一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂、制备方法及其应用与流程

1.本发明属于兽药领域，特别是涉及一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂、制备方法及其应用。

背景技术：

2.猫传染性腹膜炎，简称猫传腹，是一种发生在猫上的致命异常免疫反应，由猫携带的猫冠状病毒fecv发生变异而引起。猫传腹目前仍为绝症，发病后死亡时间不定，但极少活过一年时间。
3.作为一种首次记载于1963年的疾病，猫传腹的预防、等应对措施皆尚在研究中。作为患猫传腹的先决条件，猫冠状病毒的感染非常常见，惟其变异为腹膜炎病毒的条件尚不明确，因而难以预防。统计结果显示，猫传腹患猫中高达70%为纯种猫，这很可能与纯种猫较弱的免疫力有关。猫传腹少有直接的确诊手段，一般需要根据患猫的临床症状、生化指标和既往历史等因素来进行推断，加之有一些其他猫的疾病与猫传腹症状类似，造成猫传腹有一定的误诊率，因此进一步增加了猫传腹的致死率。
4.猫传腹的主要分为两个方向：抗病毒药物以及调节炎症反应药物，但无论是哪种方向都没有明确而公认的疗效。
5.猫传腹最常用的抗病毒药物是维克公司的猫重组干扰素virbagen omega，但其疗效存在争议；俄罗斯micro-plus公司推出的富雷普尼抗病毒复合物声称可以狂犬病、肠炎、猫瘟狗瘟等，但俄国动物医学界认为该药物实际上没有疗效；而加州大学正在研发一种3c类蛋白酶靶向抑制剂gc376，2017年针对20只实验猫的研究显示，有7只的病情得到控制，但另外13只则在初期病情缓和后再次复发，实验小组被迫予以安乐死。这种药物目前尚未投入商用，但在中国已有宠物医院和个体销售者进行虚假宣传和高额售卖。
6.针对猫传腹最常使用的消炎药物是泼尼松龙，这类皮质激素类药物能暂时缓解患猫的症状，但无法持续有效改善患猫病情；此外针对sass and sass生产的试验物“聚异戊烯免疫刺激剂”（polyprenyl immunostimulant，简称pi）进行的实验发现3只使用了pi的猫传腹患猫的生存期均超过一年时间，但在随后进行的60只患猫pi疗效实验发现其中52只（87%）未能活过200天。
7.截至目前，大部分医生针对猫传腹患猫仍建议以缓解痛苦（治标）为主要目的，并在舒适的环境中对其加以细心照顾、丰富喂食和温暖的陪伴，并无针对患猫体内变异冠状病毒（治本）的特异药物，无法产生明显的效果，不能有效阻止患猫的病情恶化及死亡。

技术实现要素：

8.基于上述情况，本发明的目的在于提供一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂、制备方法及其应用，具有高效、安全、给药方便的优点。
9.为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，按质量百分比计包括：0.2-0.3%的金银花提取物、0.2-0.3%的杜仲提取物、0.08-0.12%芦荟提取物、0.01-0.02%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。
10.作为本发明的一种优选方案，按质量百分比计包括：0.25%的金银花提取物、0.25%的杜仲提取物、0.1%的芦荟提取物、0.02%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。
11.作为本发明的一种优选方案，按质量百分比计包括：0.2%的金银花提取物、0.2%的杜仲提取物、0.08%的芦荟提取物、0.02%的聚六亚甲基双胍，余量为tris-hci缓冲液。
12.作为本发明的一种优选方案，按质量百分比计包括：0.3%的金银花提取物、0.3%的杜仲提取物、0.12%的芦荟提取物、0.03%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。
13.作为本发明的一种优选方案，所述金银花提取物的木犀草苷含量不低于0.05%，所述杜仲提取物的绿原酸含量不低于5%，所述芦荟提取物的芦荟素不低于2%。
14.为解决上述技术问题，另一方面，本发明还提供一种制备上述技术方案所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂的方法，其中金银花提取物、杜仲提取物、芦荟提取物可以采用行业通用的工艺方法、设备制备。优选采用以下方法制备，包括：金银花提取物的制备：采摘后的金银花自然阴干，碾碎后称量适量置锥形瓶中，加入适量70%乙醇，超声处理60 min（40 khz，600 w），冷却后再补加适量70%乙醇，摇匀过滤后将滤液真空干燥4h，得到金银花提取物，粉碎备用；杜仲提取物的制备：取适量杜仲树皮粉碎，添加60%乙醇后，80℃蒸馏提取，第1次提取4h，第2次提取3 h，合并两次的提取液，滤器过滤后在60℃下减压蒸馏浓缩，得到杜仲叶提取物浓缩液，再经冷冻干燥得到杜仲提取物，粉碎备用；芦荟提取物的制备：准确称取新鲜芦荟叶片1000.0g，利用组织匀浆器破碎至浆状，以1：6（g/ml）的料液比添加无水乙醇溶液，65%功率超声处理10min，在45℃条件下浸提30 min，过滤后将滤液真空干燥5 h，得到芦荟提取物，粉碎备用；混合配置：取金银花提取物、杜仲提取物、芦荟提取物、聚六亚甲基双胍盐酸盐，溶解于tris-hci缓冲液，经0.22μm滤器过滤，以最终配置得到质量百分比为金银花提取物0.2-0.3%、杜仲提取物0.2-0.3%、芦荟提取物0.08-0.12%、聚六亚甲基双胍盐酸盐0.01-0.02%的喷雾药剂。
15.作为本发明的一种优选方案，金银花提取物制备完成后，取适量金银花提取物，加入适量50%甲醇，超声处理30 min后，取出放冷，再补加适量的50%甲醇，摇匀并经0.45μm滤器过滤，进行液相谱分析（检测波长350nm）。
16.作为本发明的一种优选方案，杜仲提取物制备完成后，取适量杜仲提取物，用80%乙醇溶解，取适量该溶液与4倍体积的甲醇混合，漩涡混匀，12000rpm离心20 min后，进行液相谱分析（检测波长327nm）。
17.作为本发明的一种优选方案，芦荟提取物制备完成后，取适量芦荟提取物，用甲醇湿润，添加蒸馏水超声提取，经0.45μm滤器过滤后，进行液相谱分析（检测波长354nm）。
18.为解决上述技术问题，另一方面，本发明还提供一种上述技术方案所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂在杀灭猫冠状病毒fecv中的应用。
19.为解决上述技术问题，另一方面，本发明还提供一种上述技术方案所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂在在猫传染性腹膜炎中的应用。
20.综上所述，本发明具有如下有益效果：本发明提供一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂、制备方法及其应用，该喷雾药剂处理2分钟即可高效灭杀绝大多数猫冠状病毒fecv，患传染性腹膜炎的猫规律喷雾给药一段时间后症状明显改善，血清学检测发现疾病相关的异常指标出现良性改变，逐渐趋于或恢复至正常范围，正常指标无明显改变，且本喷雾药剂主要成分为天然植物提取物，无明显毒副作用、具有较高的安全性，非侵入式喷雾给药，无刺激性，在家即可实现，无需送去宠物医院，便捷高效，既实现了患猫的有效，又降低了养宠家庭的时间、人力和经济成本，具有极大的应用市场和发展潜力。
附图说明
21.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所使用的附图作简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
22.图1为本发明的喷雾药剂灭杀猫冠状病毒fecv实验定量pcr结果。
23.图2为本发明的喷雾药剂前后患猫血清学指标检测结果。
具体实施方式
24.下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的具体实施方式进行详细描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
25.实施例一一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，按质量百分比计包括：0.2-0.3%的金银花提取物、0.2-0.3%的杜仲提取物、0.08-0.12%芦荟提取物、0.01-0.02%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液，金银花提取物的木犀草苷含量不低于0.05%，杜仲提取物的绿原酸含量不低于5%，芦荟提取物的芦荟素不低于2%。
26.实施例二一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，按质量百分比计包括：0.25%的金银花提取物、0.25%的杜仲提取物、0.1%的芦荟提取物、0.02%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。
27.实施例三一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，按质量百分比计包括：0.2%的金银花提取物、0.2%的杜仲提取物、0.08%的芦荟提取物、0.02%的聚六亚甲基双胍，余量为tris-hci缓冲液。
28.实施例四
一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，按质量百分比计包括：0.3%的金银花提取物、0.3%的杜仲提取物、0.12%的芦荟提取物、0.03%的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。
29.实施例五一种制备猫传染性腹膜炎的喷雾药剂的方法，包括：金银花提取物的制备：采摘后的金银花自然阴干，碾碎后称量适量置锥形瓶中，加入适量70%乙醇，超声处理60 min（40 khz，600 w），冷却后再补加适量70%乙醇，摇匀过滤后将滤液真空干燥4h，得到金银花提取物。
30.金银花提取物制备完成后，取适量金银花提取物，加入50%甲醇，超声处理30 min后，取出放冷，再补加适量的50%甲醇，摇匀并经0.45μm滤器过滤，进行液相谱分析（检测波长350nm）。经检测，其木樨草苷含量≥0.05%。
31.杜仲提取物的制备：取适量杜仲树皮粉碎，添加60%乙醇后，80℃蒸馏提取，第1次提取4h，第2次提取3 h，合并两次的提取液，滤器过滤后在60℃下减压蒸馏浓缩，得到杜仲叶提取物浓缩液，再经冷冻干燥得到杜仲提取物。
32.杜仲提取物制备完成后，取适量杜仲提取物，用80%乙醇溶解，取适量该溶液与4倍体积的甲醇混合，漩涡混匀，12000rpm离心20 min后，进行液相谱分析（检测波长327nm）。经检测，其绿原酸含量≥5%。
33.芦荟提取物的制备：准确称取新鲜芦荟叶片1000.0g，利用组织匀浆器破碎至浆状，以1：6（g/ml）的料液比添加无水乙醇溶液，65%功率超声处理10min，在45℃条件下浸提30 min，过滤后将滤液真空干燥5 h，得到芦荟提取物。
34.芦荟提取物制备完成后，取适量芦荟提取物，用甲醇湿润，添加蒸馏水超声提取，经0.45μm滤器过滤后，进行液相谱分析（检测波长354nm）。经检测，其芦荟素含量≥2%。
35.混合配置：取金银花提取物、杜仲提取物、芦荟提取物、聚六亚甲基双胍盐酸盐，溶解于tris-hci缓冲液，经0.22μm孔径滤器过滤，以最终配置得到质量百分比为金银花提取物0.2-0.3%、杜仲提取物0.2-0.3%、芦荟提取物0.08-0.12%、聚六亚甲基双胍盐酸盐0.01-0.02%的喷雾药剂。
36.其中，优选为金银花提取物0.25%、杜仲提取物0.25%、芦荟提取物0.1%、聚六亚甲基双胍盐酸盐0.02%，tris-hci缓冲液的ph为7。
37.本发明制备的喷雾药剂处理2分钟即可高效灭杀绝大多数猫冠状病毒fecv，患传染性腹膜炎的猫规律喷雾给药一段时间后症状明显改善，血清学检测发现疾病相关的异常指标出现良性改变，逐渐趋于或恢复至正常范围，正常指标无明显改变，且本喷雾药剂主要成分为天然植物提取物，无明显毒副作用、具有较高的安全性，非侵入式喷雾给药，无刺激性，在家即可实现，无需送去宠物医院，便捷高效，既实现了患猫的有效，又降低了养宠家庭的时间、人力和经济成本，具有极大的应用市场和发展潜力。
38.实施例六上述实施例一至四制备得到的喷雾药剂效果相似，以实施例一为代表，研究本发明制备得到的喷雾药剂灭杀猫冠状病毒fecv的效果。具体过程如下：该喷雾药剂灭杀猫冠状病毒fecv结果：取10μl该喷雾药剂与一定量的猫冠状病毒fecv悬液混合，分别在25℃、39℃条件下处理2分钟，然后将病毒转染细胞，采用定量pcr法
检测病毒转染率或表达变化，利用graphpad prism 8作图并分析。如图1所示，定量pcr结果显示该喷雾药剂在2个温度条件下处理2分钟均可灭杀90%以上的猫冠状病毒fecv。
39.实施例七上述实施例一至四制备得到的喷雾药剂效果相似，以实施例一为代表，研究本发明制备得到的喷雾药剂猫传染性腹膜炎的效果。具体过程如下：该喷雾药剂猫传染性腹膜炎的结果：于患猫进食前10分钟进行鼻腔喷雾给药，每次喷雾3-4下（约0.5ml），每日3次。给药前及规律给药一个月后进行血清学指标检测。结果发现80%患猫（实验患猫10只）症状明显得到缓解，食欲逐步恢复，精神好转，活动力恢复，血清学检测发现正常的指标无明显变化，而异常的指标逐步趋于正常值范围（如图2所示，为8只患猫的平均值），另外2只患猫由于患病时间久、年龄偏大，效果较其他不够明显。
40.尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
41.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

技术特征：

1.一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，其特征在于，按质量百分比计包括：0.2-0.3％的金银花提取物、0.2-0.3％的杜仲提取物、0.08-0.12％芦荟提取物、0.01-0.02％的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。2.根据权利要求1所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，其特征在于，按质量百分比计包括：0.25％的金银花提取物、0.25％的杜仲提取物、0.1％的芦荟提取物、0.01％的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。3.根据权利要求1所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，其特征在于，按质量百分比计包括：0.2％的金银花提取物、0.2％的杜仲提取物、0.08％的芦荟提取物、0.01％的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。4.根据权利要求1所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，其特征在于，按质量百分比计包括：0.3％的金银花提取物、0.3％的杜仲提取物、0.12％的芦荟提取物、0.02％的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为tris-hci缓冲液。5.根据权利要求1-4中任一项所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂，其特征在于，所述金银花提取物的木犀草苷含量不低于0.05％，所述杜仲提取物的绿原酸含量不低于5％，所述芦荟提取物的芦荟素不低于2％。6.一种如权利要求1-5中任一项所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂的生产工艺，其特征在于，包括：金银花提取物的制备：采摘后的金银花自然阴干，碾碎后称量适量置锥形瓶中，加入适量70％乙醇，超声处理60min(40khz，600w)，冷却后再补加适量70％乙醇，摇匀过滤后将滤液真空干燥4h，得到金银花提取物，粉碎备用；杜仲提取物的制备：取适量杜仲树皮粉碎，添加60％乙醇后，80℃蒸馏提取，第1次提取4h，第2次提取3h，合并两次的提取液，滤器过滤后在60℃下减压蒸馏浓缩，得到杜仲叶提取物浓缩液，再经冷冻干燥得到杜仲提取物，粉碎备用；芦荟提取物的制备：芦荟提取物的制备：准确称取新鲜芦荟叶片1000.0g，利用组织匀浆器破碎至浆状，以1：6(g/ml)的料液比添加无水乙醇溶液，65％功率超声处理10min，在45℃条件下浸提30min，过滤后将滤液真空干燥5h，得到芦荟提取物，粉碎备用；混合配置：取杜仲提取物、芦荟提取物、聚六亚甲基双胍盐酸盐，溶解于tris-hci缓冲液，经0.22μm孔径滤器过滤，以最终配置得到质量百分比为杜仲提取物0.2-0.3％、芦荟提取物0.08-0.12％、聚六亚甲基双胍盐酸盐0.01-0.02％的喷雾药剂。7.权利要求5所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂在杀灭猫冠状病毒fecv中的应用。8.权利要求5所述的猫传染性腹膜炎的喷雾药剂在猫传染性腹膜炎中的应用。

技术总结

本发明涉及一种猫传染性腹膜炎的喷雾药剂、制备方法及其应用，其中，本喷雾药剂按质量百分比计包括：0.2-0.3％的金银花提取物、0.2-0.3％的杜仲提取物、0.1-0.15％芦荟提取物，0.01-0.02％的聚六亚甲基双胍盐酸盐，余量为Tris-HCI缓冲液。本发明的喷雾药剂处理2分钟即可高效灭杀绝大多数猫冠状病毒FECV，患传染性腹膜炎的猫规律喷雾给药一段时间后症状明显改善，血清学检测发现疾病相关的异常指标出现良性改变，逐渐趋于或恢复至正常范围，正常指标无明显改变，且本喷雾药剂主要成分为天然植物提取物，无明显毒副作用、具有较高的安全性，非侵入式喷雾给药，无刺激性，在家即可实现，无需送去宠物医院，便捷高效。便捷高效。便捷高效。