(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810086338.1
(22)申请日 2018.01.30
(71)申请人 绵阳师范学院
地址 621000 四川省绵阳市高新区绵兴西
路166号
(72)发明人 姜立春 田徽 阮期平
(74)专利代理机构 北京悦成知识产权代理事务
所(普通合伙) 11527
代理人 樊耀峰 高艳丽
(51)Int.Cl.
A61K 36/78(2006.01)
A61P 31/04(2006.01)
A23L 33/00(2016.01)
A61K 36/288(2006.01)
(54)发明名称蒲公英复合酵素及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种蒲公英复合酵素及其制备方法和用途。该制备方法包括如下步骤：(1)将包括蒲公英和鱼腥草的原料药粉碎，分别取40～50重量份蒲公英、50～60重量份鱼腥草与水混合，得到混浊液；(2)采用果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶和胰蛋白酶对所述混浊液进行酶解，得到酶解液；(3)将营养物质加入所述酶解液，然后灭菌，得到培养基；(4)向所述培养基中接种酵母菌进行厌氧发酵培养18～30h，然后接种乳酸菌进行静置发酵培养30～120h，得到培养产物；(5)将所述培养产物进行固液分离，得到所述复合酵素。本发明的方法可以减少发酵时间，所得复合 酵素的抑菌作用更显著。权利要求书1页 说明书7页CN 108186784 A 2018.06.22
C N 108186784
A
1.一种蒲公英复合酵素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将包括蒲公英和鱼腥草的原料药粉碎，分别取40～50重量份蒲公英、50～60重量份鱼腥草与水混合，得到混浊液；
(2)采用果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶和胰蛋白酶对所述混浊液进行酶解，得到酶解液；
(3)将营养物质加入所述酶解液，得到培养基；
(4)向所述培养基中接种酵母菌进行厌氧发酵培养18～30h，然后接种乳酸菌进行静置发酵培养30～120h，得到培养产物；
(5)将所述培养产物进行固液分离，得到所述复合酵素。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，水的用量为蒲公英和鱼腥草总重量的5～15倍。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，蒲公英为45～50重量份，且鱼腥草为50～55重量份。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，酶解的pH值为6～7，酶解温度为50～65℃，酶解时间为3～8h。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，基于混浊液的总重量，果胶酶的用量为0.05～0.5wt％，纤维素酶的用量为0.05～0.5wt％，木聚糖酶的用量为0.05～0.5wt％，胰蛋白酶的用量为0.03～0.2wt％。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述营养物质包括0.1～0.5wt％酵母膏、1～5wt％铵盐、0.02～0.2wt％锌盐、0.02～0.2wt％镁盐和0.3～0.8wt％磷酸盐；以上重量百分数均是基于所述酶解液的总重量。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)的厌氧发酵培养中，酵母菌的接种量为所述培养基的0.3～1.5wt％，发酵温度为26～35℃，发酵时间为20～28h。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)的静置发酵培养中，乳酸菌的接种量为所述培养基的0.2～1.0wt％，在35～40℃下发酵培养28～38h，然后在60～75℃下发酵培养25～60h。
9.一种蒲公英复合酵素，其特征在于，其通过权利要求1～8任一项所述的制备方法获得。
10.根据权利要求9所述的蒲公英复合酵素在制备具有抑菌作用的药物或保健品中的用途。
权 利 要 求 书1/1页CN 108186784 A
蒲公英复合酵素及其制备方法和用途
技术领域
[0001]本发明涉及一种复合酵素及其制备方法和用途，尤其是一种蒲公英复合酵素及其制备方法和用途。
背景技术
[0002]细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染；临床上以寒战、高热、皮疹、关节痛及肝脾肿大为特征；部分可有感染性休克和迁徙性病灶。病原微生物自伤口或体内感染病灶侵入血液引起急性全身性感染。临床上，部分患者还可出现烦躁、四肢厥冷及紫绀、脉细速、呼吸增快、血压下降等。[0003]目前具有抑菌作用功能的中药及保健食品较多，大多为普通中药加工品，疗效一般。复合酵素是一种包含氨基酸的具有特殊生物活性的物质，它存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能、消化食物、修复组织等生命活动的一种必需物质。复合酵素在人体内起作用。除了先天性原因缺酵素，导致人的生理机能不正常外，人从年轻到衰老，体内的酵素从旺盛到不足，摄入的养料不容易消化吸收，依靠摄取养料来合成酵素的能力下降，造成恶性循环，新陈代谢便趋于缓慢，容易疲劳，一旦患病就不易痊愈。为了延缓衰老，防病治病，增强体质，需要补充多种酵素。作为具有生命活力的独特保健品产品，复合酵素有着巨大的养生前景。
[0004]CN107373252A公开了一种蒲公英发酵液的制备方法，按照蒲公英7～8份、水1～3份的质量比混合，破碎至平均粒径1～3mm，得蒲公英浆液；按照蒲公英浆液质量，添加0.05～0.2％的1万U/g的纤维
素酶、0.05～0.2％的2～5万U/g的果胶酶，在酶解温度40～50℃下酶解1～5小时，得蒲公英酶解液；将蒲公英酶解液采用嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌等多种有益菌联合发酵35～50天得到蒲公英发酵液。一方面，上述专利文献的发酵时间太长不利于工业化生产；另一方面，上述专利文献仅仅认为蒲公英酵素饮料可以促进肠道有益菌的增殖，抑制有害菌的繁殖及腐败物质形成，起到调节肠道菌平衡、增强免疫、促进睡眠、延缓衰老等作用，其抑菌作用并不显著。
[0005]因此，仍然需要一种蒲公英复合酵素的制备方法，其可以缩短发酵时间，从而便于工业化生产。此外，仍然需要提高蒲公英复合酵素的抑菌效果。
发明内容
[0006]本发明的目的在于提供一种蒲公英复合酵素的制备方法，其可以缩短发酵时间。本发明的另一目的在于提供一种蒲公英复合酵素，抑菌效果得到提高。本发明的再一目的在于提供一种蒲公英复合酵素的用途。本发明的目的是通过如下技术方案实现的。[0007]一方面，本发明提供一种蒲公英复合酵素的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)将包括蒲公英和鱼腥草的原料药粉碎，分别取40～50重量份蒲公英、50～60重量份鱼腥草与水混合，得到混浊液；
[0009](2)采用果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶和胰蛋白酶对所述混浊液进行酶解，得到酶
解液；
[0010](3)将营养物质加入所述酶解液，然后灭菌，得到培养基；
[0011](4)向所述培养基中接种酵母菌进行厌氧发酵培养18～30h，然后接种乳酸菌进行静置发酵培养30～120h，得到培养产物；
[0012](5)将所述培养产物进行固液分离，得到所述复合酵素。
[0013]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，水的用量为蒲公英和鱼腥草总重量的5～15倍。
[0014]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，蒲公英为45～50重量份，且鱼腥草为50～55重量份。
[0015]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(2)中，酶解的pH值为6～7，酶解温度为50～65℃，酶解时间为3～8h。
[0016]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(2)中，基于混浊液的总重量，果胶酶的用量为0.05～0.5wt％，纤维素酶的用量为0.05～0.5wt％，木聚糖酶的用量为0.05～0.5wt％，胰蛋白酶的用量为0.03～0.2wt％。
[0017]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(3)中，所述营养物质包括0.1～0.5wt％酵母膏、1～5wt％铵盐、0.02～0.2wt％锌盐、0.02～0.2wt％镁盐和0.3～0.8wt％磷酸盐；以上重量百分数均是基于所述酶解液的总重量。
[0018]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(4)的厌氧发酵培养中，酵母菌的接种量为所述培养基的0.3～1.5wt％，发酵温度为26～35℃，发酵时间为20～28h。
[0019]根据本发明的制备方法，优选地，步骤(4)的静置发酵培养中，乳酸菌的接种量为所述培养基的0.2～1.0wt％，在35～40℃下发酵培养28～38h，然后在60～75℃下发酵培养25～60h。
[0020]另一方面，本发明提供一种蒲公英复合酵素，其通过上述任一项制备方法获得。[0021]再一个方面，本发明提供上述蒲公英复合酵素在制备具有抑菌作用的药物或保健品中的用途。
[0022]本发明通过选择合适的酶和菌，使得发酵时间减少，从而更加有利于工业化生产。本发明利用酶法进行水解，然后利用酵母菌、乳酸菌对蒲公英和鱼腥草进行发酵处理，使产品中不但富含原有中药的功能活性成分，并且提升了产品的抑菌作用。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0024]本发明的复合酵素也可以称之为发酵组合物。其可以为发酵原液，也可以为发酵粉。用于发酵的原料药包括蒲公英和鱼腥草；优选仅有蒲公英和鱼腥草组成。
[0025]蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)属于多年生草本植物；富含维生素A、维生素C及钾，也含有铁、钙、维生素B2、维生素B1、镁、维生素B6、叶酸及铜。蒲公英全草含蒲公英甾醇、胆碱、菊糖、果胶等。蒲公英根中含蒲公英醇、蒲公英甾醇、β-香树脂醇、豆甾醇、β-谷甾醇、胆碱、有机酸、果糖、蔗糖、葡萄糖、葡萄糖甙等。蒲公英具有清热解毒，利尿散结，抗菌和抗肿瘤作用；用于急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒
发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎和尿路感染等。
[0026]鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)含癸酰乙醛，月桂醛，α-蒎烯和芳樟醇等；还含甲基正壬基甲酮，樟烯，月桂烯，柠檬烯，乙酸龙脑酯，丁香烯等；另外含阿福甙，金丝桃甙，芸香甙，绿原酸，β-谷甾醇，硬脂酸，油酸，亚油酸等。鱼腥草叶含槲皮甙；花和果穗含异槲皮甙。鱼腥草具有清热解毒，利尿消肿作用，用于肺炎，肺脓疡，热痢，疟疾，水肿，淋病，白带，痈肿，痔疮，脱肛，湿疹，秃疮，疥癣。
[0027]本发明的蒲公英复合酵素的制备方法包括如下步骤：(1)粉碎分散步骤；(2)酶解步骤；(3)培养基制备步骤；(4)发酵步骤：(5)分离步骤。任选地，还可以包括(6)浓缩干燥步骤。下面进行详细介绍。
[0028]在本发明的粉碎分散步骤中，将包括蒲公英和鱼腥草的原料药粉碎，分别取40～50重量份蒲公英、50～60重量份鱼腥草与水混合，得到混浊液。可以分别将蒲公英和鱼腥草等原料药粉碎，然后称取，再与水混合；也可以先称取蒲公英和鱼腥草等原料药，然后一起粉碎，再与水混合。所述原料药可以粉碎至20目以下，优选为50目以下，更优选为100目以下。通过控制原料药的粒径，可以进一步减少发酵时间。在本发明中，蒲公英可以为40～50重量份、优选为45～50重量份。鱼腥草的用量可以为50～60重量份、优选为50～55重量份。根据本发明的一个实施方式，蒲公英为50重量份、鱼腥草为50重量份。根据本发明的另一个实施方式，蒲公英为50重量份、鱼腥草为45重量份。这样组合使得复合酵素抑菌作用更显著。
[0029]在本发明的粉碎分散步骤中，水的用量为蒲公英和鱼腥草总重量的5～15倍；优选为8～10倍。采用这样的配比，有利于酶解和发酵过程。水可以为蒸馏水或去离子水等，只要不影响酶解和发酵过程即可。
[0030]在本发明的酶解步骤中，酶解的pH值可以为6～7，优选为6.5～6.8；酶解温度可以为50～65℃，优选为55～60℃，更优选为52～58℃；酶解时间可以为3～8h，优选为3～6h，更优选为3.5～5h。根据本发明的一个具体实施方式，酶解的pH值为6.5，酶解温度为55℃，酶解时间为3.5h。采用本发明的酶解条件，能够使上述三种生物酶对原料药进行充分酶解，从而减少发酵时间。
[0031]在本发明的酶解步骤中，采用果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶和胰蛋白酶对所述混浊液进行酶解，得到酶解液。基于混浊液的总重量，果胶酶的用量为0.05～0.5wt％，优选为0.08～0.2wt％；纤维素酶的用量为0.05～0.5wt％，优选为0.08～0.2wt％；木聚糖酶的用量为0.05～0.5wt％，优选为0.08～0.2wt％；胰蛋白酶的用量可以为0.03～0.2wt％，优选为0.05～0.15wt％，更优选为0.1～0.15wt％。在本发明中，果胶酶的酶活力可以为15～55万U/g，优选为25～50万U/g，更优选为35～50万U/g。纤维素酶的酶活力可以为20～55万U/ g，优选为25～55万U/g，更优选为35～50万U/g。木聚糖酶的酶活力可以为15～60万U/g，优选为25～50万U/g，更优选为35～50万U/g。胰蛋白酶的酶活力可以为15～55万U/g，优选为25～50万U/g，更优选为35～50万U/g。根据本发明的一个具体实施方式，果胶酶的酶活力为50万U/g，纤维素酶的酶活力为50万U/g，木聚糖酶的酶活力为50万U/g，且胰蛋白酶的酶活力为50万U/g。
[0032]采用上述种类和用量的生物酶时，能够将原料药充分酶解，为发酵培养提供氨基酸、单糖、寡糖等原料，从而减少发酵时间。
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