环肽

环肽

本发明涉及式I的新的环肽

环—(Arg-A-Asp-R¹-R²)    I 其中

A为Gly或Ala，

R¹为2—羧基—8—氨基—4—硫代毒芹侧碱—9—酮(Btd)、O— 氨基甲基—O’—羧基联苯(Biph)、2—氨基甲基—5—羧基甲基—噻 吩(Act)、或6—氨基己酸残基(Aha)或2—(1，7—二氮杂螺 [4.4]壬—7—基)—4—甲基戊酸((S，S)螺—Pro—Leu)或2— (3—氨基—1—吡咯烷—2—酮基)—4—甲基戊酸残基((S)Gly [ANC—2]—Leu或(R)Gly[ANC—2]—Leu)，在每一种情况下 残基通过肽键键合，

R²不存在或者为Val， 和它们的生理上可接受的盐。

相似的化合物可从Pharmazie 40(8)，532—5，(1985)中知道。

本发明的目的是发现具有有价值的性质的新的化合物，特别是 那些能够被用于药剂制备中的化合物，现已发现式I化合物和它们 的盐具有非常有用的特性。它们特别适用于整合蛋白抑制剂，在本 文中它们特别地抑制了β₃—或β₅—整合蛋白受体与配体间的相互作 用。这些化合物对整合蛋白α_vβ₁、a_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆和α_11bβ₃尤其有效， 这种作用可被，例如J.W.Smith等认在J.Biol.Chem.256，12267— 12271(1990)中所述的方法证实。除此之外它们还有消炎作用。所 有这些作用可用文献中已知的方法来证实。

这些化合物能用作人和兽类药物中药剂的活性物质，尤其适于 预防和血液循环失调、血栓形成、心肌梗塞、冠状动脉血栓形 成心脏病、动脉硬化、动脉粥样硬化、炎症、中风、心绞痛、肿瘤、 溶骨病、特别是骨质疏松、血管形成术后的血管生成和心瓣再狭窄。 此外，它们在伤口过程中可以具有辅助作用。

上文和下文中给定的氨基酸残基的缩写表示下列的氨基酸残 基： Act        2—氨基甲基噻吩—5—乙酸 Aha        6—氨基己酸 Ala        丙氨酸 Asn        天冬酰胺 Asp        天冬氨酸 Asp(OR)    天冬氨酸(β—酯) Arg              精氨酸 Biph             O—氨基甲基联苯基—O’—羧酸 Btd              8—氨基—4—硫代毒芹侧碱—

             9—酮—2—羧酸 Cys              半胱氨酸 Gln              谷氨酰胺 Glu              谷氨酸 Gly              甘氨酸 Gly[ANC—2]—Leu 2—(3—氨基—1—吡咯烷

             —2—酮基)—4—甲基戊酸 His              组氨酸 Ile              异亮氨酸 Leu              亮氨酸 Lys              赖氨酸 Met              蛋氨酸 Nle              正亮氨酸 Orn              鸟氨酸 Phe              苯丙氨酸 Pro              脯氨酸 螺—Pro—Leu     2—(1，7—二氮杂螺[4，4]—6

            氧代壬—7—基)—4—甲基戊酸 Ser    丝氨酸 Thr    苏氨酸 Trp    氨酸 Tyr    酪氨酸 Val    缬氨酸 此外，下文所用的缩写具有下面的定义： BOC    叔丁氧基羰基 CBZ    苄氧基羰基 DCCI   二环己基碳化二亚胺 DMF    二甲基甲酰胺 EDCI   N—乙基—N’—(3—二甲基氨基丙基)碳化二

   亚胺盐酸盐 Et     乙基 Fmoc   9—芴基甲氧基羰基 HOBT   1—羟基苯并三唑 Me     甲基 Mtr    4—甲氧基—2，3，6—三甲基苯基磺酰基 OBut   叔丁氧基 OMe    甲氧基 OEt    乙氧基 POA     苯氧基乙酰基 TBTu    2—(1H—苯并三唑—1—基—1，1，3，3

    —四甲基四氟硼酸脲 TFA     三氟乙酸

上述氨基酸可能存在有两种或多种对映体形式，则在上文和下 文中，例如作为式I化合物的组成部分包括所有对映体形式以及它 们的混合物(例如DL形式)。作为式I化合物组成部分地氨基酸可 进一步被适当的保护基保护。

本发明进一步涉及式I化合物或它的一种盐的制备方法，其特 征是用溶剂解或氢解试剂处理使这种化合物从它的一种功能性衍生 物中被释放出来

或者用一种环化剂处理式II的肽

                 H—Z—OH    II

其中Z为

           -Arg-A-Asp-R¹-R²-

           -A-Asp-R¹-R²-Arg-

           -Asp-R¹-R²-Arg-A-

           -R¹-R²-Arg-A-Asp-or

           -R²-Arg-A-Asp-R¹-， 或该肽的反应性衍生物， 和/或通过用酸或碱处理使式I的碱性或酸性化合物转化为其一种 盐。

除非特别说明，上、下文中的残基A、R¹、R²和Z的含义与式 I和II中的含义相同。

残基(S，S)螺—Pro—Leu为2—(1，7—二氮杂螺[4，4]— 6—氧代壬—7—基)—4—甲基戊酸残基，并具有如下结构：

残基(S)Gly[ANC—2]—Leu或(R)Gly [ANC—2]—Leu 为3(S)—或3(R)—2—(3—氨基—1—吡咯烷—2—酮基)—4— 甲基或酸残基， Biph为O—氨基甲基联苯基—O’—羧酸残基，Biph 1和Biph 2 为可能的阿托异构体。

残基R¹如同残基R²一样，所有前面给出的定义同样优选。因此 本发明同样涉及环五肽和环四肽。

A优选为Gly，但也可为Ala，尤其是DAla。

式I的化合物，以及制备它们的反应物，是另外用已知的方法制 备的，如在文献中所述(例如在标准著作如Houben—Weyl，Methoden der Organischen Chemie[有机化学方法](Methods of Organic Chemistry)，(Georg—Theime—Verlag.Stuttgart)，尤其是在已知的并 适用于所提到的反应的条件下进行。也可利用在本文中未详细提到 的已知的改进方法。

(R)—和(S)—式肽组分Gly[ANC—2]—Leu可按 R.M.Freidinger等人在J.Org.Chem.47，104(1982)中所述的方法 制得。螺—Pro—Leu成分则可按类似于P.Ward等人在J.Med. Chem.33，1848++(1990)中所述的方法制得。Btd的合成则可按U. Nagai等人在Tetrahedron 49，3577—3592(1993)中所述方法进行。

如果需要，起始物料也可就地形成，因此不必从反应混合物中 将它们分离出来而是直接进一步反应产生式I的化合物。

式I化合物能用溶剂解，特别是水解，或用氢解的方法从它们的 功能性衍生物释放出式I化合物来制备。

用于溶剂解或氢解的优选的起始物料是那些含有(替代一个或 多个游离的氨基和/或羟基)被保护的氨基和/或羟基的化合物，优 选地是那些含有，(替代连接于一个氮原于上的一个氢原子)，一个 氨基保护基，例如那些遵从于式I但含有，(替代NH₂基)一个 NHR’基(其中R’是一个氨基保护基，例如：Fmoc、BOC或CBZ 的化合物。

另一些优选的起始物料是那些(替代羟基中的氢原子)带有羟 基保护基的化合物，例如那些遵从于式I但含有替代羟基苯基的一 个R”O—苯基(其中R”是羟基保护基)的化合物。

在起始物料的分子中也可能存在着两个或多个相同或不同的被 保护的氨基和/或羟基，如果存在的保护基是彼此不同的，则在许多 情况下它们可以被选择性地除去。

术语“氨基保护基”通常是已知的涉及那些具有保护(封闭)一 个氨基不参加化学反应的能力，但是在分子的其它部分所需要的化 学反应实施完后能够很容易被除去的基闭，特别是，这些基团代表 性的是未被取代的或已被取代的酰基、芳基、芳烷氧基甲基或芳烷 基。由于氨基保护基在所需的反应(或反应序列)后被除去，它们 的性质和大小在其它方面并不重要；但是，那些具有1—20，尤其是 1—8个碳原子的保护基是优选的。在本发明的方法中术语“酰基”应 该被认为是最广泛意义上的，它包括从脂肪族、芳基脂肪族、芳香 族或杂环羧酸或磺酸中衍生来的酰基，尤其是烷氧基羰基、芳氧基 羰基和，特别是芳烷氧基羰基。这样的酰基的实例是烷酰基如乙酰 基、丙酰基和丁酰基；芳烷酰基如苯乙酰基；芳酰基如苯甲酰基或 甲苯酰基；芳氧基烷酰基如POA；烷氧基羰基如甲氧基羰基、乙氧 基羰基，2，2，2—三氯乙氧基羰基，BOC，和2—碘代乙氧基羰基； 芳烷氧基羰基如CBZ(苄氧羰基)，4—甲氧基苄氧基羰基和Fmoc；和 芳基磺酰基如Mtr。优选的氨基保护基是BOC和Mtr，还有CBZ， Fmoc，苄基和乙酰基。

术语“羟基保护基”同样是通常已知的和涉及那些具有保护羟 基不参加化学反应能力的基团，但这些基团在分子其它部分的所需 的化学反应实施完后很容易除去。这样的基团代表性的是上述未取 代的或取代的芳基、芳基烷基或酰基，还有烷基。由于这些基团在 所需要的化学反应或反应序列后又被除去，所以羟基保护基的性质 和大小并不太重要；1—20，尤其是1—10个碳原子的羟基保护基是 优选的。羟基保护基的实例包括苄基、对硝基苯甲酰基、对甲苯磺 酰基、叔丁基和乙酰基，其中苄基和叔丁基是特别优选的。在天冬 氨酸和谷氨酸中的COOH基以它们的叔丁酯形式(例如，Asp (OBut)被保护较好。

被用作起始物料的式I化合物的功能性衍生物可以用氨基酸和 肽合成的常规的方法来制备，如在上述的权威著作和专利申请中所 叙述的方法，例如Merrifield的固相方法(B.F.Gysin和R.B.Merri- field，J.Am.Chem.Soc，94，3102及下列等(1972))尤其优选的 是在流动反应器中按Fmoc方案合成，该方法由A.Jonczyk和J. Meienhofer在Peptides，Proc.8th.Am.Pept.Symp.73—77 (1983)(Eds.V.J.Hruby.and D.H.Rich)，Pierce Co.Rockford 中进行了叙述。

从式I化合物的功能性衍生物中释放出式I的化合物的实施取 决于所用的保护基的性质，例如用强酸，较有利地用TFA或高氯酸， 或用其它的强无机酸如盐酸或硫酸，强的有机羧酸，如三，或 磺酸如苯—或对—甲苯磺酸。额外存在一种惰性溶剂是可能的但不 总是必需的，适当的惰性溶剂较好是有机酸，例如羧酸如乙酸，醚 如四氢呋喃或二噁烷，酰胺如DMF，卤代烃如二氯甲烷，和醇如甲 醇、乙醇或异丙醇，还有水。上述溶剂的混合物也是适宜的。较好 地是过量使用TFA而不需要加入其它溶剂，而高氯酸较好地是以乙 酸和70％高氯酸的比率为9∶1的混合物的形式来使用。裂解的反 应温度较有利地是在大约0℃至大约50℃，优选15至30℃(室温)。

例如，基团BOC、OBut和Mtr可较有利地用TFA在二氯甲烷中 除去或用3～5nHCl在二恶烷中于15—30℃下除去，Fmoc基团的除 去可用大约5～50％浓度的二甲胺、二乙胺或等仲胺在DMF中 的溶液于15～30℃来进行。

能够被氢解除去的保护基(例如，CBZ或苄基)能够用，例如， 氢在催化剂(例如，贵金属催化剂如钯，较有利地是载于活性炭 上)存在下进行处理来除去。在这方面，适当的溶剂是那些上面所 给定的，特别是醇如甲醇或乙醇，或酰胺如DMF。氢解通常是在大 约0～100℃的温度下和大约1～200巴的压力下，优选在20～30℃ 和1—10巴下实施，例如，CBZ基的氢解较有利地是于20～30℃用 5～10％Pd—C在甲醇中或用甲酸铵(代替H₂)于Pd—C上在甲醇/ DMF中完成。

式I化合物也可在合成肽的条件下通过环化式II化合物获得， 该反应优选按常规的肽合成法，如Houben—Weyl，Volume 15/II，page 1—806(1974)中所述的方法进行。

反应优选地是在有脱水剂存在下，例如碳化二亚胺如DCCI或 EDCI，和丙膦酐(比较Angew.Chem，92，129(1980)，二苯基膦 酰叠氮化物或2—乙氧基—N—乙氧基羰基—1，2—二氢喹啉在惰性 溶剂中，例如卤代烃如二氯甲烷、醚如四氨呋喃或二噁烷，酰胺如 DMF或二甲基乙酰胺，腈如丙烯腈，或在这些溶剂的混合物中，于 大约-10～40℃，优选0～30℃的温度下进行。为了促进在分子间肽 结合前发生分子内环化，优选在稀溶液中进行反应。

为了替代式II化合物在反应中也可以使用这些化合物的适当 的反应性衍生物，例如那些反应性基团在中间被保护基封闭的衍生 物，可以使用式II的氨基酸衍生物，例如，以它们的活性酯的形式， 较有利地是通过加入HOBt或N—羟基琥珀酰亚胺在原有位置上形 成酯。

式II的起始物料通常是新的，它们可用已知的方法，例如用上 面所给的肽合成的方法和除去保护基的方法来制备。

通常，进行合成的第一步是制备如式R’—Z—OR”的被保护的 五肽酯，例如BOC—Z—OMe或BOC—Z—OEt，这些化合物水解产生 式R’—Z—OH的酸，例如BOC—Z—OH；从这些酸中除去保护基 R’，由此得到式H—Z—OH(II)的游离肽。

用酸可将式I的碱转化成相应的酸加成盐，特别适用该反应的 酸是那些能产生生理上可接受的盐的那些酸。例如，可被使用的无 机酸的实例是硫酸、硝酸，氢卤酸如盐酸或氢溴酸，磷酸如正磷酸， 氨基磺酸，和有机酸，特别是脂族、脂环，芳脂族，芳香族或杂环 的单一或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如，甲酸、乙酸、丙酸，新戊 酸，二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、乳 酸、酒石酸、苹果酸、苯甲酸、水杨酸、2—或3—苯基丙酸、柠檬 酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸或乙磺酸、乙二磺 酸、2—羟基乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘—磺酸和萘二磺酸和 月桂基硫酸。与生理上不能接受的酸形成的盐，例如盐，能 被用来分离和/或纯化式I化合物。

另外，通过与碱反应式I的酸能被转化成一种它的生理上可接 受的金属盐或铵盐。特别适当的盐是钠、钾、镁、钙和胺盐，还有 取代的铵盐，例如二甲基铵盐，二乙基铵盐或二异丙基铵盐，单乙 醇铵盐、二乙醇铵盐或三乙醇铵盐、环己基胺盐和二环己基铵盐、二 苄基亚乙基二铵盐，还有例如，与N—甲基—D—谷氨酰胺或与精氨 酸或赖氨酸形成的盐。

式I的新的化合物，和它们的生理上可接受的盐通过将其与至 少一种赋形剂或助剂一起混和，如果需要，与一种或几种活性物质 一起投入适宜的药剂形式中用于制备药物制品。这样制得的制品可 被用作药物用于人体或兽医中。作为赋形剂的适宜的物质是那些适 于肠道(例如，口服或直肠的)，非肠道的(例如，静脉注射)或局 部(例如，皮肤、表面的、眼的或鼻的)服用或适于吸入剂喷雾形 式服用的并且不与新的化合物反应的有机物或无机物，实例是水或 等渗的盐水溶液，低级醇、植物油、苄基醇、聚乙二醇、甘油三乙 酸酯和其它脂肪酸甘油酯、明胶、大豆卵磷酯、碳水化合物如乳糖 或淀粉、硬脂酸镁、滑石、纤维素和凡士林，口服形式特别是片剂、 涂膜片剂、胶囊、糖浆、或滴剂；带有抗胃液涂层或胶囊套的涂膜 片剂和胶囊是特别受到注意的。栓剂能被用于直肠服用，而非肠道 服用则使用溶液，优选油性或水溶液，还有悬浮液，乳状液或移植 物。适于局部服用的药物形式的实例是溶液，它可以眼药水滴剂的 形式来使用，和其它实例是悬浮液、乳状液、霜剂、软膏或绷带。对 于吸入剂喷雾的服用方式来说，可以使用含有溶解于或悬浮于推进 气或推进气混合物(例如，CO₂或氟氯烃)的活性物质的喷雾。在这 种情况下活性物质优选以微粉化的形式被使用，可以存在有一种或 多种外加的生理上可接受的溶剂，例如，乙醇，用通常的吸入器可 配制吸入剂溶液。新的化合物可被冷冻干燥并且产生的冻干物能被 用于，例如，制备注射用制品。此时注射可以巨九剂或以连续注放 (例如，静脉、肌肉、皮下或鞘内)来进行。所述制品可以消毒和/ 或可以含有助剂，如防腐剂、稳定剂和/或润湿剂，乳化剂，影响渗 透压的盐，缓冲剂物质、着剂和/或香味剂。如果需要，它们也可 以含有一种或多种其它活性物质，例如一种或多种维生素。

根据本发明的物料通常按与其它已知的商业上可得到的多肽相 类似的方法服用，特别是用于与在US—A—4472305中所述的化合 物相似的方法服用，优选的剂量是大约0.05—500mg，特别是0.5— 100mg，每剂量单位。每天剂量优选大约0.01—2mg/kg体重。但是， 每个特定病人的特定剂量取决于许多因素，例如，所用的特定化合 物的效力，年龄、体重、健康的一般状态、饮食，给药的时间和途 径、排泄速度、药物的结合和各自病情的严重性。非肠道服用是优 选的。

此外，式I的新的化合物能被用作制备亲和层析柱，用于制备纯 整合蛋白。

本文中，配体即式I的肽衍生物，经定位功能基共价地偶合于聚 合物载体上。

适宜的聚合物载体材料是在肽化学中本身是已知的并优选地具 有亲水性的固态聚合物相，实例为交联的聚糖如纤维素、Sepharose 或Sephadex^、丙烯酰胺、以聚乙二醇为基体的聚合物或Tentakel^R聚 合物。

连接于聚合物载体上的适当的定位基优选的是2—12个碳原子 的线性亚烷基链，其一端直接连接于聚合物上，另一端带有一个功 能基如，羟基、氨基、巯基、马来酰亚胺基或—COOH，并适于与相 应的肽的功能侧链相连接。

在这方面有可能将肽直接连接或，如果需要，经过第二个定位 基定位于聚合物上。

此外，对一些是式I的肽的一个组成部分的氨基酸残基可以将 侧链修饰以使其经过SH、OH、NH₂或COOH基有可能定位于聚合物 上。

作为定位基其侧链可被直接使用的氨基酸残基的实例是例如 Arg或Asp。

可通过游离NH₂基团结合的定位基的实例是如下基团，如 —CO—C_nH_2n—NH₂、—CO—C_nH_2n—OH、—CO—C_nH_2n—SH或 —CO—C_nH_2n—COOH其中n＝2－12，亚烷基的链长不很严格：如果需要，该 链可以全部或部分地被例如，适当的芳基或烷基芳基所替代。

可被连接至游离酸性基闭上的C—末端定位基的实例是 —O—C_nH_2n—SH、—O—C_nH_2n—OH、O—C_nH_2n—NH₂、 —O—C_nH_2n—COOH、—NH—C_nH_2n—SH、—NH—C_nH_2n—OH、—NH—C_nH_2n—NH₂或—NH—C_nH_2n—COOH，n和亚烷基链均如上段所述。

用于纯化整合蛋白的亲合谱材料的制备是在常规的和对于氨 基酸缩合其本身是已知的和已经在式I化合物的制备的相关部分叙 述过的条件下来实施。

对于含硫醇的定位基，加成反应，例如与聚合物结合的硫醇进 行Michael加成以形成马来酰亚胺衍生物或二硫化物的反应是可能 发生的。

上下文中所用温度均为℃，在后面的实例中“常规操作”是指： 如果必需加入水，将混合物中和，用乙醚或二氯甲烷萃取，相分离， 有机相用硫酸钠干燥，过滤，蒸发浓缩和在硅胶上谱纯化和/或结 晶化。Rt＝HPLC在系统A：Lichrosorb RP^R选择B(250×4；5μm或 系统B：Lichrosorb^R RP18(250×4；5μm)上的保留时间(分)，洗脱 剂(系统A)：0.3％TFA水溶液；在流速为1ml/min时50分钟形成 0—80vol％异丙醇梯度；于215nm处检测。洗脱剂(系统B)：洗脱 剂A：0.1％TFA水溶液；洗脱剂B：0.1％TFA的乙腈/水(9∶1) 溶液；梯度20—90％B；以1ml/min的流速50分钟形成。M⁺＝用 “快原子轰击”(FAB)法获得的质谱的分子峰，所示分子量与所计算 的值相比增加了一个质量单位。 实施例1

用85ml二氯甲烷稀释0.4gH—Arg(Mtr)—Gly—Asp—Btd— ONa[它可通过用/DMF除去FMOC基团并用TFA/CH₂Cl₂(1∶ 1)除去树脂而得自FMOC—Arg(Mtr)—Gly—Asp—Btd—O— Wang，—O—Wang为改进的Merrifield技术中所使用的4—氧甲基 苯氧甲基聚苯乙烯树脂的残基]的15ml DMF溶液，并用50mg NaH-CO₃处理。在干冰/丙酮混合物中冷却后，加入40μl二苯基磷酰基叠 氮化物。室温下静置16小时后，浓缩溶液。过滤浓缩物(Sephadex G10柱，于异丙醇/水8∶2中)，然后通过HPLC按常规方式纯化，得 到环—(Arg(Mtr)—Gly—Asp—Btd)。

类似地，通过环化相应的线性肽可得到下列环肽：     环(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S，S)spiroPro-Leu)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph1)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph2)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Val)；     环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Btd-Val)；     环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha)；

环—(Arg(Mtr)-DAla-AspBtd)；

环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)；

环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)；

环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(S，S)spiroPro-Leu)；     环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Biph1)；     环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Biph2)；     环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Act). 实施例2

将0.28g环—(Arg(Mtr)—(Gly—Asp—Btd)[可按实施例1所 述通过环化得到]的8.4ml TFA溶液、1.7ml二氯甲烷和0.9ml苯硫 酚于室温下静置4小时，然后浓缩，用水稀释并冷却干燥。在 Sephadex G10(乙酸/水1∶1)上凝胶过滤，然后在所述条件下通过 制备性HPLC纯化，得到环—(Arg—Gly—Asp—Btd)；RT＝13.2；M⁺ ＝527。

类似地，可得到下列环肽：   由  环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)；RT＝4.8；

  M⁺525；   由  环—-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)；RT＝6.3；

  M⁺525；   由  环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S，S)spiroPro-Leu)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-(S，S)spiroPro-Leu)；RT＝14.6；

  M⁺565；   由  环—-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph1)制得：

  环—-(Arg-Gly-Asp-Biph1)；RT＝20.7；M⁺538；   由  环—(Arg(Mtr)Gly-Asp-Biph2)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Biph2)；RT＝20.8；M⁺538；   由  环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Act)，RT＝14.3；M⁺547；   由  环—(Arg(Mt)-Gly-Asp-Btd-Val)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)；   由  环—(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Btd-Val)制得：

  环—(Arg-DAla-AspBtd-Val)；   由  环—(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Aha) 实施例3

将80mg环(Arg—Gly—Asp—Btd)溶于0.01M HCl中5—6次， 并在每一次溶解后冷却干燥。然后通过HPLC纯化，得到环—(Arg— Gly—Asp—Btd)×HCl。

同样地，可得到下列环肽：   由  环—(Arg-Gly-Asp-Aha)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Aha)×HCl；   由  环—(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)制得：

  环—(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)×HCl；   由  环—(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)制得：

  环—(Arg-DAla-Asp-Btd-Val)×HCl；

由乙酸处理环—(Arg—DAla—Asp—Btd—Val)，得到：

环—(Arg—DAla—Asp—Btd—Val)×H₃C—COOH；

由0.01N硝酸处理环—(Arg—Gly—Asp—Aha)，得到；

环—(Arg—Gly—Asp—Aha)×HNO₃。 实施例4

为制备亲和相，将0.9gCl—(CH₂)₃—CO—NH—(CH₂)₃聚合物 [可通过Cl—(CH₂)₃—COOH与H₂N—(CH₂)₃聚合物的缩合得到]悬 浮于10ml 0.1M磷酸钠缓冲液(pH7)中，并于4°加入1当量环— (Arg(Mtr)—Gly—Asp(ONa)—Btd。搅拌反应混合物4小时，同 时升温至室温，滤出固体残余物，并用10ml缓冲液(pH7)洗涤两 次，然后用10ml水洗涤三次，得到环—(Arg(Mtr)—Gly—Asp (O(CH₂)₃—CONH—(CH₂)₃—聚合物)—Btd)。 实施例5

类似地，通过除去环—(Arg(Mtr)—Gly—Asp(—O— (CH₂)₃—CONH—(CH₂)₃—聚合物—Btd)中的Mtr基团可得到环— (Arg—Gly—Asp(O—(CH₂)₃—CONH—(CH₂)₃—聚合物)—Btd)。 实施例6

与实施例4类似，通常缩合聚—O(CH₂)₃—NH₂(市售)和环— (Arg—Gly—Asp—Biph1)可获得：环(Arg—Gly—Asp—(NH— (CH₂)₃—O—聚合物)—Bipb1)。

同样，通过缩合环—(Arg—Gly—Asp—Btd—Val)与H₂N (CH₂)₃—O—聚合物，得到：环—(Arg—Gly—Asp—(NH—(CH₂)₃— O—聚合物)—Btd—Val)。

以下实施例涉及药物制品。

实施例A：注射小瓶

将100克式I的环肽和5克磷酸氢二钠在3升二次蒸馏水中的 溶液用2N盐酸调整至pH＝6.5，过滤消毒，将其装入注射小瓶中和 然后在无菌条件下冷冻干燥，和在无菌条件下将小瓶封口，每个注 射小瓶含有5毫克活性物质。

实施例B：栓剂

将20克式I的活性物质与100克大豆卵磷酯和1400克可可奶 油的混合物熔化，倒入模具中和静置冷却，每个栓剂含有20毫克活 性物质。

实施例C：溶液

将1克式I活性物质，9.38克NaH₂PO₄×2H₂O、28.48克 Na₂HPO₄×12H₂O和0.1克亚苄基毒芹属氯化物溶于940毫升二次 蒸馏水中制得一种溶液，将溶液调整至pH＝6.8，稀释至1升和照射 消毒，该溶液能以眼药水的方式来使用。

实施例D：软膏

在无菌条件下将500毫克的式I的活性物质与99.5克凡士林 混合。

实施例E：片剂

将100g式I的环肽、1kg乳糖、600g微结晶纤维素、600g玉米 淀粉、80g滑石和10g硬脂酸镁的混合物以常规的方式压缩形成片 剂，每片含有10毫克活性物质。

实施例F：涂膜片剂

用与实施例E相类似的方法组成片剂，和然后以常规的方式用 含有蔗糖、玉米淀粉、滑石、黄蓍胶和着剂的涂层进行涂膜。

实施例G：胶囊

以常规的方式，用式I的活性物质装填成硬的明胶胶囊，使每个 胶囊含有5毫克的活性物质。

实施例H：吸入喷雾剂

将14g式I活性物质溶于101等渗NaCl溶液，并将该溶液注入 具有泵装置的市售喷雾容器中。该溶液可被喷至口腔或鼻腔中，一 次喷雾量(约0.1ml)相当于约0.14mg剂量。