紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用。

背景技术：

2.肺炎链球菌是一种革兰氏阳性的机会性病原体。肺炎链球菌通过液滴或气溶胶传播，定植于鼻咽上皮；通过细支气管向下传播至肺部，引起肺炎；穿过粘膜屏障进入血液，引起败血症；穿过血脑屏障，引起脑膜炎。肺炎链球菌是全球可能导致广泛疾病和死亡的最重要的病原体之一，对全球公告卫生造成极大危害，严重影响人类身体健康及畜牧养殖业的健康发展。目前用于肺炎链球菌感染的主要药物是抗生素。
3.紫菀酮是从菊科植物，紫菀的根及根茎中提取分离的一种三萜类化合物，具有镇咳，抗炎活性。目前已有研究表明紫菀酮具有减轻脓毒症引发的急性肺损伤、慢性阻塞性肺病症状、间质性膀胱炎损伤，抑制人乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭等等。但截至目前国内外未见紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂的相关报道。

技术实现要素：

4.本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用。
5.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用。
6.优选的，所述的紫菀酮为以紫菀酮为活性成分制成的药学上可接受的任何一种剂型。
7.优选的，所述的应用为紫菀酮在制备用于肺炎链球菌感染性疾病的药物中的应用。
8.优选的，所述的肺炎链球菌感染是指以溶血毒素为主要毒力因子之一的肺炎链球菌引发的感染。
9.本发明的有益效果为：本发明通过倍比稀释法考察了紫菀酮对肺炎链球菌d39的最小抑菌浓度为128μg/ml，通过考察不同浓度紫菀酮影响下肺炎链球菌d39的生长曲线，确定了紫菀酮在一定浓度范围内不影响肺炎链球菌的生长，通过鼻腔吸入使小鼠感染肺炎链球菌d39表明给与紫菀酮能够显著降低肺部感染菌落数量，从而减轻感染所致肺部损伤，综上证明紫菀酮对肺炎链球菌引发的感染具有良好的效果，具有极大的医疗应用价值和使用前景。
附图说明
10.图1为紫菀酮的分子结构；图2为肺炎链球菌在不同浓度紫菀酮中的吸光度值示意图；
图3为不同浓度的紫菀酮对肺炎链球菌溶血素的溶血率影响示意图；图4为紫菀酮对感染肺炎链球菌的小鼠肺部组织的菌落定植数影响示意图。
具体实施方式
11.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
12.实施例1紫菀酮作为肺炎链球菌溶血素抑制剂用于医药学上可接受的任何载体。
13.实施例2紫菀酮作为肺炎链球菌溶血素抑制剂用于制备感染性疾病的药物。
14.实施例3紫菀酮作为肺炎链球菌溶血素抑制剂用于细菌引起的感染性疾病，尤其是以ply为主要毒力因子的细菌引起的感染。
15.试验例1最小抑菌浓度试验：根据临床和实验室标准研究所的指导方针，使用倍比稀释法于96孔无菌聚丙烯微量滴定板内研究紫菀酮对肺炎链球菌的最低抑菌浓度。最小抑菌浓度（mic）值定义为在37℃下孵育18-24小时没有可见细菌生长的化合物的最低浓度。
16.结论：紫菀酮对肺炎链球菌d39的mic为128 μg/ml。
17.试验例2生长曲线试验：将肺炎链球菌的过夜培养物1:100稀释到新鲜 thy 液体培养基中，然后在37℃静态培养，直到细菌溶液在600 nm的吸光度值（od600 nm）达到0.3；将菌液等量分装后，加入紫菀酮使其终浓度分别为4 μg/ml、和8 μg/ml；同时添加等体积的二甲基亚砜作为对照；每小时测定各处理组的od600 nm，结果如图2所示。
18.结论：紫菀酮在8 μg/ml及以下浓度对肺炎链球菌的生长无影响。
19.试验例3溶血抑制试验：将肺炎链球菌溶血素蛋白与不同浓度的紫菀酮磷酸盐缓冲溶液（pbs）中混合，然后在37℃下孵育1小时；加入兔红细胞，轻轻混合并在37℃下孵育10分钟；另将pbs替换为离子水作为溶血阳性对照。离心收集上清液，并使用酶标仪检测样品在570 nm的吸光度值并计算溶血率以考察红细胞损伤程度，结果如图3所示。
20.结论：不同浓度的紫菀酮能够使肺炎链球菌溶血素的溶血率显著下降，表明紫菀酮具有显著的溶血抑制效果。
21.试验例4菌落定植试验：将6-8周龄balb/c小鼠通过鼻腔吸入（4
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108 cfu/只）肺炎链球菌建立小鼠肺炎模型；组灌胃给与紫菀酮（50 mg/kg），每12小时给药一次，48小时天后采集肺部组织并进行肺炎链球菌菌落计数，结果如图4所示。
22.结论：经过紫菀酮后，显著降低感染小鼠肺部组织的菌落定植数，甚至恢复到健康组水平，综合得出紫菀酮的效果显著。
23.本发明涉及紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用，通过mic值测定试验、生长曲线试验、溶血试验、菌落定植试验验证了紫菀酮能够抑制肺炎链球菌溶血毒素的溶血活性，高浓度的紫菀酮能够抑制肺炎链球菌的生长，在动物实验中紫菀酮可以有效降低感染肺炎链球菌小鼠肺部组织的菌落定植数。
24.本发明提供了紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的新医用用途，公开了紫菀酮能够抑制肺炎链球菌溶血毒素的活性；紫菀酮对肺炎链球菌d39引起的感染具有良好的效果，具有广泛的医用用途。且紫菀酮不仅仅对肺炎链球菌d39有良好效果，主要对以肺炎链球菌溶血素为主要毒力因子的肺炎链球菌引起的感染都有良好效果。
25.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用，其特征在于，所述的紫菀酮为以紫菀酮为活性成分制成的药学上可接受的任何一种剂型。3.根据权利要求1所述的紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用，其特征在于，所述的应用为紫菀酮在制备用于肺炎链球菌感染性疾病的药物中的应用。4.根据权利要求1所述的紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用，其特征在于，所述的肺炎链球菌感染是指以溶血毒素为主要毒力因子之一的肺炎链球菌引发的感染。

技术总结

本发明涉及医药技术领域，公开了紫菀酮在制备肺炎链球菌溶血素抑制剂中的应用，所述的紫菀酮为以紫菀酮为活性成分制成的药学上可接受的任何一种剂型；所述的应用为紫菀酮在制备用于肺炎链球菌感染性疾病的药物中的应用；所述的肺炎链球菌感染是指以溶血毒素为主要毒力因子之一的肺炎链球菌引发的感染。本发明确定了紫菀酮在一定浓度范围内不影响肺炎链球菌的生长，通过鼻腔吸入使小鼠感染肺炎链球菌D39表明给与紫菀酮能够显著降低肺部感染菌落数量，从而减轻感染所致肺部损伤，综上证明紫菀酮对肺炎链球菌引发的感染具有良好的效果，具有极大的医疗应用价值和使用前景。景。景。