)，3.77–3.49(m，1H)，3.35–3.27(m，1H)，2.42–2.07(m，4H)，2.03–1.68(m，6H)，1.27 (t，J＝7.1Hz，1H)，1.21(d，J＝6.1Hz，6H)。m/z：551[M+H]+。
实施例12
8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 (3-氨基-丙基)-酰胺(27)
步骤1：向8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸(120.00mg；0.31mmol；1.00eq.)在DCM(1.00ml；15.60mmol；50.24eq.)中的溶液 加入N，N-二异丙基乙胺(0.07ml；0.37mmol；1.20eq.)、n-boc-1,3-二氨基丙烷(81.16mg； 0.47mmol；1.50eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物 (0.14ml；0.47mmol；1.50eq.)。室温搅拌30分钟后，反应混合物浓缩至干，经快速谱法纯 化，得到{3-[(8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(170mg，100％)，为白固体。
步骤2：向{3-[(8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(172.70mg；0.32mmol)在甲醇(4.00ml； 98.75mmol；317.98eq.)中的溶液加入在二噁烷(0.31ml；1.24mmol；4.00eq.)中的盐酸。室 温搅拌18小时，反应混合物浓缩至干，经快速谱法纯化，得到所希望的产物(71.3mg， 52％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.77–8.64(m，2H)，7.55(d，J＝7.2Hz，2H)，6.62(s，1H)， 6.36(s，1H)，5.51(s，2H)，4.13–3.94(m，2H)，3.85(s，3H)，3.65–3.59(m，2H)，3.23–3.07(m， 2H)，2.21–2.09(m，1H)，1.21(d，J＝6.0Hz，6H)。m/z：443[M+H]+。
实施例13
8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 [3-(环丁烷羰基-氨基)-丙基]-酰胺(28)
向8-异丙氧基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸(3-氨基-丙基)-酰胺(27)(65.00mg；0.15mmol；1.00eq.)在DCM(1.00ml；15.60mmol； 106.21eq.)中的溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.03ml；0.18mmol；1.20eq.)、环丁烷羧酸 (0.14ml；1.50mmol；10.21eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6- 三氧化物(0.13ml；0.22mmol；1.50eq.)。室温搅拌18小时后，反应混合物浓缩至干，经快速 谱法纯化，得到所希望的产物(55.8mg，72％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.57–7.46(m，2H)，7.23(d，J＝5.0Hz，1H)，7.16(t，J＝ 6.3Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.35(m，2H)，5.54(s，2H)，4.02(dt，J＝12.1，6.0Hz，1H)，3.82(s， 3H)，3.46(q，J＝6.2Hz，1H)，3.31(q，J＝6.0Hz，2H)，3.03(p，J＝8.6Hz，1H)，2.36–2.22(m， 2H)，2.20–2.10(m，2H)，2.01–1.80(m，2H)，1.79–1.67(m，2H)，1.19(d，J＝6.1Hz，6H)。m/z： 525[M+H]+。
实施例14
环丁烷羧酸{1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡 喃并[4,3-c]吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-基}-酰胺(37)
向(4-氨基-氮杂环庚烷-1-基)-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1, 4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(55.00mg；0.11mmol；1.00eq.)在DCM (1.00ml；15.60mmol；135.76eq.)中的溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.02ml；0.14mmol； 1.20eq.)、环丁烷羧酸(0.14ml；1.50mmol；13.05eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧 杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物(0.10ml；0.17mmol；1.50eq.)。室温搅拌30分钟后，反应混 合物用NaHCO3洗涤，DCM萃取。有机层浓缩，经快速谱法纯化，得到所希望的产物(60.3mg， 94％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.53–7.44(m，2H)，7.23(dd，J＝5.0，1.3Hz，1H)，6.76(s， 1H)，6.57(s，1H)，6.12(s，1H)，5.60–5.45(m，3H)，4.61–4.49(m，1H)，4.43–4.30(m，1H)， 4.18–3.99(m，2H)，3.82(s，3H)，3.60–3.48(m，1H)，3.45–3.34(m，1H)，3.26(t，J＝10.3Hz， 1H)，3.00–2.81(m，1H)，2.31–2.06(m，4H)，2.01–1.87(m，2H)，1.85(s，3H)，1.72–1.59(m， 4H)，1.54(s，3H)。m/z：547[M+H]+。
实施例15
8-(1,2-二羟基-2-甲基-丙基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(38)
向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(30.00mg；0.07mmol；1.00eq.)在水(0.10ml)和丙酮(0.40ml) 中的溶液加入4-甲基吗啉4-氧化物(23.35mg；0.20mmol；3.00eq.)和(0.51mg； 0.00mmol；0.03eq.)。室温搅拌1小时后，混合物用饱和硫化钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取。有 机层用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经快速谱法纯化，得到所希望的化合物(22.5mg，70％)， 为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.51(dd，J＝3.2，1.3Hz，1H)，7.47(dd，J＝5.1,3.2Hz， 1H)，7.21(dd，J＝5.1,1.3Hz，1H)，6.90(s，1H)，6.56(s，1H)，5.53–5.38(m，2H)，4.69(s， 1H)，3.81(s，3H)，3.27(s，3H)，2.67(s，1H)，1.52(s，9H)，1.28(dd，J＝6.0，3.0Hz，1H)，1.15 (s，3H)，0.97(s，3H)。m/z：486[M+H]+
实施例16
1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸二甲基酰胺(41)
向1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸(100.00mg；0.20mmol；1.00eq.)在DCM(1.00ml； 15.60mmol；79.19eq.)中的溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.04ml；0.24mmol；1.20eq.)、二甲 胺盐酸盐(24.10mg；0.30mmol；1.50eq.)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己 烷2,4,6-三氧化物(0.17ml；0.30mmol；1.50eq.)。室温搅拌30分钟后，反应混合物浓缩，经 快速谱法纯化，得到所希望的产物(92.3mg，88％)，为白固体。
1HNMR(500MHz，cdcl3)δ7.46–7.34(m，2H)，7.14(ddd，J＝13.8，4.9，1.4Hz，1H)， 6.67(d，J＝12.0Hz，1H)，6.49(d，J＝1.8Hz，1H)，6.03(s，1H)，5.52–5.41(m，2H)，4.61–4.55 (m，1H)，4.22–4.10(m，1H)，3.98–3.85(m，1H)，3.73(s，3H)，3.55–3.48(m，1H)，3.45–3.37 (m，1H)，3.22–3.14(m，1H)，2.96(s，1H)，2.88(d，J＝8.1Hz，3H)，2.83(s，1H)，2.71–2.60(m， 1H)，2.14–2.04(m，1H)，1.95–1.83(m，2H)，1.76(s，3H)，1.70–1.53(m，2H)，1.45(d，J＝ 4.8Hz，3H)。m/z：535[M+H]+。
实施例17
1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸甲基酰胺(42)
按照实施例16的相同程序，由1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1, 4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸(100.00mg；0.20mmol； 1.00eq.)在DCM(1.00ml；15.60mmol；79.19eq.)中的溶液和甲胺盐酸盐(13.30mg； 0.20mmol；1.00eq.)制备1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸甲基酰胺。得到所希望的化合物，得率是 52％，(53.5mg)，为白固体。
1HNMR(500MHz，cdcl3)δ7.49–7.43(m，2H)，7.21(d，J＝5.1Hz，1H)，6.74(s，1H)， 6.56(s，1H)，6.10(s，1H)，5.55(t，J＝4.9Hz，1H)，5.52(t，J＝4.1Hz，2H)，4.49–4.43(m， 1H)，4.18(dt，J＝14.5,5.4Hz，1H)，4.07–4.00(m，1H)，3.95(dt，J＝9.5，4.4Hz，1H)，3.85– 3.82(m，1H)，3.80(s，3H)，3.72–3.63(m，1H)，3.49–3.42(m，1H)，2.78(dd，J＝14.0，4.8Hz， 3H)，2.34–2.12(m，1H)，2.05–1.91(m，1H)，1.84(d，J＝1.2Hz，3H)，1.80–1.68(m，2H)，1.54– 1.51(s，3H)。m/z：521[M+H]+。
实施例18
1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸酰胺(43)
向1-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羰基]-氮杂环庚烷-4-羧酸(75.00mg；0.15mmol；1.00eq.)在DMSO(1.00ml)中的 溶液加入1，1'-羰基二(1H-咪唑)(119.72mg；0.74mmol；5.00eq.)。反应混合物室温搅拌18 小时，然后加入乙酸铵(34.17mg；0.44mmol；3.00eq.)，继续反应，室温搅拌2小时。反应完成 后，向混合物加入水，滤出沉淀的固体，用水洗涤，得到所希望的化合物(62.5mg，84％)，为 白固体。
1HNMR(500MHz，cdcl3)δ7.44–7.34(m，2H)，7.15–7.11(m，1H)，6.67(s，1H)，6.49 (s，1H)，6.03(s，1H)，5.47–5.43(m，2H)，5.13(s，1H)，4.75(s，1H)，4.44–4.36(m，1H)，4.12 (dt，J＝14.7，5.3Hz，1H)，4.03–3.95(m，1H)，3.88(d，J＝14.3Hz，1H)，3.83–3.74(m，1H)， 3.73(s，3H)，3.66–3.56(m，1H)，3.43–3.37(m，1H)，2.36–2.25(m，1H)，2.23–2.11(m，1H)， 2.03–1.87(m，2H)，1.76(d，J＝1.0Hz，3H)，1.45(s，3H)。m/z：507[M+H]+。
实施例19
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸[3-(环丁烷羰基-氨基)-丙基]-酰胺(57)
步骤1：按照实施例12步骤1的相同程序，由7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(150mg，0.39mmol)和N-boc-1,3-二氨 基丙烷(102.5mg，0.59mmol，1.5eq.)制备(3-{[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3- 基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羰基]-氨基}-丙基)-氨基甲酸叔丁酯。
步骤2：按照实施例12步骤2的相同程序，由(3-{[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)- 1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羰基]-氨基}-丙基)-氨基甲酸叔丁酯 和HCl(4M在二噁烷中的溶液)制备7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢- 苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-酰胺。
步骤3：按照实施例12步骤1的相同程序，由7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-酰胺(100mg， 0.23mmol)和环丁烷羧酸(0.14ml；1.50mmol；6.58eq.)制备7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)- 1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸[3-(环丁烷羰基-氨基)-丙基]- 酰胺。得到所希望的化合物，得率是97％，(115mg)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.55(s，1H)，7.53–7.48(m，1H)，7.25(d，J＝4.7Hz，1H)， 7.11(t，J＝7.1Hz，1H)，6.71(s，1H)，6.58(s，1H)，6.32–6.25(m，1H)，6.12(s，1H)，5.62(s， 2H)，3.83(s，3H)，3.49(dd，J＝12.3,5.9Hz，2H)，3.34(dd，J＝12.1，6.0Hz，2H)，3.12–3.00 (m，1H)，2.32(dt，J＝19.0，9.7Hz，2H)，2.19(dd，J＝18.8，9.9Hz，2H)，1.98(dd，J＝18.7， 8.5Hz，2H)，1.85(s，3H)，1.79–1.71(m，2H)，1.52(s，3H)。m/z：521[M+H]+。
流程3：
流程4：
实施例20
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻唑-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(89)
步骤1：2-肼基-1,3-噻唑盐酸盐
-10℃下向2-氨基噻唑(10.0g，100mmol)和浓盐酸(80mL)的混合物滴加入亚硝酸 钠(6.90g，100mmol)在水(50m1L)中的溶液。反应混合物在同一温度下搅拌10分钟，再小心 地滴加入氯化锡(II)(37.9g，200mmol)在浓盐酸(20mL)中的溶液，使得溶液的温度不超过- 10℃。加入完成后，反应混合物在同一温度下搅拌30分钟。过滤收集获得的晶体。该晶体在 二乙醚中重结晶，得到所希望的化合物(11.0g，97％)，为褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.74(bs，1H)，7.27-7.26(d，J＝4.0Hz，1H)，7.00-6.99 (d，J＝4.0Hz，1H)，3.45(bs，3H)。m/z：116[M+H]+。
步骤2：8-溴-7-甲氧基-1-(1,3-噻唑-2-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸乙酯
室温和氮气气氛下向(6-溴-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3(4H)-亚基)(羟基) 乙酸乙酯(3.0g，0.0084mol)在乙醇(100mL)和乙酸(100mL)的混合物中的溶液加入2-肼基- 1,3-噻唑盐酸盐(1.9g，0.0126mol)。反应混合物在100℃搅拌4小时。反应混合物高真空浓 缩。残留物溶解在乙酸乙酯(40mL)中，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥，真空浓 缩。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯，得到所希望的化合物(1.5g， 41％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)，7.86-7.85(d，J＝1.4Hz，2H)，6.86(s，1H)， 5.45(s，2H)，4.37-4.32(dd，J＝7.0，14.2,2H)，3.86(s，3H)，1.34-1.31(t，J＝7.1,14.2, 3H)。m/z：438[M+H]+。
步骤3：7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(1,3-噻唑-2-基)-1,4-二氢苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸乙酯
在室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(1,3-噻唑-2yl)-1,4-二氢苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸乙酯(2.6g，0.0059mol)在THF(100mL)中的溶液加入2,4,6-三-(2-甲 基-丙烯基)-环三硅氧烷吡啶络合物(2.9g，0.0089mol)、二(三苯基膦)钯(II)二氯化物 (417mg，0.0006mol)和三磷酸钾(2.0g，0.0149mol)。反应混合物脱氮气10分钟，室温加入水 (10mL)。反应混合物在90℃搅拌12小时。反应混合物经硅藻土过滤，用DCM(50mL)洗涤。滤液 在真空浓缩；粗产物溶解在DCM(200mL)中，用水(20ml)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空 除去有机溶剂，粗产物经硅胶(60-120目)柱谱法纯化，洗脱液为(60-120)石油醚：乙酸乙 酯，得到所希望的化合物(2.2g，90％)为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.94(s，1H)，7.87-7.86(d，J＝3.5Hz，1H)，7.82-7.81 (d，J＝3.5Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.01(s，1H)，5.42(s，2H)，4.35-4.33(d，J＝7.1Hz，2H)， 3.77(s，3H)，1.82(s，3H)，1.70(s，3H)，1.34-1.31(t，J＝7.1,14.2Hz，3H)。m/z：412[M+H]+。
步骤4：7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(1,3-噻唑-2-基)-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸
室温下向7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(1,3-噻唑-2-基)-1,4-二氢苯 并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸乙酯(1g，0.0024mol)在THF(35mL)、水(10mL)和甲醇(5mL)的 混合物中的溶液加入LiOH.H2O(302mg，0.0073mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合 物蒸发，用1.5NHCl溶液酸化。滤出沉淀的固体，高真空干燥，得到所希望的化合物(900mg， 97％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.57(bs，1H)，8.00(s，1H)，7.85-7.84(d，J＝3.5Hz， 1H)，7.80(d，J＝3.5Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.11(s，1H)，5.41(s，2H)，3.77(s，3H)，1.83(s， 3H)，1.71(s，3H)。m/z：384[M+H]+。
步骤5：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻唑-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺
室温和氮气气氛下向7-甲氧基-8-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1-(1,3-噻唑-2-基)- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(900mg，0.0023mol)在DCM(50mL)中的溶液加入 N-叔丁基甲胺(225mg，0.0028mol)、HATU(1.1g，0.0028mol)和二异丙基乙胺(0.6mL， 0.0035mol)。反应混合物室温搅拌16小时。反应混合物用碳酸氢钠(10mL，10％)淬灭，用DCM (2x50mL)萃取。有机层合并，用NaHCO3溶液(1x100mL，10％水溶液)、盐水(100mL)洗涤，无 水硫酸钠干燥。真空除去溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯(9：1)， 得到所希望的化合物(850mg，80％)为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，7.79-7.76(dd，J＝3.5,6.3Hz，2H)，6.70 (s，1H)，6.12(s，1H)，5.25(s，2H)，3.77(s，3H)，3.12(s，3H)，1.84(s，3H)，1.74(s，3H)，1.44 (s，9H)。m/z：453[M+H]+。
实施例21
7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(90)
步骤1：1-(2-噻吩基)肼甲酸叔丁酯
室温和氮气气氛下向2-溴噻吩(10g，0.0613mol)在DMSO(200mL)中的溶液加入肼 基甲酸叔丁酯(16.3g，0.1227mol)、碳酸铯(40g，0.1227mol)，然后加入CuI(1.2g， 0.0061mol)和4-羟基-L-脯氨酸(1.6g，0.0123mol)。反应混合物在80℃搅拌14小时。反应混 合物冷却至室温，用水(100mL)淬灭，乙酸乙酯(3x200mL)萃取。有机层合并，用水(100mLx 2)、盐水(100mL)洗涤，硫酸钠干燥，真空蒸发。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和 乙酸乙酯(7：3)，得到所希望的化合物(3.0g，40％)，为褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.89-6.87(dd，J＝1.7，5.4Hz，1H)，6.81-6.79(dd，J＝ 3.4,7.2Hz，2H)，5.38(s，2H)，1.49(s，9H)。m/z：115[M+H]+。
步骤2：2-噻吩基肼盐酸盐
室温和氮气气氛下边搅拌边向1-(2-噻吩基)肼甲酸叔丁酯(4.3g，0.0201mol)在 二氯甲烷(20mL)中的溶液加入HCl在二噁烷(30mL)中的溶液。反应混合物室温搅拌8小时。 减压除去有机溶剂，得到所希望的化合物(2.9g，96％)，为浅褐固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.17(bs，3H)，8.41(bs，1H)，7.07-7.05(dd，J＝1.4, 5.4Hz，1H)，6.85-6.83(dd，J＝3.6，5.4Hz，1H)，6.72-6.71(dd，J＝1.4,3.7Hz，1H)。m/z：115 [M+H]+。
步骤3：8-溴-7-甲氧基-1-(2-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 乙酯
室温和氮气气氛下向(6-溴-7-甲氧基-4-氧代-2H-苯并吡喃-3(4H)-亚基)(羟基) 乙酸乙酯(6.0g，0.0168mol)在乙醇(100mL)和乙酸(100mL)的混合物中的溶液加入2-噻吩 基肼盐酸盐(2.9g，0.0252mol)。反应混合物在100℃搅拌4小时。反应混合物高真空下浓缩。 残留物溶解在乙酸乙酯(40mL)中，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥，真空干燥。粗 产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯，得到所希望的化合物(4.0g，55％)，为浅 黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84-7.82(dd，J＝1.2,5.5Hz，1H)，7.49-7.47(dd，J＝ 1.2,3.6Hz，1H)，7.24-7.22(dd，J＝3.8，5.4Hz，1H)，6.83(s，1H)，6.72(s，1H)，5.51(s，2H)， 4.33-4.28(dd，J＝7.1,14.2Hz.2H)，3.82(s，3H)，1.32-1.28(t，J＝7.1,14.2Hz，3H)。m/z： 437[M+H]+。
步骤4：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸乙酯
室温和氮气气氛下向8-溴-7-甲氧基-1-(2-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸乙酯(3.8g，0.0087mol)在THF(100mL)中的溶液加入2,4,6-三-(2-甲基-丙 烯基)-环三硅氧烷吡啶络合物(4.3g，0.0131mol)、(306mg，0.0004mol)和三磷酸钾(2.4g， 0.0174mol)。反应混合物脱氮气10分钟，室温加入水(10mL)。反应混合物在90℃搅拌12小 时。经硅藻土过滤反应混合物，用DCM(50mL)洗涤。滤液在真空下浓缩；粗产物溶解在DCM (200mL)中，用水(20ml)、盐水(20mL)洗涤，硫酸钠干燥。真空移除有机溶剂；粗产物经柱 谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯，得到所希望的产物(2.5g，70％)，为浅黄固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.79-7.77(dd，J＝1.4,5.5Hz，1H)，7.46-7.45(dd，J＝ 1.5，3.7Hz，1H)，7.20-7.18(dd，J＝3.7，5.6Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.56(s，1H)，6.00(s，1H)， 5.47(s，2H)，4.33-4.27(dd，J＝7.1,14.2Hz，2H)，3.74(s，3H)，1.73(d，J＝1.1Hz，3H)，1.39 (d，J＝1.2Hz，3H)，1.32-1.28(t，J＝7.1,14.2Hz，3H)。m/z：411[M+H]+。
步骤5：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸
室温下向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4, 3-c]吡唑-3-羧酸乙酯(1g，0.0024mol)在THF(35mL)、水(10mL)、甲醇(5mL)的混合物中的溶 液加入LiOH.H2O(303mg，0.0073mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合物蒸发，用1.5N HCl溶液酸化。滤出沉淀的固体，干燥，得到所希望的化合物(800mg，75％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.30(bs，1H)，7.78-7.76(dd，J＝1.4,5.6Hz，1H)， 7.45-7.44(dd，J＝1.4,3.7Hz，1H)，7.19-7.17(dd，J＝3.7，5.5Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.56 (s，1H)，6.00(s，1H)，5.46(s，2H)，3.73(s，3H)，1.73(s，3H)，1.39(s，3H)。m/z：383[M+H]+。
步骤6：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺
室温和氮气气氛下向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯 并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(800mg，0.0021mol)在DCM(50mL)中的溶液加入N-叔丁基甲 胺(220mg，0.0025mol)、HATU(950mg，0.0025mol)和二异丙基乙胺(0.6mL，0.0032mol)。反应 混合物室温搅拌16小时。反应混合物用碳酸氢钠(10mL，10％)淬灭，用DCM(2x50mL)萃取。 有机层合并，用NaHCO3溶液(1x100mL，10％水溶液)、盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。 真空除去溶剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的 化合物(850mg，90％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75-7.73(dd，J＝1.4,5.5Hz，1H)，7.42-7.41(dd，J＝ 1.4,3.6Hz，1H)，7.18-7.15(dd，J＝3.8，5.6Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.59(s，1H)，6.01(s，1H)， 5.33(s，2H)，3.73(s，3H)，3.12(s，3H)1.73(s，3H)，1.41(s，12H)。m/z：452[M+H]+。
实施例22
8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔 丁基-甲基-酰胺(91)
步骤1：8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸乙酯
向7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸乙酯(1.2g，0.0027mol)在甲醇和乙酸乙酯的混合物(100mL)中的溶液加入钯/炭 (20％，0.24g)。反应混合物在室温和3bar氢气压力下进行加氢反应8小时。反应混合物经硅 藻土过滤，滤出催化剂，滤液真空浓缩。残留物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚：乙酸乙 酯，得到标题化合物(1.1g，90％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.81-7.79(dd，J＝1.4,5.5Hz，1H)，7.43-7.41(dd，J＝ 1.4,3.7Hz，1H)，7.20-7.18(dd，J＝3.7，5.5Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.36(s，1H)，5.44(s，2H)， 4.33-4.27(dd，J＝7.0，14.2Hz，2H)，3.74(s，3H)，2.12-2.10(d，J＝6.9Hz，2H)，1.59-1.56 (m，1H)，1.32-1.28(t，J＝7.1,14.2Hz，3H)，0.86-0.85(d，J＝6.6Hz，6H)。
步骤2：8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸
室温下向8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸乙酯(1.1g，0.0027mol)在THF(35mL)、水(10mL)、甲醇(5mL)的混合物中的溶液加入 LiOH.H2O(332mg，0.0080mol)。反应混合物室温搅拌4小时。反应混合物蒸发，用1.5NHCl溶 液酸化。滤出沉淀的固体，干燥，得到所希望的化合物(900mg，88％)，为乳白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.33(bs，1H)，7.79-7.78(dd，J＝1.4,5.5Hz，1H)， 7.41-7.40(dd，J＝1.4,3.7Hz，1H)，7.19-7.17(dd，J＝3.8，5.5Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.36 (s，1H)，5.43(s，2H)，3.73(s，3H)，2.12-2.10(d，J＝7.0Hz，2H)，1.59-1.56(m，1H)，0.71- 0.70(d，J＝6.6Hz6H)。m/z：385[M+H]+。
步骤3：8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸叔丁基-甲基-酰胺
室温和氮气气氛下向8-异丁基-7-甲氧基-1-噻吩-2-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸(900mg，0.0023mol)在DCM(50mL)中的溶液加入N-叔丁基甲胺(245mg， 0.0028mol)、HATU(1.0g，0.0028mol)和二异丙基乙胺(0.6mL，0.0038mol)。反应混合物室温 搅拌16小时。反应混合物用碳酸氢钠(10mL，10％)淬灭，用DCM(2x50mL)萃取。有机层合并， 用NaHCO3溶液(1x100mL，10％水溶液)、盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。真空除去溶 剂；粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯(9：1)，得到所希望的化合物 (850mg，90％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76-7.75(dd，J＝1.4,5.5Hz，1H)，7.38-7.37(dd，J＝ 1.4,3.7Hz，1H)，7.18-7.15(dd，J＝3.7，5.6Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.39(s，1H)，5.30(s，2H)， 3.73(s，3H)，3.12(s，3H)，3.12(s，3H)，2.12-2.10(d，J＝7.0Hz，2H)，1.60-1.56(m，1H)， 1.41(s，9H)0.71-0.70(d，J＝6.6Hz6H)。m/z：454[M+H]+。
流程5：
实施例23
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-(8-异丁基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢- 苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(97)
步骤1：8-异丁基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-羧酸
向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 (100.00mg；0.25mmol；1.00eq.)在[1,4]二噁烷(3.00ml)中的溶液加入2-甲基-丙烷-1-硫 醇(33.22mg；0.37mmol；1.50eq.)、乙酸钯(2.76mg；0.01mmol；0.05eq.)、4,5-二-二苯基磷 烷基-9,9-二甲基-9H-呫吨(14.21mg；0.02mmol；0.10eq.)和碳酸钾(101.81mg；0.74mmol； 3.00eq.)。反应混合物在120℃加热8天。混合物用乙酸乙酯稀释，盐水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到产物8-异丁基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃 并[4,3-c]吡唑-3-羧酸，为黄粗产物。
步骤2：(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-(8-异丁基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1, 4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮
向8-异丁基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸(80.00mg；0.19mmol；1.00eq.)在DCM(3.00ml；46.80mmol；243.67eq.)中的悬液加入 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物(0.17ml；0.29mmol； 1.50eq.)、3,3-二甲基-吗啉(0.14ml；0.29mmol；1.50eq.)和乙基-二异丙胺(0.10ml； 0.58mmol；3.00eq.)。反应物室温搅拌1小时。混合物浓缩，经快速谱法纯化，得到所希望 的产物(40mg，40％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.02-7.98(s，1H)，7.88-7.83(m，1H)，7.35(dd，1H)，6.72(s， 1H)，6.60(s，1H)，5.37(s，2H)，3.94(m，2H)，3.80(s，3H)，3.72(t，2H)，3.42(s，2H)，2.34(d， 2H)，1.60(七重峰，1H)，1.42(s，6H)，0.91(d，6H)。m/z＝514[M+H]+。
实施例24
8-异丙基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 羧酸叔丁基-甲基-酰胺(52)
按照实施例23的相同程序，由8-异丙基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(170mg，0.42mmol)和正叔丁基甲胺(73.63mg， 0.84mmol，2eq.)制备8-异丙基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4, 3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺，得率是15％(29mg)，为白固体。m/z＝472[M+H]+， HPLC停留时间＝6.45min。
实施例25
7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(79)
向8-异丙基硫烷基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(24mg，0.05mmol)在DCM(2mL)中的溶液加入3-氯过苯甲酸 (11.40mg；0.05mmol；1.00eq.)。反应混合物室温搅拌2小时。混合物经快速谱法纯化，得 到所希望的产物(8mg，32％)，为白固体。m/z＝504[M+H]+，HPLC停留时间＝4.40min。
实施例26
(8-环丙烷磺酰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮(106)
步骤1：8-(环丙基磺酰基)-7-甲氧基-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸
向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 (100.00mg；0.25mmol；1.00eq.)在N，N-二甲基-甲酰胺(3.00ml)中的悬液加入环丙烷亚磺 酸钠(47.19mg；0.37mmol；1.50eq.)、碘化铜(23.38mg；0.12mmol；0.50eq.)和N，N'-二甲基- 乙烷-1,2-二胺(0.04ml；0.37mmol；1.50eq.)。反应混合物加热至90℃，保持18小时。混合物 过滤，浓缩，冻干，得到8-(环丙基磺酰基)-7-甲氧基-1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸，为蓝固体。
步骤2：(8-环丙烷磺酰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
按照以上实施例23步骤2的相同程序，由8-(环丙基磺酰基)-7-甲氧基-1-(噻吩- 3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(30.00mg；0.07mmol；1.00eq.)和3,3-二 甲基-吗啉(0.05ml；0.10mmol；1.50eq.)制备(8-环丙烷磺酰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1, 4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮。得到所希望的化 合物，得率是33％(12mg)，为蓝固体。
LCMS：m/z＝530[M+H]+HPLC停留时间＝3.24min。
实施例27
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(112)
步骤1：7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸
按照以上实施例26(步骤1)的相同程序，由8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(100.00mg；0.25mmol；1.00eq.)和丙烷-2-亚磺酸钠 (47.94mg；0.37mmol；1.50eq.)制备7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸，为粗蓝固体。
步骤2：(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮
按照以上实施例26(步骤2)的相同程序，由7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(100.00mg；0.23mmol；1.00eq.)和3， 3-二甲基-吗啉(0.17ml；0.35mmol；1.50eq.)制备(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8- (丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮，得率是 8.2％(5mg)，为蓝固体。LCMS：m/z＝532[M+H]+，HPLC停留时间＝3.25min。
实施例28
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰基)-1-噻吩-3- 基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(127)
步骤1：7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃 并[4,3-c]吡唑-3-羧酸
按照以上实施例26(步骤1)的相同程序，由8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二 氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(100.00mg；0.25mmol；1.00eq.)和2-甲基-丙烷-1-亚 磺酸钠(53.10mg；0.37mmol；1.50eq.)制备77-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸，为粗蓝固体。
步骤2：(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮
按照以上实施例26(步骤2)的相同程序，由7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰 基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(30.00mg；0.07mmol； 1.00eq.)和3，3-二甲基-吗啉(46.22mg；0.40mmol；6.00eq.)制备(3,3-二甲基-吗啉-4- 基)-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烷-1-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-基]-甲酮，得率是13.7％(5mg)，为白固体。
LCMS：m/z＝546[M+H]+，HPLC停留时间＝3.56min。
实施例29
7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸(3-羟基甲基-氧杂环丁烷-3-基)-酰胺(187)
按照以上实施例27的相同程序，由7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(70.00mg；0.16mmol；1.00eq.)和(3-氨基-氧杂 环丁烷-3-基)-甲醇(24.92mg；0.24mmol；1.50eq.)制备7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1- 噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3-羟基甲基-氧杂环丁烷-3-基)- 酰胺酮，得率是25％(21mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.77(s，1H)，8.02(dd，1H)，7.86(dd，1H)，7.34(dd，1H)，7.19 (s，1H)，6.93(s，1H)，5.64(s，2H)，5.14(s，1H)，4.67(d，2H)，4.51(d，2H)，3.90(s，3H)，3.68 (d，2H)，3.45(七重峰，1H)，1.08(d，6H)。m/z＝520[M+H]+。
实施例30
7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-酰胺(188)
按照以上实施例27的相同程序，由7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰基)-1-噻吩-3-基- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(70.00mg；0.16mmol；1.00eq.)和3-甲基-氧杂 环丁烷-3-基amine盐酸盐(29.87mg；0.24mmol；1.50eq.)制备7-甲氧基-8-(丙烷-2-磺酰 基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3-甲基-氧杂环丁烷-3- 基)-酰胺，得率是34％(28mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.95(s，1H)，8.03(dd，1H)，7.85(dd，1H)，7.34(dd，1H)，7.18 (s，1H)，6.93(s，1H)，5.64(s，2H)，4.71(d，2H)，4.31(d，2H)，3.90(s，3H)，3.45(七重峰， 1H)，1.59(s，3H)，1.07(d，6H)。m/z＝504[M+H]+。
实施例31
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[8-(1-羟基-2-甲基-丙基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(131)
向(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-8-(2-甲基-丙烯基)-1-噻吩-3-基-1,4- 二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(70.00mg；0.15mmol；1.00eq.)在THF(3.00ml) 中的悬液加入甲基硫烷基甲烷和(16.63mg；0.22mmol；1.50eq.)。反应混合物在室温搅 拌2小时。然后慢慢地加入NaOH(2N溶液)。反应混合物用反相制备型HPLC(45-60％CH3CN在 0.1％NH4OH水溶液中的溶液)纯化，得到所希望的产物(19mg，26％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.86(dd，1H)，7.78(dd，1H)，7.28(dd，1H)，6.92(s，1H)，6.65 (s，1H)，5.39(d，1H)，5.26(d，1H)，4.56(d，1H)，4.50(t，1H)，4.03-3.96(m，1H)，3.93-3.85 (m，1H)，3.77–3.70(m，5H)，3.42(s，2H)，1.61(sextet，1H)，1.42(d，6H)，0.74(d，3H)，0.68 (d，3H)。m/z＝498[M+H]+。
实施例32
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-1-噻吩-3-基-8-(5-三甲基硅烷基-5H-[1, 2,4]三唑-3-基)-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(139)
0℃下向三甲基硅烷重氮甲烷(0.17ml；0.33mmol；3.00eq.)在乙氧基-乙烷 (3.00ml)中的溶液加入正丁基锂(0.09ml；0.22mmol；2.00eq.)。反应混合物在0℃搅拌30分 钟，然后加入3-(3,3-二甲基-吗啉-4-羰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃 并[4,3-c]吡唑-8-腈(50.00mg；0.11mmol；1.00eq.)，反应混合物在0℃下搅拌多30分钟。将 反应混合物加热至室温，并于室温搅拌1小时。混合物浓缩，经柱谱法纯化，得到所希望的 产物(18mg，29％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.92(dd，1H)，7.72(dd，1H)，7.28(dd，1H)，6.79(s，1H)，6.73 (s，1H)，5.43(s，2H)，3.96–3.92(m，2H)，3.74–3.68(m，5H)，3.42(s，2H)，3.18(s，1H)，1.43 (s，6H)，0.06(s，9H)。m/z＝565[M+H]+。
实施例33
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-1-噻吩-3-基-8-(5H-[1,2,4]三唑-3-基)- 1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(161)
向(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-[7-甲氧基-1-噻吩-3-基-8-(5-三甲基硅烷基-5H- [1,2,4]三唑-3-基)-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基]-甲酮(34.00mg；0.06mmol； 1.00eq.)在THF(3.00ml)中的溶液加入四丁基氟化铵(1MinTHF)(0.30ml；0.30mmol； 5.00eq.)，反应混合物室温搅拌18小时。反应混合物浓缩，经反相制备型HPLC(35-40％ CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到所希望的产物(36mg，82％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)(四丁基ammonium盐)：δ7.89(dd，1H)，7.79(dd，1H)，7.73(s， 1H)，7.53(s，1H)，7.31(dd，1H)，6.70(s，1H)，5.31(s，2H)，3.96(t，2H)，3.83(s，3H)，3.73 (t，2H)，3.43(s，2H)，3.20–3.13(m，9H)，1.64-1.52(m，9H)，1.43(s，6H)，1.33(sextet，9H)， 0.94(t，12H)。m/z＝493[M+H]+。
实施例34
(8-氨基甲基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮(166)
步骤1：8-氰基-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸乙酯
向在密封管中的8-溴-7-甲氧基-1-(3-噻吩基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸乙酯(2g，0.0459mol)在NMP(50mL)中的溶液加入CuI(90mg，0.5mmol)，然后加入 CuCN(825mg，9.1mmol)。反应混合物被加热至160℃，保持16小时。反应混合物经硅藻土过 滤，浓缩滤液。粗产物经柱谱法纯化，洗脱液为二氯甲烷/甲醇(9：1)。产物用乙腈研磨，过 滤，得到所希望的化合物(0.7g，83％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)δ8.05-8.04(dd，J＝1.4,3.1Hz，1H)，7.90-7.88(dd，J＝ 3.2,5.1Hz，1H)，7.37-7.35(dd，J＝1.4,5.1Hz，1H)，5.63(s，1H)，4.33-4.28(m，2H)，3.89 (s，1H)，1.32-1.28(t，J＝12.9Hz，3H)。m/z＝382[M+H]+。
步骤2：8-氰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸
向8-氰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸乙 酯(300.00mg；0.79mmol；1.00eq.)在甲醇(6.00ml；177.52mmol；225.69eq.)中的溶液加入 氢氧化钾(66.20mg；1.18mmol；1.50eq.)和水(0.60ml)。反应混合物被加热至50℃，保持2小 时。反应物浓缩，冻干，得到粗产物，为灰固体。
步骤3：3-(3,3-二甲基-吗啉-4-羰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡 喃并[4,3-c]吡唑-8-腈(86)
向8-氰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 (270.00mg；0.76mmol；1.00eq.)在DCM(6.00ml；93.60mmol；122.50eq.)中的悬液加入2,4, 6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2,4,6-三氧化物(1.35ml；2.29mmol； 3.00eq.)、3,3-二甲基-吗啉(176.01mg；1.53mmol；2.00eq.)和乙基-二异丙胺(0.38ml； 2.29mmol；3.00eq.)。反应混合物室温搅拌1小时。混合物浓缩，经快速谱法纯化，得到所 希望的产物(309mg，90％)，为白固体。LCMS：m/z＝451[M+H]+。
步骤4：(8-氨基甲基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
将3-(3,3-二甲基-吗啉-4-羰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-8-腈(50.00mg；0.11mmol；1.00eq.)溶解在氨在甲醇(10.00ml；20.00mmol； 180.20eq.)中的溶液中，在70℃用雷尼镍管使反应混合物通过全氢压下的H-cube管。混合 物浓缩，经反相制备型HPLC(35-45％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到所希望的产物 (7mg，14％)，为白固体。LCMS：m/z＝455[M+H]+，HPLC停留时间＝2.71min。
实施例35
N-[3-(3,3-二甲基-吗啉-4-羰基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃 并[4,3-c]吡唑-8-基甲基]-乙酰胺(175)
向(8-氨基甲基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3- 基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮(20.00mg；0.04mmol；1.00eq.)在DCM(2.00ml； 31.20mmol；709.11eq.)中的悬液加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦杂环己烷2, 4,6-三氧化物(0.04ml；0.07mmol；1.50eq.)、乙酸(3.96mg；0.07mmol；1.50eq.)和乙基-二 异丙胺(0.02ml；0.13mmol；3.00eq.)。反应混合物室温搅拌1小时。混合物浓缩，经反相制备 型HPLC(32-38％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到所希望的产物(4mg，18％)，为白 固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.91-7.76(m，2H)，7.28-7.22(m，1H)，6.74-6.61(m，2H)， 5.37-5.26(m，2H)，4.14(s，0.5H)，3.96(d，3.5H)，3.84-3.69(m，5H)，3.42(s，2H)，2.05(s， 0.5H)，1.91(s，0.5H)，1.86–1.76(m，3H)，1.42(s，6H)。m/z＝497[M+H]+。
实施例36
8-氰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁 基-甲基-酰胺(12)
向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁 基-甲基-酰胺(210mg，0.44mmol)在NMP(5mL)中的溶液加入CuCN(43.5mg，0.48mmol， 1.1eq.)和CuI(8.4mg，0.044mmol0.1eq.)。反应混合物在170℃微波加热70分钟。混合物用 反相制备型HPLC纯化，得到所希望的产物(10mg，5％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.54(ddd，J＝4.7，4.1,2.4Hz，2H)，7.19(dd，J＝5.0， 1.5Hz，1H)，6.97(s，1H)，6.62(s，1H)，5.58(s，2H)，3.92(s，3H)，3.28(s，3H)，1.53(s，9H)。 m/z＝423[M+H]+。
实施例37
7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基-乙基)-酰胺(179)
向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3- 甲基-氧杂环丁烷-3-基)-酰胺(1.00g；2.10mmol；1.00eq.)加入1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲 基-[1,3,2]二氧杂环戊-2-基)-1H-吡咯(652.08mg；3.15mmol；1.50eq.)、乙酸钯 (23.57mg；0.10mmol；0.05eq.)、二环己基-(2',6'-二甲氧基-二苯基-2-基)-磷烷 (86.18mg；0.21mmol；0.10eq.)、碳酸钾(870.42mg；6.30mmol；3.00eq.)、二噁烷(10.00ml) 和水(1.00ml)。反应混合物在120℃加热24小时。混合物浓缩，过滤，经反相制备型HPLC(35- 45％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到水解产物(14mg，1.3％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.06(s，1H)，7.90(s，1H)，7.39(s，1H)，7.31(s，1H)，7.00(s， 1H)，6.79(s，1H)，6.71(s，1H)，6.63(s，1H)，5.77(s，1H)，5.49(s，2H)，4.95(s，2H)，3.83(s， 3H)，3.65-3.56(m，5H)，3.53-3.45(m，2H)，1.30(s，3H)。m/z＝495[M+H]+。
实施例38
7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基-乙基)-酰胺(185)
按照以上实施例37的相同程序，由8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-酰胺(1.00g；2.10mmol；1.00eq.) 和1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊-2-基)-1H-吡唑(655.19mg； 3.15mmol；1.50eq.)制备7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯 并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基-乙基)-酰胺，得率是2％ (20mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.01(s，1H)，7.85(d，1H)，7.60(s，1H)，7.41(s，1H)，7.32(s， 2H)，6.76(s，1H)，6.49(s，1H)，5.53(s，2H)，4.95(s，2H)，3.84(s，3H)，3.78(s，3H)，3.66- 3.57(m，2H)，3.53-3.45(m，2H)，1.30(s，3H)。m/z＝496[M+H]+。
实施例39
7-甲氧基-8-(四氢-呋喃-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(194)
向8-(2,5-二氢-呋喃-3-基)-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4, 3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(30.00mg；0.06mmol；1.00eq.)在乙酸(3.00ml)中的悬 液加入钯/炭(0.02ml；0.32mmol；5.00eq.)。烧瓶用橡胶塞盖好，塞子的顶部设有氢气球。反 应混合物室温搅拌18小时。加入三乙胺，混合物经硅藻土过滤，混合物用反相制备型HPLC (55-63％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到所希望的产物(11mg，37％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.95(dd，1H)，7.84(dd，1H)，7.32(dd，1H)，6.69(s，1H)，6.60 (s，1H)，5.34(d，2H)，3.85(t，1H)，3.79(s，3H)，3.71–3.57(m，2H)，3.43(quintet，1H)， 3.21–3.15(m，4H)，2.10–2.00(m，1H)，1.56-1.40(m，10H)。m/z＝468[M+H]+。
实施例40
7-甲氧基-8-(四氢-呋喃-2-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡 唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(201)
按照以上实施例39的相同程序，由8-(4,5-二氢-呋喃-2-基)-7-甲氧基-1-噻吩- 3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺(65.00mg；0.14mmol； 1.00eq.)制备7-甲氧基-8-(四氢-呋喃-2-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲基-酰胺，得率是9％(6mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.93(dd，1H)，7.82(dd，1H)，7.30(dd，1H)，6.75(s，1H)，6.66 (s，1H)，5.33(q，2H)，4.90(dd，1H)，3.77(s，3H)，3.65-3.58(m，2H)，3.17(s，3H)，2.18–2.07 (m，1H)，1.85-1.74(m，1H)，1.70–1.59(m，1H)，1.50-1.40(m，10H)。m/z＝468[M+H]+。
实施例41
7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯(180)
步骤1：向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸(500.00mg；1.23mmol；1.00eq.)在DCM(10.00ml；156.01mmol；127.06eq.)中的溶液加入 (1S,3S)-3-氨基-环戊醇盐酸盐(253.43mg；1.84mmol；1.50eq.)、[(苯并三唑-1-基氧基)- 二甲基氨基-亚甲基]-二甲基-四氟硼酸铵(788.43mg；2.46mmol；2.00eq.)和乙基-二异丙 胺(0.61ml；3.68mmol；3.00eq.)。反应混合物室温搅拌1小时。混合物浓缩，经快速谱法纯 化，得到8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸((1S, 3S)-3-羟基-环戊基)-酰胺和8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c] 吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯(共247mg，41％)，为白固体。
步骤2：向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸((1S,3S)-3-羟基-环戊基)-酰胺和8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并 [4,3-c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯(120.00mg；0.24mmol；1.00eq.)的混合物加 入1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊-2-基)-1H-吡唑(76.37mg； 0.37mmol；1.50eq.)、乙酸钯(2.75mg；0.01mmol；0.05eq.)、二环己基-(2',6'-二甲氧基-二 苯基-2-基)-磷烷(10.05mg；0.02mmol；0.10eq.)、碳酸钾(101.46mg；0.73mmol；3.00eq.)、 二噁烷(4.00ml)和水(0.40ml)。反应混合物在140℃加热18小时。混合物浓缩，一部分混合 物经快速谱法(KPNH，80-100％乙酸乙酯/己烷，0-20％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到7-甲氧 基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 ((1S,3S)-3-羟基-环戊基)-酰胺(78mg，65％)，为白固体。剩余的粗物质用反相制备型 HPLC(35-45％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液中)纯化，得到7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3- 基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯 (5mg，4.2％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.94(s，1H)，7.82(s，1H)，7.60(s，1H)，7.50(s，1H)，7.33(s， 1H)，6.77(s，1H)，6.50(s，1H)，5.38(s，2H)，4.96(s，1H)，3.85(s，3H)，3.78(s，3H)，3.63(s， 1H)，1.32(d，12H)。m/z＝492[M+H]+。
实施例42
7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯(181)
按照以上实施例41的相同程序，由8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯制备7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡咯- 3-基)-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(1S,3S)-3-氨基-环戊酯， 得率是3％(3mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.01(s，1H)，7.88(s，1H)，7.38(s，1H)，7.01(s，1H)，6.88(s， 1H)，6.72(s，1H)，6.64(s，1H)，5.81(s，1H)，5.34(s，2H)，4.98(s，1H)，4.09(s，5H)，3.84(s， 3H)，3.59(s，4H)，1.48–1.14(m，12H)。m/z＝491[M+H]+。
实施例43
7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基-甲 基-酰胺(133)
向8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁 基-甲基-酰胺(70.00mg；0.15mmol；1.00eq.)加入硼酸、[1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁]二 氯化钯(ii)与二氯甲烷的络合物(1：1)(24.00mg；0.03mmol；0.20eq.)、二噁烷(2.00ml； 23.47mmol；159.74eq.)、碳酸铯(143.63mg；0.44mmol；3.00eq.)和水(0.20ml)。反应混合物 在120℃下加热18小时。反应混合物用反相制备型HPLC(45-55％CH3CN在0.1％NH4OH水溶液 中)纯化，得到7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸叔丁基- 甲基-酰胺(30mg，51％)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.94(dd，1H)，7.81(dd，1H)，7.32(dd，1H)，6.67(d，1H)，6.62 (d，1H)，6.47(dd，1H)，5.33(s，2H)，3.73(s，3H)，3.17(s，3H)，1.44(s，9H)。m/z＝398[M+H ]+。
实施例44
(2-甲氧基甲基-2-甲基-吡咯烷-1-基)-(7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮(183)
按照以上实施例43的相同程序，由(2-羟基甲基-2-甲基-吡咯烷-1-基)-(7-甲氧 基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮制备(2-甲氧基甲基-2- 甲基-吡咯烷-1-基)-(7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)- 甲酮，得率是50％(13mg)，为白固体。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.95(s，1H)，7.82(s，1H)，7.32(s，1H)，6.69–6.60(m，2H)， 6.49-6.44(m，1H)，5.43(s，2H)，4.05(s，1H)，3.90-3.79(m，2H)，3.73(s，3H)，3.59-3.52(m， 1H)，2.16–2.07(m，1H)，1.88-1.72(m，2H)，1.68-1.58(m，1H)，1.42(s，3H)。m/z＝443[M+H ]+。
实施例45
(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-(7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3- c]吡唑-3-基)-甲酮(128)
按照以上实施例43的相同程序，由(8-溴-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并 吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮制备(3,3-二甲基-吗啉-4- 基)-(7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-基)-甲酮，得率是 46％(13mg)，为白固体。
LCMS：m/z＝427[M+H]+，HPLC停留时间＝3.65min。
实施例46
7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3,8-二羧酸8-酰胺 3-(叔丁基-甲基-酰胺)(50)
步骤1：8-氨甲酰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑- 3-羧酸
向8-氰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸 (45.00mg；0.13mmol；1.00eq.)(实施例34)在DMSO(4mL)中的溶液加入H2O2(0.12ml； 1.27mmol；10.00eq.)和2.0MNaOH水溶液(0.64ml；1.27mmol；10.00eq.)。反应混合物室温 搅拌2小时。混合物经反相HPLC纯化，得到所希望的产物(17mg，35％)，为白固体。
步骤2：7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3,8-二羧酸 8-酰胺3-(叔丁基-甲基-酰胺)
向8-氨甲酰基-7-甲氧基-1-噻吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧 酸(17mg，0.05mmol)在DCM(1.00ml；46.80mmol；1022.39eq.)中的溶液加入DIPEA(0.02ml； 0.09mmol；2.00eq.)、O-苯并三唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯(29.40mg；0.09mmol； 2.00eq.)和N-叔丁基甲胺(0.01ml；0.09mmol；2.00eq.)。反应混合物室温搅拌30分钟。混合 物浓缩，经反相制备型HPLC纯化，得到所希望的产物(2.5mg，11％)，为白固体。
1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.88(s，1H)，7.71(s，1H)，7.69–7.56(m，1H)，7.26(d，J＝ 4.9Hz，1H)，6.79(s，1H)，5.46(s，2H)，3.98(s，3H)，3.23(s，3H)，1.54(s，9H)。m/z＝441[M+ H]+。
实施例47
按照实施例1公开的方法制备以下化合物：
实施例48
N-(1,3-二羟基-2-甲基丙-2-基)-7-甲氧基-N-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)- 1-(噻吩-3-基)-1,4-二氢苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-甲酰胺(217)
将化合物116(MSC2501240)(30.00mg；0.06mmol；1.00eq.)溶解在盐酸在水 (2.00ml)的溶液中。反应混合物室温搅拌过夜。把混合物施加在制备型HPLC(32-38％CH3CN 在0.1％NH4OH水溶液中)中，得到所希望的产物7-甲氧基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-噻 吩-3-基-1,4-二氢-苯并吡喃并[4,3-c]吡唑-3-羧酸(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基-乙基)- 甲基-酰胺(19.00mg；0.04mmol)(61％)，为白固体。LCMS：m/z＝513[M+H]+，HPLC停留时 间：2.67min。
实施例49
在CHOFSHR细胞中并在EC20FSH存在下生成环状AMP的EC50(试验A)
在每孔中将2500个Cho-FSHR-LUC-1-1-43细胞固定在5μl无酚红培养基DMEM/F12+ 1％FBS中。用分液仪将细胞平铺在384孔白低容量培养板(Greiner784075)中。用分液仪 将100μl(2X)在DMEM/F12和0.1％BSA中的EC20FSH/IBMX加入至2μl固定在384孔培养板的测 试化合物(化合物稀释至1：50)中。FSH终浓度是0.265pM，IBMX终浓度是200μM。化合物培养 板的布局如下：第1栏：2μlDMSO；第2栏：2μlDMSO；第3-12和13-24栏：2μl测试化合物，用 100％DMSO稀释至1：4，或者2μlFSH，用DMEM/F12+0.1％BSA稀释至1：4。FSH的起始浓度是 50nM(终浓度是0.5nM)。此外，第23栏含有2μlEC100FSH参考物(100X)(用DMEM/F12+0.1％ BSA稀释)，终浓度是0.5nM，第24栏含有2μl1mMAS707664/2参考化合物，将2.5μl化合物和 EC20FSH的混合物转移到细胞培养板(5μl细胞培养基加入1：2稀释液)。培养板在37℃培育1 小时。每孔加入10μl混合HTRF(CisBio#62AM4PEC)试剂，室温培育1小时。通过Envision读取 培养板，采用cAMPHTRF–低容量384孔协议。读取值是计算得到的荧光比率(665nm/620nm)。 数值以百分比(％)表示，显示某一浓度的激动剂相对于FSH标准的最大响应的百分比效果 (响应)。结果列于下表中。
实施例50
大鼠颗粒细胞EC50FSH(试验B)
本试验参照以下文献的教导进行：Yanofsky等人(2006)，Allostericactivation ofthefollicle-stimulatinghormone(FSH)receptorbyselective，nonpeptide agonists.JBC281(19)：13226-13233，该文献纳入本发明的内容作为参考。结果列于下表 中。
按照以下定义理解数据：
实施例51
药物制剂
(A)注射液瓶：将100g本发明化合物作为活性成分与5g磷酸二氢钠在3L再蒸馏水 中的溶液用2N盐酸调它的pH至6.5，无菌过滤，转移到注射瓶中，无菌条件下冻干，并在无菌 条件下密封。每个注射液瓶含有5mg活性成分。
(B)栓剂：将20g本发明化合物作为活性成分与100g大豆卵磷脂和1400g可可油混 合，倒入模中，冷却。每片栓剂含20mg活性成分。
(C)溶液制剂：由1g作为活性成分的本发明化合物、9.38gNaH2PO4·2H2O、28.48g Na2HPO4·12H2O和0.1g苯扎氯铵在940mL再蒸馏水中制成一种溶液。将该溶液的pH调至6.8， 再将该溶液配至1L，放射灭菌。该溶液以眼药水形式使用。
(D)软膏：在无菌条件下将500mg本发明化合物作为活性成分与99.5g凡士林混合。
(E)片剂：将1kg本发明化合物作为活性成分、4kg乳糖、1.2kg马铃薯粉、0.2kg滑石 和0.1kg硬脂酸镁按照常规方法压成片剂，以致于每片含10mg活性成分。
(F)包衣片剂：类似实施例E压成片剂，然后按照常规方法用蔗糖包衣、马铃薯粉、 滑石、黄芪胶和染料来包衣片剂。
(G)胶囊剂：将2kg本发明化合物作为活性成分按照常规方法导入硬胶囊中，以致 于每个胶囊含20mg活性成分。
(H)安瓿剂：将1kg本发明化合物作为活性成分在60L再蒸馏水中的溶液无菌过滤， 转移到安瓿中，无菌条件下冻干，并在无菌条件下密封。每个安瓿含有10mg活性成分。
(I)吸入喷雾剂：将14g本发明化合物作为活性成分溶解在10L等渗氯化钠溶液中， 将该溶液转移至商业可买到的带泵机构的喷雾容器中。可将溶液喷入嘴或鼻内。一次喷射 (约0.1ml)相当于一剂约0.14mg。
尽管此处描述了本发明的许多实施例，但显然采用本发明的化合物和方法可以改 变基本实施例，从而提供其他实施例。因此，应当理解，本发明的范围由所附的权利要求书 而非以示例方式提供的具体实施例限定。
本文发布于:2024-09-25 19:13:56，感谢您对本站的认可！
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