(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910248894.9
(22)申请日 2019.03.29
(71)申请人 嘉兴卓盛生物科技有限公司
地址 314100 浙江省嘉兴市嘉善县晋阳东
路568号
(72)发明人 庄冉 郝志军 周广军
(74)专利代理机构 北京中政联科专利代理事务
所(普通合伙) 11489
代理人 燕宏伟
(51)Int.Cl.
C12N 9/16(2006.01)
C12N 1/20(2006.01)
D21C 5/00(2006.01)
D21C 5/02(2006.01)
C12R 1/085(2006.01)
(54)发明名称
的胶黏物控制酶试剂
(57)摘要
中性酯酶的制备方法及用于废纸造纸工艺
的胶黏物控制酶试剂，所述用于废纸造纸工艺的
胶黏物控制酶试剂的各组分的重量百分比含量
为：中性酯酶(酶活力≥10000u/ml)：50％-60％；
内切纤维素酶(酶活力≥5000u/ml)：10％-15％；
脂肪酶(酶活力≥200u/ml)：15％-25％；稳定剂：
20％；其中，中性酯酶由蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus )发酵制备。本发明所提供的胶粘物控制
酶可以有效水解醋酸乙烯酯(PVAc)，使之变成具
有水溶性的低分子物质。水解后的产物可稳定分
散在纤维表面，同时表面粘性降低，使其附聚成
大胶粘物颗粒的可能性大大减小，并且能附着在
纤维表面随纸张带出系统而不会造成纸的品质
下降，从而使胶粘物影响生产现象得到有效控
制。
本发明还包括一种中性酯酶的制备方法。权利要求书2页 说明书9页CN 109957558 A 2019.07.02
C N 109957558
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109957558 A
1.中性酯酶的制备方法，其包括以下步骤：
Step101：菌株选育：通过采集土壤、利用溴甲酚紫染法和发酵测酶法筛选出多株产酶菌株、再利用物理法结合化学法诱变得到一株酯酶的高产菌株JO1，对该高产菌株JO1进行形态特征及5.8SrDNA基因两侧的内转录间隙进行序列分析以确定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，所得到的蜡样芽孢杆菌的生物学特性为：菌体呈杆状，染均匀，G +、兼性需氧，形成芽胞，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列；
Step102：菌种培养：将选育出的蜡样芽孢杆菌培养在斜面培养基上并使该蜡样芽孢杆菌经该斜面培养基传代5代以上经测试该蜡样芽孢杆菌的产酶能力保持稳定。所述斜面培养基配方为：牛肉膏1％～3.0％，酵母膏1％～5.0％，蛋白胨1％～7.0％，葡萄糖1％～3.0％，氯化钠0.5％～2.0％，氯化钙0.2％～1.0％，尿素0.05％～2.0％，琼脂1.5％～2.0％，其余为水； Step103：菌种优化：所述蜡样芽孢杆菌通过摇瓶试验，分别对不同碳源、氮源、无机盐、装液量、摇床转速、起始pH值、培养温度、培养周期进行了试验，以得到高产果胶酶系的最适培养基和摇瓶培养条
件，经过试验，得到的培养基和摇瓶培养条件是：培养基配方：乳清粉3％、麦麸2％、葡萄糖1％、玉米浆2.0％、氯化钙0.2％、玉米胚芽粉1.5％、硫酸铵0.1％，硫酸镁0.05％，生物素0.0001％，水88.45％，其中所述各组分之和为100％；
Step104：制备所述蜡样芽孢杆菌的发酵醪液：将在培养基中培养成熟的蜡样芽孢杆菌由斜面接种到一级种子罐、再从一级种子罐接种到二级种子罐，最后将大种量接种到产酶发酵罐以生产出发酵醪液以制得发酵醪液，其中：
一级种子罐的培养条件：培养温度37℃±1℃，搅拌转速160r/min，罐压0.1MPa，通气量1：0.33，培养周期12小时，种子成熟标准为菌体90％以上呈单体，染均匀，酯酶酶活力检不出，pH值5.6左右；
二级种子罐的培养条件：培养温度37℃±1℃，搅拌转速150r/min，罐压0.1MPa，通气量1：0.28，培养周期8小时，种子成熟标准为菌体90％以上呈单体，染均匀，酯酶酶活力略微检出，pH值5.6左右；
发酵罐的培养条件：培养温度37℃±1℃，搅拌转速0时150r/min、8时200r/min，32时180r/min，罐压0.1MPa，通气量0时1：0.22、18时1：040、32时1：0.30，发酵周期50小时±2小时，前8时每隔4小时、后期每隔2小时检测pH值、菌体形态、酶活力一次，放罐条件是：pH值上升至6.5+，酶活力不再增加、菌体90％以上形成芽孢并有部分发生自溶现象。
2.如权利要求1所述的中性酯酶的制备方法，其特征在于：通过配比所加入水的含量的大小，使得所述斜面培养基的pH值7.2±0.1，并在0.1MPa的气压下灭菌30分钟，形成空白斜面。
3.如权利要求1所述的中性酯酶的制备方法，其特征在于：所述斜面培养基配方为牛肉膏1％，酵母膏1％，蛋白胨1％，葡萄糖1％，氯化钠0.5％，氯化钙0.2％，尿素0.05％，1.5％-2.0％琼脂，其余为水。
4.如权利要求1所述的中性酯酶的制备方法，其特征在于：所述发酵酯酶系活力最高达到2300μmol//ml，平均水平为1860μmol/ml。
5.如权利要求1所述的中性酯酶的制备方法，其特征在于：所述发酵醪液经过高分子絮凝、管式离心、板框过滤、超滤浓缩、纸板硅藻土除菌、标准化制备成中性酯酶酶活力≥
2
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议