【摘要】 目的 研究由黄芩苷制备黄芩素的最佳工艺。方法 采用直接酸水解法和热裂解法相比较，以黄芩素的含量和得率为指标，对其制备工艺进行优化。结果 热裂解方法中当温度超过200℃时，可以获得含量为94.47%以上的黄芩素，得率不高于41．64%，而直接酸水解方法获得黄芩素的含量为92．15%以上，且得率为66．03%以上。结论 直接酸水解法制备黄芩素工艺简单可行，得率较高，实用性强。 【Abstract】 Objective To study the optimal prepared process for Baicalei from Baicalin. Methods With the content and the yield Baicalei of as the indexes, compared the direct acid-splitting with the pyrolysis, the process will be optimized. Results when pyrolytic temperature reaches 200℃，the content and the yield of Baicalei are respectively more than 94．47% and less than 41．64%，which are respectively more than 92．15% and 66．03% by the direct acid-splitting. ConclusionThe process for Baicalei by the direct acid-splitting is simple, feasible and has strong practicability; also the yield rate of Baicalei is high.
【Key words】 Baicalei; Prepared process; Acid-splitting; Pyrolysis.
黄芩(Scutcnana Baicalensis Ceorgi)为唇形科植物黄芩的干燥根，主要功效为清热燥湿、泻火解毒、止血安胎。黄芩中主要成分为黄酮类化合物，其中含量较高的有效成分有黄芩苷(Baicalin)、汉黄芩苷(Wogonoside)、黄芩素(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)等，目前药物代谢研究表明，黄芩苷和汉黄芩苷为前药，黄芩素和汉黄芩素为二者的真正药效物质基础。药理学研究表明，黄芩素具有多种药理作用，如抗菌、抗病毒、抗炎、抗变态反应、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗肿瘤、抗凝、抗血栓形成和保护肝脏、心脑血管、神经元等作用。目前临床主要用于抗炎和抗菌。但由于黄芩素在原药材中的含量很低，很有必要开辟黄芩素的药源，通常都采用直接酸水解、热裂解和酶催化水解等方法将来源较广的黄芩苷制备成黄芩素。由于酶催化水解不易实现工业化生产，成本也较高。因此本文旨在研究黄芩苷的直接酸水解法和热裂解法，以期筛选黄芩素制备的最佳工艺。
1 仪器与试剂
岛津LC-20A高效液相分析仪（SPD-20A紫外检测器）；SX-2马福炉(上海仪器实验设备厂)；BS210S型电子天平（北京塞多利斯天平公司；黄芩苷（本室自制，经峰面积归一化含量为：96．66%）；黄芩素对照品（批号111595-200301）；谱甲醇；双重蒸馏水；其他化学试剂皆为分析纯。 2 实验方法
2．1 热裂解法 取洁净的20 ml称量瓶10个，取约0．03 g的黄芩苷，分别加盖密封称量瓶中。先在马福炉中放置铝制试管架，将马福炉升至规定温度，然后将称量瓶置于试管架上，分别在规定的温度、规定时间进行实验，待受热变化后，取出放凉。
2．1．1 供试品的制备 将称量瓶中内容物充分刮下，置于三角锥形瓶中，密闭。加50 ml甲醇称重，超声30 min，放凉称重，补足减失重量。滤过、滤液置于100 ml量瓶中，残渣用少
量甲醇洗涤3次，洗涤液一并置于同一量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀。精密量取1 ml置于10 ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，0．45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2．2 直接酸水解[１] 取黄芩苷粗粉0．5 g置小三角烧瓶中，加规定量浓硫酸，用玻璃棒搅匀，滴加蒸馏水2 ml，放置15 min后，将此溶液在搅拌下倾入100 ml水中，析出黄沉淀，滤取沉淀，用蒸馏水洗至中性，减压真空干燥。
2．2．1 供试品的制备 称取以上所得黄芩素干燥品1．63 mg，精密称定，置10 ml容量瓶中，加8 ml甲醇超声溶解，再以少量甲醇定容至刻度，摇匀，0．45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2．3 黄芩素含量测定方法学考察
2．3．1 谱条件[2]谱柱：Hypersil ODS C18（5 μm,4．6 mm×250 mm,大连伊利特）；检测器：SPD-20A (SHIMADZU)；工作站：CS-Light；流动相：甲醇-0．4%磷酸水溶液(47∶53)；柱温：35℃；流速：1 ml/min，检测波长：278 nm。
2．3．2 对照品溶液的制备 取黄芩素1．10 mg，精密称定，置10 ml容量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0．45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2．3．3 线性关系的考察 取黄芩素(0．110 mg/ml)标准品溶液2、4、6、8、10、12 μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到黄芩素回归方程：Y = 523 050．8X，R = 0．999 7，说明黄芩素在0．22~1．32 μg范围内线性关系良好。
2．3．4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μl，连续进样5次，记录谱图。测得各共有峰的相对峰面积RSD＜3％，相对保留时间RSD＜1％。表明仪器精密度良好。
2．3．5 重复性试验 取同一样品5份，按供试品溶液制备方法进行制备，分别进样，记录
谱图。测得各共有峰相对峰面积的RSD＜3％，相对保留时间的RSD＜1％。结果表明实验重现性良好。
2．3．6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、8、16、24 h测定，记录谱图。结果表明供试品溶液在24 h内稳定，RSD＜1．5%。
3 实验结果与分析
3．1 热裂解法所得测定结果见表1、2。
从以上表1、2中表明：在密闭的条件下，黄芩苷随温度升高分解速度加快，在低于200℃，分解速度小，高于200℃，特别是接近其熔点（223℃），分解速度极快。黄芩苷分解产物为黄芩素（熔点：265）和葡萄糖醛酸，黄芩素具有较高的热稳定性，葡萄糖醛酸在180℃以下能保持稳定，但是180℃以上，也会分解失水，会转变成黑的物质，覆盖在分解产物表面，从而影响黄芩素的分离和得率，使得其得率最高也仅为41．05%。
3．2 直接酸水解结果见表3。
4 结论
由以上分析结果可知，综合考虑黄芩素的含量和得率，黄芩苷直接酸水解制备黄芩素为其制备的最佳工艺。
5 讨论
5．1 由黄芩苷的结构可知，黄芩苷为黄芩素与葡萄糖醛酸形成的苷，根据苷键裂解生成苷元和糖的方法，以及兼顾方法的简单化和可行性，我们重点考察的直接酸水解和热裂解的方法，以黄芩素的含量和得率为指标，将二者进行比较，从而筛选出酸水解为最佳工艺。
5．2 本实验热裂解时采用的是马福炉加热，由于其加热惯性太大，不好控温，因此裂解温度一般是控制在±3℃的范围内。从而造成了一些误差和不便，至使实验重现性较差，而在直接酸水解操作过程中，我们重点考察了不同浓硫酸体积对黄芩苷水解的影响，最终发现2．5～３ ml时得率最高，总之酸水解整个操作过程较易于控制，且实验重现性好，为黄芩素制备的最佳工艺。
5．3 黄芩素有三个邻位的羟基，性质不稳定，容易被氧化转为醌类衍生物而显绿，pH、光照、温度对其稳定性均有影响，三个因素中pH和光照对其稳定性影响较大，所以在黄芩素制备操作过程中，应尽量避光；在碱性条件下，黄芩素的稳定性较差，因此，黄芩素的制备过程中应避免使用碱性溶剂。
参考文献
1 冀春茹.中药化学实验技术与实验.河南科学技术出版社，1986：273-280.
2 中华人民共和国药典委员会编．中国药典(2005年版)一部.北京：化学工业出版社，2005：562-563.
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