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一种靶向甲状腺癌的药物及其制备方法与流程

一种靶向甲状腺癌的药物及其制备方法
1.本发明专利申请是申请日为2017年9月14日，申请号为201710828803.x，发明创造名称为“一种甲状腺癌的药物及其制备方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
2.本发明涉及医药领域，特别是涉及一种甲状腺癌的药物及其制备方法。

背景技术：

3.众所周知，恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，与病毒性疾病、老年性疾病并称为现代医学的三大挑战，其发病机制尚未完全阐明，效果亦不尽人意。据不完全统计，全球年均肿瘤的研发及费用开支不低于数百亿，给国家，社会和个人带来巨大损失。
4.甲状腺癌是头颈肿瘤中最常见的恶性肿瘤，2000年后发病呈持续快速增长趋势，2009年甲状腺癌发病率相较1975年上升了近3倍，从4.9/10万上升至14.3/10万，中国(2013年北京) 甲状腺癌10年发病率上升近400％。2010年中国女性甲状腺癌发病率排名上升至第六位，美国女性甲状腺癌发病率排名上升至第五位，已引起社会的广泛关注，甲状腺肿瘤的诊治越来越受到社会及医学界的重视。
5.淋巴结在解剖位置上常为甲状腺癌转移的第一站，发生转移的比例较高，那么在临床中，甲状腺癌患者的中央区淋巴结是否需要清扫，目前仍存在一些争议，包括中央区淋巴结清扫的必要性、清扫的范围等。高力教授认为，鉴于甲状腺癌转移发生率高，而中央区淋巴结常为最先累及区，因此，甲状腺癌患者进行中央区淋巴结清扫是非常必要的，而不清扫或清扫不彻底，患者必定会复发，而此时再进行手术难度会加大。
6.甲状腺癌的方式主要包括：手术、内分泌、放射性核素以及放射外照射。
7.目前临床上并没有很有效的甲状腺癌的方法和药物，因此，急需一种有效的抗癌药物以解癌症患者的燃眉之急。
8.硫酸铝是一种常见的硫酸盐，在造纸工业中作为松香胶、蜡乳液等胶料的沉淀剂，水处理中作絮凝剂，还可作泡沫灭火器的内留剂，制造明矾、铝白的原料，石油脱、脱臭剂、某些药物的辅料等。大约占总产量50％的硫酸铝第一大用途是用于造纸，第二大用途是在饮用水、工业用水和工业废水处理中做絮凝剂，大约占硫酸铝总产量40％。当向这类水中加入硫酸铝后，可以生成胶状的、能吸附和沉淀出细菌、胶体和其他悬浮物的氢氧化铝絮片，用在饮用水处理中可控制水的颜和味道。
9.在医药方面，硫酸铝也有少量的应用，如周国燎，吴树荣，陈缙云，等.复方硫酸铝溶液的组方研究[j].解放军医学院学报，1981(2).,公开了瘤内注射膀胱肿瘤取得了较好的疗效，对早期膀胱肿瘤的治愈率达91.1％。后期进一步的研究表明复方硫酸铝注射液对膀胱肿瘤具有一定的作用，但是随后30年多年以来，未见硫酸铝可以用于其他肿瘤。

技术实现要素：

[0010]
本发明的目的在于针对现有技术中存在的技术缺陷，提供一种低毒高效的靶向甲状腺癌的药物，其药物活性成分为硫酸铝或其水合物。
[0011]
本发明的第一个方面涉及一种甲状腺癌的药物，其包括硫酸铝或其水合物及药学上可接受的辅料。
[0012]
本发明的第二个方面涉及上述药物的剂型，其为药学上可接受的任意剂型。
[0013]
所述剂型优选为注射剂、粉剂或针剂；最优选局部注射粉针剂。
[0014]
本发明的第三个方面涉及一种药物的制备方法，其特征在于，包括将硫酸铝或其水合物与药学上可接受的辅料混合的步骤。
[0015]
根据上述的药物的制备方法，其优选还包括：硫酸铝或其水合物的制备步骤：将硫酸铝溶解、精滤后，经冷冻干燥，即得。
[0016]
所述硫酸铝或其水合物的具体制备方法包括：将硫酸铝与超纯水按质量比1:(2-5)混合，待硫酸铝全溶后，精滤，以同质量的超纯水清洗，纯化液冷冻干燥，得粉状硫酸铝或其水合物。
[0017]
其中，所述硫酸铝或其水合物的制备方法中硫酸铝与超纯水的质量比为1:3。
[0018]
根据上述的药物的制备方法，其优选还包括将所述药物制备成任意剂型的步骤。
[0019]
所述剂型优选为注射剂、粉剂或针剂；最优选为局部注射粉针剂。
[0020]
本发明的第四个方面涉及一种组合物在制备靶向甲状腺癌的药物中的用途，其特征在于，所述组合物包含硫酸铝或其水合物及药学上可接受的辅料；并且硫酸铝或其水合物为其活性成分；优选为全部或仅有的活性成分。
[0021]
所述药物的剂型可以是任意剂型；优选为注射剂、粉剂或针剂；最优选为局部注射粉针剂。
[0022]
本发明的第五个方面涉及硫酸铝或其水合物在制备靶向甲状腺癌的药物中的用途。
[0023]
所述药物的剂型可以是任意剂型；优选为注射剂、粉剂或针剂；最优选为局部注射粉针剂。
[0024]
根据本发明的药物及其制备方法、组合物的用途、硫酸铝或其水合物的用途，其中所述硫酸铝或其水合物选自十八水合硫酸铝。
[0025]
并且根据本发明的硫酸铝或其水合物，其优选是通过前述制备方法制备得到的。其hplc 图更优选基本如图1所示。
[0026]
为了彻底杜绝无三废排放，根据本发明，也可以直接采用厂家生产的高纯硫酸铝(分析纯)。但必须要从生产厂家源头进行严格的质量控制。
[0027]
本发明历经数十年的研究攻克，并首次发现“硫酸铝”能分辨识别人体正常组织与癌组织，使其癌组织自行从正常组织分离脱落，同时能分辨识别正常细胞与癌细胞并选择性饿死癌细胞。是目前为止对恶性肿瘤的疗效最快最确切具低毒高效，对正常细胞基本没有抑制作用，能迅速杀灭癌细胞缩小瘤体一代领先性化药，其疗效远优于目前传统抗癌药，它的诞生能挽救数以万计的患者生命，尤其对恶性肿瘤实体癌的。
[0028]
本发明优选提供了一种靶向甲状腺癌的局部注射的制剂及其制备方法。具有剂量微起效快疗程短副作用小等特点，甲状腺癌能快速缩小瘤体诱导凋亡抑制增殖。
[0029]
恶性肿瘤实体癌靶向局部穿刺注射(西药)用法用量：1克硫酸铝纯化物溶解于3ml
×
0.9％生理盐水所得到的全溶无透明针剂。ct定位b超引导下局部直接穿刺注射如下：
[0030]
关键词一：肿瘤注射完毕，患者必须禁止运动25～30分钟。其目的是避免注入肿瘤针水被挤压流失而失去药效。
[0031]
表1恶性肿瘤实体癌局部穿刺注射剂量
[0032][0033]
本发明历经数十年并投入巨资终获正式研发成功，是世界最前沿领先性系列抗癌特效新药。其疗效是百年至今人类对于恶性肿瘤实体癌的、放化疗、手术及现代任何手段所无法实现的，在给药后能使恶性肿瘤实体癌逐渐从人体正常组织自行分离脱落。
[0034]
可实现人体任何部位的恶性肿瘤实体癌靶向局部注射进针，如早期发现其恶性肿瘤体积约在2cm
×
2cm
×
2cm或者3cm
×
3cm
×
3cm，可实现只需进一针，36h至72h肿瘤细胞活性基本全部消失的突破效，其疗效远优于目前传统抗癌药。如肿瘤过大可再次进针。
[0035]
药理：细胞凋亡的关键途径如下：(1)、可改变癌细胞生理特征。(2)、抑制癌细胞分泌多种蛋白质水解酶。(3)、抑制癌细胞线粒体的代谢功能，从而实现抗肿瘤作用。(4)、该药物能结合到癌细胞的dna中，促进其裂解。(5)、能快速强收敛凝聚细胞表面糖蛋白。 (6)、有效控制癌细胞增殖和转移。(7)、该药物能有效改变细胞表面的蛋白结构。(8)、阻断信号通路。(9)、改变细胞微结构。(10)、并与细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶结合从而改变其生物效应。(11)、因正常细胞吸食有规律，反之癌细胞无规律这一特性。(12)、该(化合物)能识别分辨正常组织与非正常组织，正常细胞与非正常细胞并选择性饿死及杀灭癌细胞不抑制正常细胞，使得恶性肿瘤实体癌组织逐渐呈现碎片脱落的人类医学重大突破。其抑制率高达99.8～99.9％，甚至100％。
[0036]
研究进一步发现，硫酸铝纯化物能改变癌细胞生理特征使其不能分泌多种蛋白质水解酶，在胚胎中不能表达蛋白及其端粒酶活性。同时，该纯化物能与癌细胞dna有机结合，并能快速强收敛凝聚细胞表面糖蛋白，细胞表面糖蛋白的凝聚是有效控制癌细胞增值转移扩散的有效途径，强制胞膜皱缩必然造成细胞吸收通道阻断关闭。该纯化物能有效改变细胞表面的蛋白结构，使蛋白与特殊生长因子发出信号被有效阻断，同时该纯化物能渗透癌细胞膜影响细胞微结构生理功能的正常运行，并能与细胞线立体中的琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase)结合改变其生物效应。无论是正常细胞或者癌细胞，线粒体都是重要的细胞器之一，是供给细胞生命活动所需的能量。线粒体不仅具有细胞中大部分的酶,而且又是细胞内进行氧化磷酸化和电子传递的唯一场所。因此线粒体是对细胞损伤观测的敏感区域。对癌细胞线粒体的生物效应一旦酶的生物效应改变，其细胞的增值扩散转移且无法实现。该纯化物与人体正常细胞基本没有毒副作用，因此极大地排除了出现副作
用的风险。尤其是对一种甲状腺癌及其实体癌局部注射的具相对副作用小，并进一步提出了甲状腺癌的局部注射方法。
[0037]
毒理：大剂量经数十年研究及测验未见明显毒副作用，
[0038]
药效：具有剂量微、起效快、疗程短、副作用小等特点，上述恶性肿瘤能迅速缩小瘤体、诱导凋亡、抑制增殖。
[0039]
功能与主治：恶性肿瘤实体癌甲状腺癌。
[0040]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0041]
本发明的药物在甲状腺癌恶性肿瘤局部注射方面具有剂量微、起效快、疗程短、副作用小等特点，上述恶性肿瘤起效快；能迅速缩小瘤体、诱导凋亡、抑制增殖。本发明药物的制备方法便于实现规模化生产，并且硫酸铝的成本也相对低廉，成本更低，对甲状腺癌恶性肿瘤局部注射新药的开发具有重要的现实意义。
附图说明
[0042]
图1是纯化后硫酸铝的hplc谱图。
[0043]
图2是急性毒性实验的动物照片。
[0044]
图3是硫酸铝对甲状腺鳞癌细胞sw579的浓度-抑制率曲线。
[0045]
图4是硫酸铝对甲状腺导管癌细胞tt的浓度-抑制率曲线。
[0046]
图5是硫酸铝对甲状腺癌细胞增殖的影响，箭头表示坏死细胞。
[0047]
图6是硫酸铝对人甲状腺鳞癌细胞sw579凋亡的影响，a为溶媒对照组，b为化合物 10mg/ml组，c为化合物30mg/ml组，d为化合物100mg/ml组。
[0048]
图7是硫酸铝对人甲状腺导管癌细胞tt凋亡的影响，a为溶媒对照组，b为化合物 10mg/ml组，c为化合物30mg/ml组，d为化合物100mg/ml组。
[0049]
图8是硫酸铝对甲状腺癌细胞凋亡的影响，箭头表示细胞核皱缩，提示为凋亡细胞。
[0050]
图9是硫酸铝对人甲状腺鳞癌细胞sw579细胞周期的影响，a为溶媒对照组，b为化合物10mg/ml组，c为化合物30mg/ml组，d为化合物100mg/ml组。
[0051]
图10是硫酸铝对人甲状腺导管癌细胞tt细胞周期的影响，a为溶媒对照组，b为化合物10mg/ml组，c为化合物30mg/ml组，d为化合物100mg/ml组。
具体实施方式
[0052]
确证化学结构的试验资料
[0053]
实验委托湖南省实验动物中心(湖南省药物安全评价研究中心进行)。
[0054]
一、化合物名称、分子式及分子量
[0055]
中文名：十八水合硫酸铝(下文中统一简称为硫酸铝)
[0056]
分子式：al2(so4)3·
18h2o，分子量：666.4。
[0057]
二、确证化学结构的方法
[0058]
1、水分测定
[0059]
1.1测试条件：
[0060]
仪器：v-30卡式水分测定仪
[0061]
方法：《中国药典》2015年版四部通则0832水分测定法第一法。
[0062]
1.2测定结果
[0063]
表2、硫酸铝中水分测定结果
[0064]
取样量(mg)消耗卡氏试剂(ml)滴定度(t)水分(％)平均(％)修约31.085.592.681248.2248.3248.329.245.28 48.42
ꢀꢀ
[0065]
1.3、解析
[0066]
根据硫酸铝结构及水分含量计算，结构中含有结晶水的个数为18。
[0067]
铝元素的测定
[0068]
2.1、测试条件
[0069]
仪器：agilent 240-duo原吸收光谱仪
[0070]
方法：采用石墨炉原子吸收法，测定硫酸铝样品中铝元素含量。
[0071]
2.2、测试结果
[0072]
表3、硫酸铝样品中铝元素测试结果
[0073][0074]
结果表明：硫酸铝样品中铝元素的平均百分含量为8.15％。
[0075]
2.3、解析
[0076]
根据上述水分测定，按18个结晶水计算，铝元素占分子量的比例为8.11％，与上述原子吸收测定的铝元素含量一致，进一步表明样品中含有铝元素和18个结晶水。
[0077]
硫酸根离子的测定
[0078]
3.1、测试条件
[0079]
仪器：ics900离子谱仪
[0080]
方法：以25mm氢氧化钠作为淋洗液，谱柱为dionex ionpactm as18(4
×
250mm)，流速为1.0ml/min，进样量为25ul；采用无水硫酸钠作为对照品，按峰面积以外标法计算含量。
[0081]
3.2、测试结果
[0082]
表4、硫酸铝中硫酸根含量测定结果
[0083][0084][0085]
*为实际浓度。
[0086]
经测定，样品中含有硫酸根离子为45.5％。
[0087]
3.3、解析
[0088]
样品谱图与对照品谱图保留时间一致，表明样品中含有高浓度的硫酸根；根据水分及铝元素含量测定结果，采用离子谱法测定硫酸根离子含量为43.4％，与分子结构中硫酸根离子分子量占比为43.2％基本一致。
[0089]
4、结论
[0090]
根据水分测定、铝元素含量测定、硫酸根含量测定结果综合分析，本品分子式为 al2(so4)3·
18h2o。
[0091]
硫酸铝的纯化
[0092]
1)将硫酸铝按1:3的质量比溶解于纯水中；
[0093]
2)用等质量的纯水清洗，精滤除杂；
[0094]
3)将精滤后的纯化液进行冷冻干燥得到纯白粉末的硫酸铝纯化物。
[0095]
纯化后硫酸铝的hplc谱图如图1所示，可见纯化后的硫酸铝的纯度较提纯前有了较大的提高。冷冻干燥得到的硫酸铝具有更好的溶解性。
[0096]
为了彻底杜绝无三废排放以避免纯化，可直接采用厂家生产的高纯硫酸铝(分析纯或药用级)，但必须要从生产厂家源头进行严格的质量控制。
[0097]
安全性实验：
[0098]
安全性实验委托中山大学实验动物中心实验部进行。
[0099]
实验设计参考：
[0100]
1.徐叔云，药理实验方法学第三版
[0101]
2.2014版药物安全药理学研究技术指导原则。
[0102]
具体实验方法如下：
[0103]
实验材料
[0104]
硫酸铝，分子式：al2(so4)3·
18h2o，分子量：666.4。
[0105]
一、急性毒性试验
[0106]
1.试验目的：
[0107]
观察硫酸铝在单次给予后一定时间内是否产生的毒性反应，为初步了解药物的毒
性作用和其毒性靶器官，为后续的临床试验提供依据。
[0108]
2、试验动物和饲养条件
[0109]
spf级昆明小鼠40只，20
±
2g，雌雄各半。动物生产供应单位：中山大学实验动物中心生产部，实验动物生产许可证号为：scxk(粤)2011-0029，动物质量合格证明：no.440085000 购入日期：2016年08月15日；动物标识方法：用饱和将动物不同部位的皮毛涂染代表不同动物号，不同的动物饲养笼以动物饲养信息卡片标记进行区分。饲养温度20～26℃；湿度40rh％～70rh％；换气次数：饲养室大于15次/小时；饲养密度：养，每笼不多于6 只。使用饲料：spf级大、小鼠颗粒饲料，由北京科澳有限公司提供。对照组和给药组动物照片如图2所示。
[0110]
3、实验方法：将小鼠随机分为对照组和给药组，具体如下：
[0111]
表5、急性毒性试验分组和给药剂量
[0112]
组别药物给药剂量(mg/kg)给药容量动物数量对照组生理盐水/0.2ml/10g bw10只雌10只雄给药组硫酸铝溶液20000.2ml/10g bw10只雌10只雄
[0113]
硫酸铝溶液的配制方法为：用注射器准确抽取生理盐水5ml，注入装有硫酸铝的安剖内，混匀静置10～20min充分溶解得到。
[0114]
给药途径：灌胃给药。
[0115]
给药频率和观察时间：灌胃给药1次，药后观察14天。
[0116]
检测指标：临床观察：每天观察动物的一般症状；体重测量：于给药d0、d3、d7、d14 称量动物体重；脏器系数测定：于第15天处死动物，解剖观察主要脏器异常情况，取心、肝、脾、肺、肾5个脏器称重。
[0117]
结果处理和分析：用统计软件spss 24处理，计算两组动物的平均体重和脏器系数并作比较。
[0118]
实验结果：
[0119]
实验期间，对照组、给药组未见小鼠死亡及未见明显异常。
[0120]
给药组动物体重与对照组比较，无显著性差异，详见表6。
[0121]
表6、急性毒性小鼠体重的比较
[0122][0123]
脏器系数统计结果详见表7。
[0124]
表7、急性毒性小鼠脏器系数的比较
[0125][0126]
*与对照组比较无明显差异(p＜0.05)，小鼠全部存活无一死亡。
[0127]
结论：
[0128]
硫酸铝具有较好的安全性，给药剂量2000mg/kg、0.2ml/10g bw0，2ml/10g bw生理盐水，未见明显毒副作用。
[0129]
甲状腺癌细胞生长抑制对照试验
[0130]
实验委托湖南省实验动物中心(湖南省药物安全评价研究中心)进行。
[0131]
研究目的：本研究观察了硫酸铝对两种人甲状腺癌细胞株的体外抑制作用，为其进一步开发为抗甲状腺癌药物提供前期试验依据。
[0132]
研究方法：采用对数期生长的人甲状腺鳞癌细胞(sw579)、人甲状腺导管癌细胞(tt)，分别加入不同浓度的硫酸铝(0.3-300mg/ml)、顺铂和5-氟尿嘧啶，孵育72h后，采用cck-8法检测各孔的吸光度值(od值)，计算ic
50
。采用sw579、tt细胞，分别加入不同浓度的硫酸铝(10-100mg/ml)，孵育6h后，annexin v-fitc和pi双染法检测细胞凋亡，并同时采用hoechst 33342染，用荧光显微镜检测细胞凋亡。采用sw579、tt细胞，分别加入不同浓度的硫酸铝(10-100mg/ml)，孵育6h后，流式细胞术检测细胞周期。
[0133]
1实验材料
[0134]
1.1受试物：硫酸铝，批号：20170410，由湖南晓林生物科技发展有限公司提供。化合物配制：硫酸铝9g，加入0.9％氯化钠注射液15ml，并振荡至全部溶解，即得600mg/ml化合物溶液，此为最高浓度工作液，将母液进行除菌处理后备用。用0.9％氯化钠注射液将母液依次配制成200、60、20、6、2、0.6mg/ml的工作液。
[0135]
1.2阳性对照药：顺铂(ddp)，批号：sjjmi-ie，东京化成工业株式会社；5-氟尿嘧啶(5-fu)，批号：hfbm160120325008，amresco公司。阳性对照药配制：称取ddp或5-fu 2mg，用新鲜完全培养基配制成100mm的母液，再用新鲜完全培养基将母液依次配制成200、60、20、 6、2、0.6μm的工作液。
[0136]
1.3主要材料：
[0137][0138]
1.4主要仪器：
[0139][0140]
2 试验方法
[0141]
2.1 细胞培养
[0142]
取已长满的sw579、tt细胞，采用含10％fbs的高糖dmem完全培养基，于37℃、5％ co2培养箱中培养，根据细胞生长情况，1～2d传代或换液，至对数生长期备用。
[0143]
2.2cck-8法检测细胞增殖试验
[0144]
取对数期生长的sw579、tt细胞以每孔5
×
103个细胞接种于96孔细胞培养板中，待12h 细胞贴壁后，设置溶媒对照组、阳性对照药(ddp)组、阳性对照药(5-fu)组、硫酸铝组(0.3-300mg/ml)，每组5个复孔。溶媒对照组以新鲜完全dmem培养基孵育细胞，化合物组分别以含终浓度为0.3-300mg/ml化合物的新鲜完全dmem孵育细胞，ddp和5-fu组分别以含终浓度为100、30、10、3、1、0.3μm化合物的新鲜完全dmem孵育细胞。按上述处理方式孵育细胞72h后在每孔中加入cck-8 10μl，继续培养1h后使用酶标仪在450nm处测量各孔的吸光度。以溶媒对照组od值为100％细胞活力，其余各组od值与溶媒对照组od值的比值为相对活力。以细胞增殖抑制率评价化合物对sw579、tt细胞的毒性，若出现有细胞增殖抑制率＞100％时，判为仪器的系统误差，按100％计。
[0145]
2.3细胞凋亡的检测
[0146]
2.3.1 annexin v-fitc和pi双染法检测细胞凋亡
[0147]
取处于对数生长期的sw579、tt细胞，常规消化收集细胞，以5
×
105/孔的密度接种至6 孔板中，待12h细胞贴壁后，设置溶媒对照组、硫酸铝组(10、30、100mg/ml)，每组5个复孔。溶媒对照组以新鲜完全dmem培养基孵育细胞，化合物组分别以含终浓度为10、30、 100mg/ml化合物的新鲜完全dmem孵育细胞。6h后，常规消化收集细胞，加入500μl bindingbuffer缓冲液重悬细胞，将细胞转入1.5ml ep管中，加入5μl的annexin v-fitc、5μl的 pi，在室温避光条件下孵育15min，用流式细胞仪检测凋亡情况。
[0148]
2.3.2荧光染法检测细胞凋亡
[0149]
按照2.3.1方法处理细胞，在化合物处理6h后，在6孔板中每孔加入hoechst 33342染液1ml，充分覆盖住细胞，置于37℃培养20-30min。弃去染液，用pbs洗涤2-3次后在荧光显微镜下进行荧光检测。
[0150]
2.4流式细胞术检测化合物对甲状腺癌细胞周期的影响
[0151]
取处于对数生长期的sw579、tt细胞，常规消化收集细胞，以5
×
105/孔的密度接种至 6孔板中，待12h细胞贴壁后，设置溶媒对照组、硫酸铝组(100、30、10mg/ml)，每组5个复孔。溶媒对照组以新鲜完全dmem培养基孵育细胞，化合物组分别以含终浓度为10、30、 100mg/ml化合物的新鲜完全dmem孵育细胞。6h后，常规消化收集细胞，用70％冷乙醇固定过夜，加5μl的pi，室温避光孵育30min，用流式细胞仪检测细胞周期。
[0152]
2.5统计学分析
[0153]
用spss 16.0统计软件对数据进行处理，计量资料以表示，两样本均数的比较采用 student t-test检验，多样本组间均数的比较采用one-way anova检验，p＜0.05表示有统计学意义，p＜0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。
[0154]
3结果评价
[0155]
3.1硫酸铝对甲状腺癌细胞增殖的影响
[0156]
显微镜下观察不同浓度的化合物处理细胞后，出现细胞增殖速度减慢，细胞碎片增多、细胞间隙增大、细胞出现沙粒状空泡等现象。细胞状态与共培养时间有明确相关性，约在共培养12h后，细胞出现变圆、皱缩的现象；在共培养24h后，出现部分细胞胀大，细胞透光性变差，细胞间间隙增大；在共培养48h后，细胞出现沙粒状空泡，出现细胞破裂等情形；在共培养72h后，沙粒状空泡样细胞基本完全破裂，在300、100、30mg/ml浓度条件下无完整细胞形态的细胞，只见少量浓缩成黑点状。细胞与供试品或阳性对照药ddp和5-fu共培养72h后，细胞增殖受到明显抑制，且具有浓度-效应关系，与溶媒对照组比较具有显著性差异(p＜0.01)。细胞增殖抑制结果详见表8。
[0157]
表8硫酸铝对甲状腺癌细胞增殖的影响
[0158][0159]
注：*表示与溶媒对照组比较，p《0.05，**表示与溶媒对照组比较，p《0.01。ic
50
表示抑制50％肿瘤细胞的浓度，emax表示对肿瘤细胞的最大抑制率。
[0160]
3.2硫酸铝对甲状腺癌细胞凋亡的影响
[0161]
采用浓度为10、30、100mg/ml的化合物干预甲状腺癌细胞6h后，收集细胞，annexinv-fitc/pi双染后检测细胞凋亡。流式细胞仪可将双染后的细胞分成4组：q1-ul代表机械损伤细胞(annexin v-/pi+)；q1-ur晚期凋亡细胞(annexin v+/pi+)；q1-ll存活细胞(annexinv-/pi-)；q1-lr早期凋亡细胞(annexin v+/pi-)。结果表明：经硫酸铝处理的sw579细胞晚期凋亡及坏死细胞数明显高于溶媒对照组(p＜0.05)，并具有浓度-效应关系；经硫酸铝处理的 tt细胞晚期凋亡及坏死细胞数明显高于溶媒对照组(p＜0.05)，并具有浓度-效应关系。
[0162]
表9硫酸铝对人甲状腺癌细胞凋亡的影响
[0163]
[0164]
注：*表示与溶媒对照组比较，p＜0.05，**表示与溶媒对照组比较，p＜0.01
[0165]
3.3硫酸铝对甲状腺癌细胞周期的影响
[0166]
采用浓度为10、30、100mg/ml的化合物干预甲状腺癌细胞6h后，收集细胞，用70％冷乙醇固定后，pi染后，流式细胞仪分析细胞周期。结果表明：化合物在g0/g1细胞比例明显增加，g2/m期比例明显减少，表明其对甲状腺癌细胞增殖抑制作用主要是将甲状腺癌细胞阻滞在g0/g1期，阻止其进入s期。
[0167]
表10硫酸铝对人甲状腺癌细胞周期的影响
[0168][0169]
注：*表示与溶媒对照组比较，p＜0.05，**表示与溶媒对照组比较，p＜0.01
[0170]
4结论与讨论
[0171]
综上所述，在本实验条件下，硫酸铝可显著抑制两种甲状腺癌细胞增殖，其ic
50
值分别为sw579(14.408mg/ml)、tt(14.116mg/ml)。并且进一步具有明显促凋亡作用，具有浓度
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效应关系，其可将细胞周期阻滞在g0/g1期，诱导细胞凋亡。在高浓度条件下，随着时间的延长，可将癌细胞完全杀死。本化合物发挥抑制癌细胞浓度较高，为mg/ml级，可能与其特有的作用机制相关。该化合物直接作用于肿瘤细胞表面，可改变癌细胞的生理特征，在细胞表面聚集后，能够有效改变细胞表面的蛋白结构，引起细胞表面和细胞间质的蛋白沉淀，导致细胞通透性严重下降，细胞间隙收缩，降低肿瘤细胞的分裂能力，有效控制细胞的增殖以及转移。化合物进入细胞内后，可抑制癌细胞分泌多种蛋白质水解酶，能够直接结合到癌细胞的dna中，引起dna的裂解，并且有效抑制癌细胞线粒体的代谢功能，结合线粒体中的琥珀酸脱氢酶，改变其生物效应，引起细胞微结构发生改变，阻断信号通路，干扰肿瘤细胞的生长代谢，诱发肿瘤细胞凋亡，实现杀灭癌细胞的效果。
[0172]
建议：
[0173]
如动物实验小鼠肿瘤移植成熟注射进针给药完毕，应栓塞进针通道或者封闭进针通道，同时必须单只隔离喂养，因药物注射完毕或多或少有一定气味及出现小鼓包，小鼠如果体喂养会出现相互撕咬而导致药水流出影响药效。如人体肿瘤进针不需要栓塞进针通道或者封闭进针通道。
[0174]
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

技术特征：

1.一种靶向甲状腺癌的药物，其特征在于，活性成分为十八水合硫酸铝；药物剂型为注射粉针剂；所述十八水合硫酸铝使用如下方法纯化得到：1)将硫酸铝与超纯水混合溶解，得到硫酸铝溶液；2)对硫酸铝溶液进行精滤，冷冻干燥得到十八水合硫酸铝冻干粉。2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述硫酸铝的水合物的纯化中，硫酸铝与超纯水的质量比为1:3。

技术总结

本发明公开了一种靶向甲状腺癌的药物及其制备方法。发明人通过长期研究，首次发现硫酸铝能分辨识别人体正常组织与癌组织，改变癌细胞生理特征、抑制癌细胞分泌多种蛋白质水解酶、抑制癌细胞线粒体的代谢功能，实现抗肿瘤作用、该药物能结合到癌细胞的DNA中，促进其裂解、能快速强收敛凝聚细胞表面糖蛋白、改变细胞表面的蛋白结构、阻断信号通路、改变细胞微结构、并与细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶结合，有效控制癌细胞增殖和转移，对癌细胞的抑制率高达99.8～99.9％甚至100％。硫酸铝副作用小，安全性高，口服肝癌具有剂量微、起效快、疗程短等优点，能迅速缩小瘤体、诱导凋亡、抑制增殖，最终碎片化脱落，为人类攻克甲状腺癌具有重要的现实意义。癌具有重要的现实意义。